$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Дендритные клетки (ДК) можно рассматривать часовых иммунной системы, которые играют важнейшую роль в его возбуждении и реакции на инфекцию 1. Обнаружение патогенных антигена наивно домена через распознавания образов рецепторы (РРСС), которые способны распознавать определенные сохраняющиеся структуры называются патоген-связанные молекулярные модели (PAMPS). Обнаружение PAMPs по РС вызывает внутриклеточный сигнальный каскад в результате чего их активации и перехода к зрелой DC. Этот процесс, как правило, характеризуется производство интерферона типа 1, наряду с другими провоспалительных цитокинов, регуляция клеточных поверхностных маркеров, таких как MHCII и CD86 и миграцию зрелых постоянного тока для слива лимфатические узлы, где взаимодействие с Т-клетки, инициирует адаптивного иммунного ответа 2, 3. Таким образом, контроллеры домена ссылку врожденной и адаптивной иммунной системы.
Способность анализировать молекулярные сети постоянного тока основной ответ на различные патогенные имеет решающее значение для лучшего понимания регулирование этих сигнальных путей и их индуцированных генов. Он также должен способствовать развитию округ Колумбия, вакцин против инфекционных заболеваний и опухолей. Тем не менее, это направление было сильно мешают трудности трансфекции первичных контроллерах домена 4.
Вирус трансдукции методы, такие как лентивирусов системы, как правило, используются, но имеют много ограничений, таких как сложность и биологически опасных рисков (с соответствующими затратами) 5,6,7,8. Кроме того, доставка продуктов вирусного гена увеличивает иммуногенность тех трансдуцированных домена 9,10,11,12. Электропорация была использована со смешанными результатами 13,14,15, но мы первыми сообщили использование высокой пропускной трансфекции протокол и убедительно доказать свою полезность.
В этом докладе мы суммируем оптимизированных коммерческих протокол для высокой пропускной трансфекции первичных человеческих DC, с ограниченным токсичности клеток и отсутствие постоянного созревания 16. Трансфекция эффективности (GFP из плазмиды) и жизнеспособности клеток были более чем на 50% и 70% соответственно. FACS анализ установленных отсутствие увеличения выражение созревание маркеров CD86 и MHCII в трансфекции клеток, а QRT-PCR, не выявили регуляция IFNβ. Используя этот протокол электропорации, мы предоставляем доказательства для успешной трансфекции миРНК с контроллерами домена и эффективной сбить целевой ген RIG-I, ключевых вирусных рецепторов признание 16,17, как на РНК и белка.