Опустошение зерновых культур на семенные заражения грибками вызвало многочисленные исследовательские усилия, чтобы лучше понять растение-патоген взаимодействия. Для изучения семенного грибковых взаимодействия в лабораторных условиях, мы разработали надежный метод для количественного грибковых воспроизводства биомассы и микотоксинами с ядром биопробы.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Количественная грибковой колонизации, спорогенеза, и производство микотоксинов Использование ядра Биопробы
* These authors contributed equally
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Гниение зерна на семенные заражения грибками представляет собой одну из величайших экономических проблем во всем мире производство зерновых, не говоря уже о серьезных рисков для здоровья человека и животных. Среди производство зерновых, кукурузы, вероятно, наиболее пострадавших сельскохозяйственных культур, в связи с возбудителем вызванного потерями в целостности зерна и загрязнения микотоксинами зерна. Две самые распространенные и проблемные микотоксинов на кукурузу производители пищевых продуктов и кормов процессоров афлатоксин и фумонизин, выпускаемых Aspergillus flavus и Fusarium verticillioides соответственно.
Недавние исследования в области молекулярной растительного взаимодействия возбудителя продемонстрировал перспективы в понимании конкретных механизмов, связанных с завода ответ на грибковую инфекцию и микотоксинами 1,2,3,4,5,6. Поскольку многие лаборатории используют ядро тесты для изучения растительного взаимодействия возбудителя, есть необходимость в стандартизированный метод для количественного различных биологических параметров, поэтомуРезультаты разных лабораториях могут быть перекрестно интерпретировать. Для надежной и воспроизводимой средствами для количественного анализа на семена, мы разработали в лаборатории анализов ядра и последующее методов количественного роста грибов, биомасса, и микотоксинами. Четыре ядра кукурузы стерилизовать засевают в стеклянных флаконах с грибковыми подвески (10 6) и выдерживают в течение определенного периода. Пример флаконов, то выбранный для перечисления конидий на гемоцитометра, эргостерола на основе биомассы анализа высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), афлатоксин количественного использования AflaTest флуорометр метод и фумонизин количественного ВЭЖХ.
Протокол
1. Кукуруза биопроб ядра
- За две недели до, культуры грибным патогенам картофеля на Декстроза агар (PDA) при 28 ° C.
- Выбор ядра с аналогичным размером и формой, желательно плоский, чтобы они лежали на одном уровне с нижней биопроб флаконы, и место в 50 мл пробирки сокола. Ядра выбраны, должны быть произведены одновременно в той же среде для обеспечения того же возраста семян и метаболитов состава.
- Поверхностные стерилизовать ядра путем встряхивания пробирки при комнатной температуре в течение 5 минут с 70% этанола, 1 минута стерильной водой и 10 минут с 6% гипохлорита натрия. Промыть, три раза в течение 5 минут каждый раз, стерильной вод....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Методы, описанные здесь, были испытания и доказала свою надежную в поколение количественные результаты для грибковой колонизации, спорогенеза и производство микотоксинов. Кроме того, эти методы должны быть применимы к семенам из других видов растений, которые чувствительны к загрязнению mycotoxigenic грибов (например, арахис, пшеница, хлопок, фисташки и т.д.). Для компетентного завода-возбудителя анализ взаимодействия, крайне важно, чтобы семена быть живым. Небольшой участок раны на эмбрион стороны ядра облегчает зар.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Мне нечего раскрывать.
Благодарности
Мы хотели бы поблагодарить Брэндона Хассетт и Карлос Ортис за техническую помощь. Эта работа была поддержана грантами NSF IOB-0544428, 0951272, IOS, IOS-а 0925561 доктора Майкла Коломиец, а также Министерства сельского хозяйства США Национального института сельского хозяйства и продовольствия (НИФА), Afri селекции растений и образования грант № 2010-85117 -20539 до доктора. Сет Мюррей, Томас Isakeit, и Михаил Коломиец.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Название реагента | Компания | Каталог # | |
| Картофельный агар с декстрозой | Фишер Scientifc | S71659A | |
| Твин-20 | Фишер Scientifc | BP337-100 | |
| Пластиковый контейнер инкубации | Sterilite | 1713LAB06 | |
| Смеситель | Vicam | 20200 | |
| 24 см складчатый фильтр документы | Vicam | 31240 | |
| 1,5 мкм стекла из микроволокна | Vicam | 31955 | |
| ФППА испытания колонки | Vicam | G1024 | |
| Afrla испытаний разработчика | Vicam | 32010 | |
| Метанол | Vicam | 35016 | |
| Ацетонитрил | Фишер Scientifc | AC14952-0025 | |
| Этанол | Фишер научtifc | AC39769-0025 | |
| C-18 твердых колонке экстракции (Prep сентября SPE C18 колонке) | Фишер Scientifc | 60108-304 | |
| O-phthalaldehyde (OPA) | Sigma Chemical Co | 79760-5г | |
| Борная кислота | Фишер Scientifc | BP168-500 | |
| Борат натрия | Фишер Scientifc | RDCS0330500 | |
| Меркаптоэтанол | Фишер Scientifc | 45-000-231 | |
| Shimadzu HPLC LC-20AT (насос) | Shimadzu Scientific Instruments, Inc | LC-20AT | |
| Zorbax ОРВ колонке (4.6x150mm) | Agilent Technologies | 443905-902 | |
| Shimatzu RF-10Axl детектор флуоресценции | Shimadzu Scientific Instruments, Inc | RF-10AXL | |
| Фосфат натрия | Фишер Scientifc | AC38987-0010 | |
| FB1 стандартам | Sigma Chemical Ко | F1147-1 мг | |
| Хлороформ | VWR | MK444410 | |
| 13 мм шприц фильтр 0,45 мкм мембрана нейлона (HPLC) | Наука Жизни Pall | 4426 | |
| Эргостерол | Sigma-Aldrich | 45 480-50G-F | |
| Сцинтилляционных флаконов | VWR | 66021-602 | |
| Хлористый натрий | Vicam | G1124 |
Ссылки
- Tsitsigiannis, D. I., Keller, N. P. Oxylipins as developmental and host-fungal communication signals. Trends Microbiol. 15, 109-118 (2007).
- Gao, X., Shim, W. -B., Göbel, C., Kunze, S., Feussner, I., Meeley, R., Balint-Kurti, P., Kolomiets, M.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Теги
