$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.
1. Анестезия и хирургия животных
- Взвесьте и обезболите мышь с помощью одобренной вами схемы анестезии от местного комитета по уходу за животными.
- Выполните щипцы для защемления хвоста или пальца ноги щипцами, чтобы подтвердить глубокую анестезию перед операцией.
- Поместите мышь в стереотаксический аппарат и зафиксируйте ее голову.
- Нанесите глазную мазь на оба глаза, чтобы они оставались влажными. Следуйте местным рекомендациям по уходу за животными в отношении пред- и послеоперационной анальгезии.
- Сбрейте волосы с помощью хирургических машинок для стрижки. Сделайте небольшой разрез (12-15 мм) в середине обнаженной хирургической области ножницами. С помощью щипцов аккуратно оттяните кожу головы от средней линии.
- Аккуратно отделите кожу и удалите остатки ткани. Очистите череп с помощью ватных палочек, покрытых перекисью водорода.
- Просверлите два небольших отверстия радиусом 1,0-1,5 мм с левой и правой сторон черепа, чтобы можно было вставить записывающие микроэлектроды в области M2 под стереомикроскопом (рис. 1A).
заметка: Стереотаксическое расположение двустороннего М2: 1,94 мм спереди от брегмы, 1,0 мм латерально к средней линии и 0,8-1,1 мм вентрально к твердой мозговой оболочке.
- Аккуратно удалите твердую мозговую оболочку вольфрамовой иглой.
- Стеклянные боросиликатные микропипетки (внешний диаметр: 1,0 мм) в виде записывающих микроэлектродов с сопротивлением 1-2 МОм.
- С помощью механических микроманипуляторов в отверстия (под углом 60°, рис. 1В) введите два отдельных записывающих микроэлектрода, заполненных 0,5 М NaCl.
2. Записи LFP у двусторонних M2 мышей
- Медленно опустите левый и правый стеклянные электроды в соответствующие координаты двустороннего M2 (рисунок 1C).
- Для контроля качества проверьте сопротивление каждого электрода с помощью дифференциального усилителя перед захватом LFP.
- Установите процесс записи на частоту 0,1 Гц верхних частот и 1 000 Гц низких частот с 1 000-кратным усилением.
- Соберите оцифрованные необработанные данные LFP о спонтанной активности не менее 60 с в стабильном состоянии, при этом мыши дышат равномерно с частотой дыхания 2 вдоха в секунду под анестезией.
- После записи медленно выньте электроды из мозга, а затем усыпьте мышей путем быстрого шейного вывиха.
- Сохраняйте данные и анализируйте их в автономном режиме.
