Оценка колонизации кореней томатов патогенной бактерией с использованием жизнеспособного количества клеток

Аннотация

Источник: Маттисс, А. Г. Прикрепление бактерий к поверхностям растений, измеряемое в лаборатории. J. Vis. Exp., (2018)

В этом видео демонстрируется протокол измерения колонизации корней всходов томатов дикими патогенными бактериями с дефицитом целлюлозы. Жизнеспособные подсчёты плотно прилипших бактерий показывают большую адгезию и формирование микроколоний у дикого штамма, что подчёркивает роль целлюлозы в стабильной колонизации корней.

Протокол

1. Измерение адгезии с использованием жизнеспособных клеток

1. Определите количество жизнеспособных бактерий, связанных с растениями, выращенными на песке
   1. Выньте растение из контейнера и отшлифуйте его. Чтобы вынуть растения из контейнеров, сначала уберите герметичный материал с верхней и нижней части контейнера. Поставьте контейнер на лист стерильной бумаги, аккуратно удалите весь песок или почву и посадите в один большой конический цилиндр, аккуратно постукивая контейнером по поверхности, чтобы разрыхнуть материал.

1. При необходимости используйте лопатку или стержень для ослабления материала по краям, проходящим через дно контейнера.

2. Когда цилиндр песка или почвы с растением свободен на бумаге, разделите его пополам, чтобы показать корень растения. Если хотите, возьмите образцы песка как у края контейнера, так и у корня. Это может быть полезно для определения распространения (а также накопления и роста) бактерий.
3. Измерьте длину корня. Поднимите корень и удалите песок и бактерии, слабо прилипшие к корню (материал ризосферы), окунув корень в определённый объём воды или буфера и аккуратно встряхнув его. Определите жизнеспособное количество клеток бактерий в полученной суспензии, покрывая на подходящую среду, такую как Luria agar. Это отражает количество бактерий, слабо связанных с корнем.
4. Удалять плотно связанные бактерии с помощью соникации и определить их численность.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Семена	Любой	Н/Д	Запишите номер партии семян и сорт
Песок	Sea sand Fisher Scientific	S25
Песок	Сигма-Олдрич	S9887
Монетеры	Stuewe & Sons, Inc.	Конусообразные тенеры Рэя-Лича	Доступно множество различных размеров, подходящих для того типа растения, которое вы хотите выращивать
Ванный соникатор	Любая компания по научным снабжениям	Н/Д
Парафильм	Любая компания по научным снабжениям	Н/Д