Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
1.6K просмотров
⸱
8 июля 2025 г.
Bhattarai, P., et al. Моделирование токсичности амилоида-β42 и нейродегенерации в мозге взрослых рыбок данио. J. Vis. Exp. (2017).
Это видео демонстрирует процедуру введения мономерных амилоидных пептидов в передний мозг взрослых рыбок данио-рерио для создания амилоидной токсичности, имитируя повреждение нейронов, наблюдаемое при болезни Альцгеймера
1. Получение пептида Aβ42
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Таблица 1: Последовательности пептидов Aβ42 и TR-Aβ42.
Телефон| пептид | Пептидная последовательность | МВт (г/моль) |
| Аβ42 | DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA | 4514.1 |
| ТР-Аβ42 | GWTLNSAGYLLGKINLKALAALAKKILDAEFRHRDSGYEVHHQKLVFFAE....... |
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Fmoc-защищенные аминокислоты | IRIS Biotech GmbH (Марктредвиц, Германия) | Аминокислоты на основе Fmoc для синтеза твердофазных пептидов (SPPS) | |
| N,N,N',N'-Тетраметил-О-(1H-бензотриазол-1-ил)гексафторфосфат урона (HBTU) | IRIS Biotech GmbH (Марктредвиц, Германия) | РЛ-1030 | активатор |
| Оксима | IRIS Biotech GmbH (Марктредвиц, Германия) | РЛ-1180 | Супрессор рацемизации |
| N,N-диизопропилэтиламин | IRIS Biotech GmbH (Марктредвиц, Германия) | СОЛ-003 | основа |
| Диметилформамид | IRIS Biotech GmbH (Марктредвиц, Германия) | СОЛ-004 | растворитель |
| N-метилморфолин | Thermo Fisher (Kandel) GmbH, Германия | А12158 | основа |
| 1-Гидрат гидроксибензотриазола (HOBT) | Sigma-Aldrich Co. LLC. (Сент-Луис, Миссури, США) | 157260 ОЛДРИЧ | активатор |
| Пиперидин | MERCK KGaA (Дармштадт, Германия) | 822299 | Реагент для снятия защиты Fmoc |
| Дихлорметан (ДХМ) | MERCK KGaA (Дармштадт, Германия) | 106050 | растворитель |
| Муравьиная кислота (ФК) | MERCK KGaA (Дармштадт, Германия) | 100264 | Буферный компонент для ВЭЖХ |
| Трифторуксусная кислота (ТЖК) | MERCK KGaA (Дармштадт, Германия) | 808260 (Английский | Реагент Clevage Mixture |
| Триизопропилсилан (ТИС) | MERCK KGaA (Дармштадт, Германия) | 233781 ОЛДРИЧ | Реагент Clevage Mixture |
| Ацетонитрил (для UPLC/LCMS) | Sigma-Aldrich Laborchemikalien GmbH | 34967-1Л | растворитель |
| Ацетонитрил (для ВЭЖХ) | VWR International Ltd, Англия | 83639.32 Материал 83639.32 | растворитель |
| Диэтилетер | VWR International Ltd, Англия | No 23811.326 Материал 23811.326 | Растворитель для осаждения пептидов |
| Дитиотритол (ДТТ) | VWR International Ltd, Англия | 0281-25Г | Реагент Clevage Mixture |
| ТентаГель S RAM Fmoc катковая амидная смола | Rapp Polymere GmbH (Тюбинген, Германия) | С30023 | Твердофазный для СППС |
| Пептидный синтез шприцы 5 мл с входящими в комплект фильтрами | Intavis AG (Кёльн, Германия) | 34.274 | Реакционная трубка для SPPS и для клевы из твердой фазы |
| Фильтр из политетрафторэтилена (ПТФЭ) | Сарториус Стедтим (Обань, Франция) | 11806-50-Н | Фильтрация осажденных пептидов |
| Шприцевой фильтр из поливинилиденфторида (ПВДФ) | Carl Roth GmbH + Co. KG Карлсруэ | КС78.1 | Предварительная фильтрация для ВЭЖХ |
| Пептидный синтезатор | Intavis, Кёльн, Германия | ResPep SL | Автоматизированный синтезатор твердофазных пептидов |
| Водный альянс ВЭЖХ | Уотерс, Милфорд, Массачусетс, США | Воды 2998, Воды e2695 | Полупрепаративная обратная фазовая жидкостная хроматография высокого давления (ВЭЖХ) |
| PolymerX, размер валика 10μм, 250x10 мм | Phenomenex Ltd. Германия | 00Г-4328-Н0 | Колонка ВЭЖХ на основе дивинилбензола из пористого полистирола |
| Milli-Q Advantage A10, с фильтром Milli-Q | EMD Millipore Corporation, Биллерика, штат Массачусетс, США | LCPAK0001 | Система очистки воды |
| Фильтрационная установка | Сарториус Стедтим (Обань, Франция) | 16307 | Фильтрационная установка для осаждения пептидов |
| UPLC Aquity с УФ-детектором | Уотерс, Милфорд, Массачусетс, США | М09УПА 664М | Аналитический ВЭЖХ с обратной фазой ультра для ЖХ-МС |
| ACQUITY UPLC BEH C18, размер борта 1,7 мкм, 50x2,1 мм | Уотерс, Милфорд, Массачусетс, США | 186002350 | Аналитическая колонка С18 |
| Детектор ACQUITY TQ | Уотерс, Милфорд, Массачусетс, США | КББ908 | Масс-спектрометрия с ионизацией электрораспылением (ЭСИ-МС) |
| CHRIST ALPHA 2-4 LD plus + vacuubrand RZ6 | Martin Christ Gefriertrocknungsanlagen GmbH, Германия | 16706, 101542 | Лиофилизатор с вакуумным насосом |
| Считыватель пластин Paradigm | Бекман Коултер | ||
| MESAB (этил-м-аминобензоат метансульфонат) | Сигма-Олдрич | А5040 | |
| Чашки Петри | Сарштедт | 821.472 | |
| Фосфатно-солевой буфер | Life Technologies, GIBCO | 10010-056 | |
| игла | Бектон-Дикинсон | 305178 | |
| Препарирующий микроскоп | Olympus, Leica, Zeiss | Зависит от производителя | |
| Пинцет Дюмон | Мировые прецизионные приборы | 501985 | |
| Щипцы для рассечения Gillies | Мировые прецизионные приборы | 501265 | |
| Стеклянные инъекционные капилляры | Мировые прецизионные приборы | ТВФ10 | |
| ПикоСопло | Мировые прецизионные приборы | 5430-12 | |
| Пневматический PicoPump | Мировые прецизионные приборы | SYS-PV820 | |
| Кольцевой осветитель; Кольцевая световая направляющая | Паркленд Сайентифик | ILL-RLG |
