Анализ in vitro для изучения микробных взаимодействий в ко-культуре

Аннотация

Источник: Temkin, M. I. и др. Высококачественные кокультурные анализы для изучения микробных взаимодействий. J. Vis. Exp. (2019)

В этом видео демонстрируется in vitro анализ микробных взаимодействий между Corynebacterium propinquum и Staphylococcus в совместной культуре.

Протокол

1. Инокуляция целевых организмов

ПРИМЕЧАНИЕ: После ночной инкубации убедитесь, что культуры мутные. Некоторые бактериальные культуры могут флокулизироваться на дне пробирки культуры. Вооружитесь в трубках для рассеивания комков и оцените мутность культуры.

1. Подготовьте тарелку, заполняя каждую ямочку пустой пластины на 12 лунок 1,8 мл бульона Brain-heart-infusion (BHI) и 200 мкл целевой культуры на ночь.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Целевой организм — это организм, чей ингибирующий статус определяется с помощью анализа взаимодействия с кокультурой. Для этого эксперимента целевыми организмами являются Staphylococcus spp., выделенные из образцов носовых промываний человека.
2. Размотайте и нанесите стерильный штамп на мишень. Аккуратно перемещайте культуры в колодцах, следя за тем, чтобы культуры не загрязняли соседние колодцы.
3. Поднимите штамп для инокуляции и убедитесь, что на каждом кончике штампа есть капля разбавленной целевой культуры.
4. Подготовьте контрольную пластину монокультуры, разместив штамп на невакцинированной биоанализной пластине и аккуратно покачивая штамп так, чтобы капля посева инокуляла каждую яму. После снятия штампа для инокуляции в колодцах биоанализной пластины должна быть видна капля культуры.
   1. Если какие-либо скважины не инокулированы штампом инокуляции из-за неравномерного уровня среды, с помощью пипетки нанесите 3 мкл разбавленной ночной культуры на правую сторону скважин.
5. Инокулируйте биоанализные пластины, как сделано выше (см. шаг 1.4.1), но выровняйте штамп так, чтобы кончики совпадали с правой стороной пластины с 12 лунками. Убедитесь, что штамп не контактирует с существующей колонией бактерий при инокуляции колодцев.
6. Аккуратно снимите штамп и поставьте его обратно в мишень.
7. Повторяйте прививку для каждой биоанализной пластины, пока все пластины не будут инокулены.
8. Инкубировать биоанализные пластины вверх ногами при нужной температуре в течение 7 дней.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
12-лунковая клеточная культурная пластина, стерильная с крышкой	Bio-one Грейнера	665 180
Агар, бактериологический	VWR	J637
Бульон инфузии мозга и сердца	Dot Scientific	DSB11000-5000