Методическая статья
Изменение 3-D в пробирке система представлена в которых рост характеристики нескольких опухолевых клеточных линий в разведенной базальной мембраны коррелирует с спящих или пролиферативного поведения опухолевых клеток при метастатической вторичный узел В естественных условиях.
Рецидив рака молочной железы часто происходит после длительного латентного периода, в течение которого признаки рака отсутствуют, а метастазы могут не проявляться клинически в течение многих лет после удаления первичной опухоли и проведения адъювантной терапии. Вероятным объяснением этого явления является то, что опухолевые клетки заселяют метастатические очаги, обладают устойчивостью к традиционным методам терапии и остаются в состоянии покоя в течение длительного времени 1-4.
Ранее существование спящих раковых клеток в вторичных очагах описывалось как состояние покоя одиночных клеток, которые не пролиферируют и не подвергаются апоптозу 5-7. Более того, было показано, что эти одиночные клетки диссеминируют из первичной опухоли на ранней стадии прогрессирования заболевания 8-10 и находятся в состоянии остановки роста в костном мозге, крови и лимфатических узлах пациентов 1,4,11. Таким образом, понимание механизмов, регулирующих состояние покоя или переход в пролиферативное состояние, имеет решающее значение для поиска новых мишеней и методов вмешательства с целью предотвращения рецидива заболевания. Однако выяснение механизмов, регулирующих переход от покоя опухоли к метастатическому росту, было затруднено отсутствием доступных модельных систем.
in vivo и ex vivo модельные системы для изучения метастатического прогрессирования опухолевых клеток были описаны ранее 1,12-14. Однако эти модельные системы не позволили в режиме реального времени и с высокой пропускной способностью получить механистическое понимание того, что именно инициирует переход одиночных спящих опухолевых клеток к пролиферации, приводящей к метастатическому заболеванию. Недавно мы разработали трехмерную (3D) систему in vitro для моделирования характеристик роста in vivo клеток, которые проявляют либо спящее (D2.OR, MCF7, K7M2-AS.46), либо пролиферативное (D2A1, MDA-MB-231, K7M2) метастатическое поведение in vivo. Мы продемонстрировали, что опухолевые клетки, проявляющие состояние покоя in vivo в месте метастазирования, остаются квиесцентными при культивировании в трехмерном (3D) экстракте базальной мембраны (BME), тогда как клетки с высокой метастатической активностью in vivo легко пролиферируют в 3D-культуре после различных, но относительно коротких периодов квиесценции. Важно отметить, что, используя модельную систему 3D in vitro, мы впервые показали, что состав внеклеточного матрикса (ECM) играет важную роль в регуляции перехода спящих опухолевых клеток в пролиферативное состояние, и подтвердили это в исследованиях in vivo15-17. Таким образом, модельная система, описанная в данном отчете, представляет собой метод in vitro для моделирования дормантности опухоли и изучения перехода к пролиферативному росту, индуцированного микроокружением.
1. Клеточные культуры поддержание покоя и метастатических опухолевых клеточных линий
2. Пролиферации клеток анализа покоящихся (в состоянии покоя) и метастатические (пролиферирующих) опухолевые клетки культивировали в 3D-BME системы
Культивирование спящие / мет....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Основные механизмы, которые поддерживают распространяются опухолевые клетки в состоянии покоя или привести к их переходу к метастатического роста остаются малоизвестными. Это явление было чрезвычайно трудно учиться в человеческих пациентов 4,12 и несколько доклинических моделях были разработаны для решения этого вопроса. Тем не менее, некоторые в естественных условиях и экс-естественных условиях модельных систем для опухоли покоя были охарактеризованы (обзор в 1,12). Тем не менее,.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Нет конфликта интересов объявлены.
Работа выполнена при частичной поддержке Внутренние программы исследований Национального института рака.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Название реагента | Компания | Номер в каталоге | Комментарии |
| DMEM высокий уровень глюкозы в | Invitrogen | 11965-118 | |
| DMEM низкий уровень глюкозы | Invitrogen | 11885-092 | |
| Фетальной телячьей сыворотки (FBS) | Invitrogen | 10091-148 | |
| Фактор роста снижается 3-D Cultrex базальной мембраны Извлечение | Trevigen ООО | Концентрация белка между 14-15mg/ml | |
| D2.0R и D2A1 клеточных линий | 5,19 | ||
| K7M2 и K7M2AS1.46 клетки | 20 | ||
| MCF-7 и MDA-MB-231 клеток рака молочной железы | АТСС | ||
| 8 камеры стекло системе | (Лаборатория-ТЭК, Thermo Scientific) | 177402 | |
| Сотовые Титр 96 Водные одно решение пролиферации клеток анализа комплект | Promega | G3580 | |
| VECTASHIELD монтажа среде с DAPI | Векторные Laboratories, Inc | H-1200 | |
| Нормальная осла сыворотке | Джексон ImmunoResearch | 017-000-121 | |
| Elisa ридер | Bio-Tec | Запись 490nm | |
| Конфокальной микроскопии | Цейсс-LSM-510 | Увеличение x63 |
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE
Запросить разрешение