Создание модели крысы с глиобластомой

Аннотация

Источник: Bolcaen, J., et. al., облучение под контролем ПЭТ и МРТ модели крысы с глиобластомой с использованием микрооблучателя. J. Vis. Exp. (2017)

Это видео демонстрирует процедуру создания модели крысы с глиобластомой путем стереотаксического введения клеток глиобластомы, вызывающей опухоль головного мозга, в префронтальную кору.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были рассмотрены местным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. F98 GB Rat Cell Model

1. Культивируйте клетки F98 GB, полученные из ATCC, в монослоях с использованием модифицированной Eagle Medium от Dulbecco, 10% телячьей сыворотки, 1% пенициллина, 1% стрептомицина, 1% L-глутамина и 0,1% амфотерицина b, и поместите в инкубатор с_CO2 (5% CO2 и 37 °C).
2. Инокулируйте клетки глиомы в мозге самок крыс Fischer F344 (масса тела 170 г).
   1. Используйте стерильные инструменты и всегда носите стерильные перчатки.
   2. Обезболите крыс, вводя смесь 74 мг/кг кетамина и 11 мг/кг ксилазина внутрибрюшинно (IP) с помощью инсулинового шприца (1 мл, 29 г). Подтвердить обезболивание можно отсутствием реакции на рефлекс отмены конечности. Иммобилизуйте крыс в стереотаксическом аппарате с использованием точек фиксации для носа и ушей. Нанесите карбомерный гель для глаз, чтобы предотвратить сухость глаз во время анестезии.
   3. Побрейте крысу от уровня глаз до задней части черепа и продезинфицируйте кожу повидон-йодом.
   4. Обнажите череп через разрез на скальпе по средней линии в 2 см и сделайте отверстие диаметром 1 мм (алмазное сверло) на расстоянии 2 мм сзади и 2,5 мм латерально от брегмы в правом лобном полушарии.
   5. Вставьте инсулиновую иглу со стереотаксическим управлением (29 G) и введите 5 μL клеточной суспензии (20 000 F98 GB) на глубину 3 мм с помощью контроллера микрошприцевого насоса (настройки: ввести (I50), скорость 1 нл/с (001 SDN)).
   6. Медленно вытащите шприц и закройте разрез костным воском. Зашить кожу и продезинфицировать ее повидон-йодом.
   7. Стабилизируйте температуру тела животного после операции с помощью красной лампы. Следите за пробуждением крысы до тех пор, пока она не придет в сознание, достаточное для поддержания лежачего положения грудины. Не возвращайте животное в компанию других животных до полного выздоровления. Содержание всех животных в контролируемых условиях окружающей среды (12 часов нормального цикла света/темноты, 20-24 °C и относительная влажность 40-70%) с кормом и водой в неограниченном количестве. Обязательно внимательно следите за животными, следя за их массой тела, пищей, потреблением воды, а также за их активностью и нормальным поведением. Используйте смертельную дозу пентобарбитала натрия для усыпления животных (160 мг/кг), если наблюдается снижение массы тела на 20% или когда нормальное поведение серьезно ухудшается (например, отсутствие груминга).

Материалы