В этом видео показано создание модели окклюзии средней мозговой артерии у щенка крысы. Внутренняя сонная артерия (ВСА) обнажается, и закрепляется лигатура для ограничения кровотока. Окклюза вводится через ВСА, чтобы добраться до средней мозговой артерии. Затем щенку дают восстановиться перед дальнейшим анализом.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Генерация окклюзии средней мозговой артерии у детеныша крысы с целью индуцирования локальной ишемии головного мозга
783 просмотров
⸱
28 апреля 2025 г.
В этой статье
Аннотация
Протокол
Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.
1. Окклюзия средней мозговой артерии
- Взвесьте щенка и убедитесь, что он имеет правильный вес (19-21 г). Обезболите щенка 3% изофлураном в 100% кислороде (O2) и убедитесь, что он не реагирует на защемление ноги. Поддерживайте температуру поверхности тела в диапазоне от 35,5 °C до 37 °C с помощью грелки под операционным этапом.
- Закрепите животное в лежачем положении с помощью ленты через плечевые области. С помощью стерильных ватных тампонов нанесите на переднюю шейную область раствор повидон-йода с последующим нанесением тампона с содержанием 70% этанола в воде двойной дистилляции, чередуя каждый раствор в общей сложности четыре тампона.
- Местно инфильтрируйте 0,25% бупивакаина в запланированное место разреза. С помощью стереоскопа сделайте разрез по средней линии от 5 до 7 мм спереди шейного отдела, чтобы обнажить общую сонную артерию (ОСА). Установите 2-4 ретрактора, чтобы полость оставалась открытой, а артерия открытой.
- Найдите внутреннюю сонную артерию (ВСА), затылочную артерию (ОА) и наружную сонную артерию (ЭКА). Ухаживайте за артериями, чтобы получить четкий обзор. Будьте осторожны, чтобы не потревожить блуждающий нерв.
ПРИМЕЧАНИЕ: Для фиктивно прооперированных щенков разрез оставляют открытым, а артерии обнажают, после чего разрез закрывают. Общее время анестезии эквивалентно времени операции по окклюзии. - Отрежьте 1,5 см шелковой плетеной шовной нитью 6-0. Расплетите шов, вытягивая отдельные нити. Следите за тем, чтобы отдельные пряди были аккуратными и не потрепанными.
ПРИМЕЧАНИЕ: При необходимости разгладьте изношенные концы, окунув одну прядь в стерильную воду и обработав прядь кончиками щипцов. - Удерживая шовную прядь щипцами под углом 45 градусов, переместите щипцы широким дуговым движением, чтобы пройти под ВСА так, чтобы кончики щипцов оказались между ВСА и ОА.
ПРИМЕЧАНИЕ: Если вскрытие выполнено хорошо, этот шаг будет относительно легким. Если ВСА и ОА соприкасаются, будьте осторожны, чтобы не разорвать артерии при использовании щипцов для изоляции ВСА. Если кровотечение возникло, надавите на артерию щипцами до тех пор, пока кровотечение не остановится. Впитайте кровь с помощью стерильного тампона. - Возьмитесь за конец нити нити, который удерживается щипцами, и потяните его так, чтобы конец был легко доступен. Освободите прядь от щипцов и вытащите щипцы из-под ICA, обратив движение на шаг 1.5 (Рисунок 1A).
- Завяжите временную лигатуру вокруг ICA у основания, ближе всего к тому месту, где она отделяется от CCA.
ПРИМЕЧАНИЕ: Важно завязать узел так, чтобы конец пряди, который будет вытягиваться для снятия узла, был достаточно длинным (более 1 мм, менее 3 мм), чтобы его можно было легко захватить щипцами, обеспечивая при этом наличие соответствующего количества шовной нити на другой стороне узла для втягивания. - Осторожно втяните ВСА в сторону и с помощью зажима закрепите прядь на лишней коже возле подмышечной впадины на стороне, противоположной разрезу. Убедитесь, что эта втягивающая нить достаточно натянута, чтобы остановить кровоток, прежде чем переходить к следующему шагу, чтобы свести к минимуму риск неконтролируемого кровотечения. Обратите внимание, что артерия плоская и бледная.
ПРИМЕЧАНИЕ: Не втягивайте слишком много, так как это может привести к частичному или полному разрыву ICA. Втягивание можно отрегулировать непосредственно перед проведением артериотомии, потянув за прядь на стороне, противоположной зажиму. - С помощью щипцов под углом 45° захватите еще одну неплетеную прядь шовного материала и протяните ее под ВСА и вокруг него, как в шаге 1.5. Расположите эту прядь латерально к ретракционной цепи (Рисунок 1B).
ПРИМЕЧАНИЕ: Этот шаг также может быть выполнен перед опровержением. Если вы не уверены в качестве втягивания, этот узел можно очень слабо завязать перед следующим шагом. - Разрежьте артериотомию на 0,2 мм посередине между перевязанными и развязанными лигатурами, ближе к перевязанной лигатуре.
ПРИМЕЧАНИЕ: Кровь, оставшаяся в перевязанной артерии, может опорожняться через артериотомию, но не должна превышать 5 μл. Если кровотечение продолжается, осторожно потяните за ретракционную прядь, чтобы увеличить ретракцию, с осторожностью избегайте повреждения артерии от чрезмерного напряжения. - С помощью метрической линейки измерьте окклюзирующий шов и разрежьте шов с дополнительным припуском 2-3 мм для удаления окклюдера во время реперфузии. Удерживайте окклюдер щипцами под углом 45 градусов и используйте прямые щипцы, чтобы создать изгиб на соответствующей длине, чтобы достичь MCA, отмечая точку остановки для продвижения.
ПРИМЕЧАНИЕ: Длина окклюзии 10 мм от конца силиконового наконечника до изгиба используется для постнатальных щенков или крыс P-10 Sprague Dawley или Long Evans в этом диапазоне веса. - С помощью щипцов под углом 45° введите нейлоновый окклюзионный шов с силиконовым покрытием в артериотомию и переместите шов к изгибу, обозначающему заранее определенное расстояние до MCA (Рисунок 1C). Убедитесь, что продвижение происходит плавно; Немедленно прекратить продвижение, если чувствуется сопротивление. Во время продвижения направьте шов в направлении, параллельном CC/ECA, по направлению к головке.
ПРИМЕЧАНИЕ: Если шов продвигается дорсально к позвоночнику животного, он может врезаться в крыловидную артерию (ПТА). Если сопротивление ощущается после 3-5 мм продвижения, шов попал в место соединения ЧТА. Выведите окклюдер из артерии до тех пор, пока силиконовая головка не окажется рядом с артериотомией, прежде чем регулировать направление продвижения. Не обязательно полностью удалять окклюдер из артериотомии. - Закрепите окклюдер, связав временную лигатуру с помощью нити из шага 1.10 (Рисунок 1D).
- Снимите зажим втягивающего устройства. Обрежьте пряди обеих временных лигатур так, чтобы прядь узла, за которую натягивают, чтобы ее было легко захватить прямыми щипцами и она была длиннее, чем прядь, которую натягивают, чтобы затянуть узел.
ПРИМЕЧАНИЕ: Пряди должны быть достаточно короткими, чтобы они не запутались в полости после закрытия. - Снимите ретракторы и закройте полость с помощью плетеного шелка 6-0, чтобы создать три-четыре прерывистых шва.
- Извлеките щенка из наркоза и положите его на грелку на комнатный воздух. Наблюдайте за щенком до тех пор, пока он не придет в сознание, достаточное для поддержания лежачего положения на грудине, и убедитесь, что он полностью восстановился, прежде чем возвращать его к матери. Убедитесь, что у щенка поддерживается температура поверхности тела в диапазоне от 35,5 °C до 37 °C.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Рисунок 1: Живые хирургические изображения процедуры tMCAO. (A) Первая прядь шва обвивается вокруг ICA, как описано в шаге 1.6. (B) Первая временная лигатура перевязывается, а ВСА втягивается. Вторая нить шовной нити обвивается вокруг ICA, латерально к первой нити шва, как описано в шаге 1.9. (C) Окклюзионный шовный материал с силиконовым покрытием в...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Isoflourane | Henry Schein | 50033 | Анестезиологический, at 3% |
| Trinocular Surgioscope | World Precision Instruments | PSMT5N | < |
| Sunbeam | 000731-500-000< | ||
| Extech Instruments | 72-5270< | ||
| Fine Science Tools | 18200-20 | ||
| CermaCut Scissors | Fine Science Tools | 14958-09 | |
| Щипцы Dumont #5SF | Инструменты Fine Science | 112522-00 | 2x |
| Dumont #5/45 Щипцы | Fine Science Tools | 11251-35 | 2x |
| B-2 Micro Clamp | Fine Science Tools | 00398-02 | |
| Forcepts for Clamp Application | Fine Science Tools | 00072-14 | < |
| Fine Science Tools | 15000-03 | 2mm режущая кромка | |
| Occlusion Fitures | Doccol | 602123PK10 | 701712PK5Re |
| Ruler | Fine Science Tools | ||
| 6-0 Perma-Hand Silk Reverse Cutting< | 769G | ||
| Euthasol | Virbac | 710101 | 0.22 мл/кг |
| Аппликаторы с хлопковыми наконечниками | Henry Schein | 100-9249 | < |
| VWR | 89097-990 |
