Внутрисосудистое перфузии Ink Углерод позволяет надежно визуализации сосудов головного мозга

Mohammad R. Hasan; Josephine Herz; Dirk M. Hermann; Thorsten R. Doeppner

doi:10.3791/4374

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Внутрисосудистое перфузии Ink Углерод позволяет надежно визуализации сосудов головного мозга

15.2K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/4374

⸱

4 января 2013 г.

Mohammad R. Hasan¹ , Josephine Herz¹ , Dirk M. Hermann¹ , Thorsten R. Doeppner¹

¹Department of Neurology, University of Duisburg-Essen Medical School

В этой статье

Краткое содержание

Анализ грызунов цереброваскулярных анатомии играет важную роль в экспериментальных исследованиях инсульта. В этом контексте внутрисосудистого перфузии с цветным латексом была рассмотрена в качестве стандартного инструмента в течение нескольких лет. Однако, этот метод предполагает различные технические ограничения, которые подрывают его воспроизводимости. Здесь мы рассмотрим простой способ для визуализации сосудов головного мозга в воспроизводимым образом. Инъекции смесь двух коммерчески доступных углерода черные чернила через левый желудочек инфаркт результатов в достаточном наполнении сосудов головного мозга с высоким визуализация контраста. Мы успешно применять эту технику, чтобы определить анастомоза между точками церебральных сосудистых территорий мышей с различным генетическим фоном. Мы, наконец, дать показания, что это новый и простой способ окрашивания судна могут быть объединены с трифенилтетразолий хлорид (TTC) окрашивание - широко используемый инструмент для наблюдения и анализа объемов инфаркта у мышей.

Аннотация

Анатомического строения сосудов головного мозга является ключевым фактором для мозга гемодинамики, а также от степени серьезности травмы после ишемических инсультов. Церебральной сосудистой динамически реагирует на различные патофизиологические состояния и оно проявляет значительные различия между штаммами и в условиях генетических манипуляций. По сути, надежная техника для окрашивания внутричерепного судна необходимо в целях изучения патогенеза ишемического инсульта. До недавнего времени, множество различных методов был использован для визуализации мозговой сосудистой включая инъекции смола низкой вязкости, Araldite F, желатина смешивают с различными красителями ¹ (т.е. карминно-красные, тушь) или латекса с ² или без ³ сажи. Перфузии белого латекса соединение через восходящую аорту была впервые сообщил Койл и Jokelainen ^3. Maeda и др. ^2. Изменили протокол, добавив карбоп черные чернила на латекс соединения для улучшения визуализации контрастности сосудов после солевого перфузии головного мозга. Тем не менее, неэффективная и неадекватная перфузия заполнения сосудов часто испытывал из-за высокой вязкости соединения латекса ^4. Таким образом, мы описали простой и экономически эффективный метод, используя смесь двух коммерчески доступных углерода черные чернила (CB1 и CB2) для визуализации мозговой сосудистой воспроизводимым образом ^5. Мы показали, что перфузия CB1 + CB2 у мышей приводит к окрашиванию значительно меньших сосудов головного мозга в более высокую плотность по сравнению с латексом перфузии ^5. Здесь мы описываем наш протокол для определения точки анастомоза между передней (ACA) и средней мозговой артерии (СМА), чтобы изучить судно изменений у мышей с различным генетическим фоном. Наконец, мы демонстрируем возможности нашей техники в переходном церебральной ишемии модели у мышей путем объединения CB1 +CB2-опосредованной судна окрашивания TTC окрашивания в различные степени ишемического повреждения.

Протокол

1. Животные

Эксперименты были проведены в соответствии с руководящими принципами NIH по уходу и использованию лабораторных животных и одобрены местными властями. Для всех экспериментов, C57BL6 / J мышей дикого типа, ApolipoproteinE ^{- / -} (ApoE нокаутом) и SV129 мышей (12-16 недель, 26-30 г массы тела, 5-6 животных в опытной группе) были использованы.

2. Окрашивание сосудов головного мозга с цветной латекс

Приготовить смесь из 25 мкл углерода черными чернилами (Herlitz, Германия) с 0,5 мл соединения латекса (Пебео, Франция) в соотношении 1:20 в EP трубку и нагреть смесь при 37 ° С на водяной бане. Сбо....