Методическая статья

Пассирования оттенков эмбриональных стволовых клеток человека линий с Трипсин

DOI:

10.3791/49

12 октября 2006 г.

В этой статье

Краткое содержание

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В этом видео показано, как в нашей лаборатории регулярно проходы оттенки человеческих линий эмбриональных стволовых клеток трипсином.

Аннотация

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В этом видео показано, как в нашей лаборатории регулярно проходы оттенки человеческих линий эмбриональных стволовых клеток трипсином. Человека эмбриональные стволовые клетки являются артефактами культуры клеток, и, как правило, приобретают кариотипические аномалии с высокой удвоений популяции. Правильное пассажей имеет важное значение для поддержания здорового, недифференцированной, karyotypically нормальные оттенки человеческих стволовых эмбриональных клеточных культур. Во-первых, расширение культуры промывают в PBS для удаления остатков средств массовой информации и сотовых мусора, то клетки с наложением минимальный объем теплого 0,05% трипсина-EDTA. Трипсин остается на клетки на срок до пяти минут, после чего клетки аккуратно выбили с 2 мл серологические пипетки. Клеточной суспензии, собирается и смешивается с большим количеством оттенков средств массовой информации, то клетки собирают нежные центрифугирования. Инактивированной трипсина СМИ смесь снять, и клетки ресуспендировали в подогретого оттенков СМИ. Соответствующем соотношении разделить рассчитывается (в основном от 1:10 до 1:20), и клетки снова высевали на 1-2 день старые пластины, содержащей монослоя облученного мышиных эмбриональных фибробластов фидерные клетки. Вновь посеянных оттенков культуры пластина не трогать в течение 48 часов, то средства массовой информации меняется каждый день после этого. Важно, чтобы не trpsinize до суспензии отдельных клеток, так как это увеличивает риск появления аномалий кариотипа.

Протокол

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Общий

Мы рекомендуем оттаивания не более одного образца в данный момент времени, чтобы обеспечить удобство в обращении. Обработчик должен заботиться, чтобы не оставить культур при комнатной температуре и низкой CO2 в течение длительных периодов времени. Все центрифугирования живых клеток происходит при температуре 500-600 мкг в течение 5 мин при комнатной температуре.

MEFs (мышь эмбриональных клеток для подачи)

  1. Предварительно теплой MEF средствах массовой информации до 37 ° C. Удалить MEF флакон от -80 ° C и сразу же погрузить нижнюю часть трубки в 37 ° С водяной бане. Это должно занять около 30-45 се....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В этом видео мы продемонстрировали, как мы обычно оттенки человеческих прохождения линии эмбриональных стволовых клеток в нашей лаборатории. Эффективное и регулярное расщепление и пассажи очень важны для поддержания здоровых человеческих эмбриональных стволовых клеток. Трипсин опосредованный переход является существенным преимуществом линий оттенков клетки, однако, важно не переусердствовать trypsinize культур или иметь большую долю отдельных клеток во время повторного Платтинг.

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

СМИ оттенков 651,5 мл КО-500 мл DMEM PenStrep 6,5 мл 6,5 мл GlutaMAXTM NEAA 6,5 мл 2-меркаптоэтанол 0.5ul KO сыворотки Замена 65 мл 65 мл Plasmanate bFGF2 (10 нг / мл окончательный) 0,65 мл

Ссылки

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Edmond, M. B. Nosocomial bloodstream infections in United States hospitals: a three-year analysis. Clin. Infect. Dis. 29, 239-244 (1999).
  2. Ramage, G., Bachmann, S., Patterson, T. F., Wickes, B. L., Lopez-Ribot, J. L.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

HuES

Похожие статьи