Ex Vivo оценке сократимости, утомляемость и аНегпапз в изолированных скелетных мышц

Краткое содержание

Мы описываем метод непосредственного измерения мышечной силы, мышечной силы, сократительная кинетики и утомляемость изолированных скелетных мышц в В пробирке Системы с помощью полей стимуляцию. Ценную информацию о Ca ^{2 +} Обработке свойств и сократительную техники мышц можно получить, используя различные стимулирующие протоколов.

Аннотация

Описанный здесь метод измерения сократимость изолированной скелетной мускулатуры. Такие параметры, как сила мышц, мышечная сила, сократительная кинетики, утомляемость, и восстановления после усталости может быть получена для оценки конкретных аспектов возбуждения сокращения связи (ECC) процессов, таких как возбудимость, сократительная техники и Ca ^{2 +} обработка способности. Этот метод удаляет нерв и кровоснабжение и делает акцент на изолированном скелетные мышцы. Мы регулярно использовать этот метод для выявления генетических компонентов, которые изменяют сократительные свойства скелетных мышц, хотя модуляции Ca ^{2 +} сигнальных путей. Здесь мы описываем вновь выявленных скелетных мышц фенотип, то есть, механик аНегпапз, как пример разнообразной и богатой информации, которая может быть получена с использованием в пробирке анализа сократимости мышц. Сочетание этого анализа с одной анализы клетки, генетический подходы и биохимическихСтрый анализов может предоставить важную информацию о механизмах ECC в скелетных мышцах.

Введение

Скелетные мышцы прикрепляются к костям скелета и генерировать сократительной силы под контролем центральной нервной системы. Возбуждение-сжатия связи (ECC) относится к процессу преобразования электрических стимулов для механического ответа. Ca ^{2 +} сигнализация является важным компонентом сократительной функции скелетных мышц. Эффективное Ca ^{2 +} мобилизации из саркоплазматического ретикулума (СР) является важным компонентом для ECC в мышечных клетках ^{1, 2,} и изменения внутриклеточного Ca ^{2 +} сигнализация лежат в основе соответствующего сократительной дисфункции в ряде мышечных заболеваний ^3-5....

Протокол

Решение составе:

2,5 мМ Ca ^{2 +} Tyrode решение: 140 мм NaCl, 5 мМ KCl, 10 HEPES мм, 2,5 мм CaCl _2, 2 мМ MgCl ₂ и 10 мМ глюкозы

0 мМ Ca ^{2 +} Tyrode решение: 140 мм NaCl, 5 мМ KCl, 10 HEPES мм, 2 мм MgCl _2, 0,1 мМ этиленгликоль тетрауксусной кислоты (EGTA) и 10 мМ глюкозы

Примечание: купание раствор должен быть насыщен на 100% O ₂ при использовании выше решение, но с 95% O ₂ с 5% CO ₂ при использовании бикарбоната на основе буфера рН держать постоянно. 2,5 мМ Ca ^{2 +} добавляется в буфер для к....

Обсуждение

Измерение сократительной силы и утомляемость имеет важное значение для общей оценки функции скелетных мышц. Основной целью этого анализа является выявление изменений в мышечной силе и утомительно свойства при некоторых патологических состояниях, таких как саркопения и мышечной усталости, и проверить действие наркотиков / реагентов на мышечную сократимость. С мышечной силы тесно связано с внутриклеточной Са ^{2 +,} внеклеточный Са ^{2 +} и перекрестных помех между этими двумя, мы можем также собирать инфо.......

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Название реагента	Компания	Номер в каталоге	Комментарии (по желанию)
2-APB	Tocris	1224	Blocker ряда вход Са 2 + каналов, включая ШОС и ГТО и т.д.
SKF96365	Сигма	SKF-96365	Blocker ряда вход Са 2 + каналов, включая ШОС и рецептор-опосредованного вход Са 2 + и т.д.
BTP-2	Millipore	203890-5MG	Относительно конкретных SOC блокаторов
CPA	Сигма	C1530	Реверсивная блокировка SERCA
кофеин	Сигма	C0750	Быстрое действие агониста RyR
Radnoti четыре единицы ткани органа ванна системе	Radnoti	159920
Комбинация поддержки Ткань / стимулирующий электрод	Radnoti	160151	Вертикальная Zig Zag типа с тканевой поддержки
Quad Bridge Amp	ADInstruments	FE224
PowerLab/400	ADInstruments		Этот продукт больше не доступен. Выбрать другой версии системы сбора данных.
Датчики силы (5 мг - 25 г)	ADInstruments	MLT0201/RAD
Диаграмма v4.02	ADInstruments		LabChart 7.3 является последней версией программного обеспечения Chart.
S8800 Двойной импульсный цифровой стимулятор	GRASS TECHNOLOGIES		Этот продукт больше не доступен. S88X Двойной выход прямоугольного импульса стимулятор является новой стимулятора.
РФ трансформатор изолятор	GRASS TECHNOLOGIES	Модель SIU5