Конкретных и быстрых протоколов одновременно исследовать функцию правого сердца, воспаление легких, и иммунный ответ описывается как инструмент обучения. Видео и цифры описывают физиологию и микродиссекции методы в организованном командой подход, который адаптирован для использования в малых и больших размеров исследований.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Правого желудочка систолическое давление измерений в сочетании с Harvest легких и иммунной образцы тканей у мышей
* These authors contributed equally
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Функция правого сердца заключается в том, чтобы перекачивать кровь через легкие, тем самым связывая физиологию правых отделов сердца и физиологию легочных сосудов. Воспаление является распространенным модификатором функции сердца и легких, способствуя клеточной инфильтрации, производству цитокинов и факторов роста, а также запуская процессы ремоделирования 1.
По сравнению с левым желудочком, правый желудочек представляет собой насос низкого давления, который работает в относительно узкой зоне изменения давления. Повышенное давление в легочной артерии связано с повышением давления в легочном сосудистом русле и легочной гипертензией 2. Легочная гипертензия часто связана с воспалительными заболеваниями легких, например, хронической обструктивной болезнью легких, или аутоиммунными заболеваниями 3. Поскольку легочная гипертензия дает плохой прогноз для качества и продолжительности жизни, многие исследования направлены на понимание механизмов, которые могут быть мишенью для фармацевтического вмешательства. Основной проблемой для разработки эффективных инструментов лечения легочной гипертензии остается сложность одновременного понимания молекулярных и клеточных изменений в правом отделе сердца, легких и иммунной системе.
Здесь мы представляем процедурный процесс для быстрого и точного измерения изменений давления в правом сердце мышей и одновременного сбора образцов из сердца, легких и иммунных тканей. Метод основан на прямой катетеризации правого желудочка через яремную вену у мышей с закрытой грудью, впервые разработанной в конце 1990-х годов в качестве суррогатной меры давления в легочной артерии5-13. Организованный командный подход способствует очень быстрой технике катетеризации правых отделов сердца. Это дает возможность проводить измерения на мышах, которые самопроизвольно дышат воздухом в помещении. Организация рабочего процесса в отдельных рабочих зонах сокращает временные задержки и открывает возможность одновременного проведения физиологических экспериментов и забора иммунных, сердечных и легочных тканей.
Описанный здесь процедурный рабочий процесс может быть адаптирован для широкого спектра лабораторных условий и дизайнов исследований, от небольших, целенаправленных экспериментов до крупных анализов скрининга лекарств. Одновременное получение данных по физиологии сердца, которые могут быть расширены за счет эхокардиографии5, 14-17 и забора данных из сердца, легких и иммунных тканей, сокращает количество животных, необходимых для получения данных, которые продвигают вперед базу научных знаний. Представленный здесь процедурный процесс также обеспечивает идеальную основу для получения знаний о сетях, связывающих иммунную, легочную и сердечную функции. Те же принципы, изложенные здесь, могут быть адаптированы для исследования других или дополнительных органов по мере необходимости.
Протокол
1. Подготовка
- Подготовьте следующие решения и трубы (таблица 1) следующим образом:
- Хэнкс решение, не кальций, магний или индикатора с пенициллина (100 ЕД / мл) / стрептомицин (100 мкг / мл).
- Фосфатным буферным раствором (PBS), 1x, ни кальций, ни магний.
- Этанол, 70%, составит 500 мл.
- Buffered формальдегида, 7-10% с PBS, составит 500 мл.
- Анестезия решения:
- Avertin. Осторожно добавьте 5 мл 2-метил-2-бутанол до 5 г 2,2,2-Tribromoethanol. После растворения, держать раствор при комнатной температуре в темноте. Возьмите 0,25 мл раствора и разбавить его с 10 мл 1xPBS в стеклянной бутылке дн....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Основным результатом для получения права кривые давления сердца достигается правильное положение правой катетер сердца. Форма кривых давления время имеет решающее значение, потому что правильное размещение катетера в правом желудочке приведет к давлению плато (рис. 4). Spiky кривые, напротив, указывают на катетер, который перемещается дыхания или движения сердца против стенки правого желудочка. Для обнаружения потенциальных проблем со стадии выживания животных, стандартное отклонение p, и частота сердеч.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Экспериментальные потока изложенные здесь обеспечивает быстрое и одновременное измерение давления правого желудочка систолическое и сбор образцов для анализа ответов в легких, сердца и иммунной системы у мышей. Процедура сочетает в себе сердце физиологии измерений, микро-рассечение и последующего урожая ткани для исследования живой клетки, гистологический анализ, или омик-анализ тканей. Вся процедура занимает не более 20 минут на мышь. Из-за рабочей зоны организованного рабочего процесса, 2-3 животных можно изучать одно.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Нет конфликта интересов объявлены.
Благодарности
Эта работа финансировалась Национальным институтом здоровья 1R21HL092370-01 (GG), 1R01 HL095764-01 (GG); R01HL082694 (JW), Американской ассоциации сердца, Учредителей филиал (0855943D, GG); Stony Wold - Герберт фонда, Нью-Йорк (SHP).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Имя | Компания | Номер в каталоге | Комментарии (по желанию) |
| Реагенты | |||
| 2-метил-2-бутанол | Sigma-Aldrich | 152463 | |
| 2,2,2-Tribromoethanol | Sigma-Aldrich | T48402 | |
| дезинфицирующим мылом (покрытия Spray ТБ плюс Steris) | Fisher Scientific | 1629-08 | |
| Этиловый спирт, 200 Proof, абсолютный, безводный ACS / USP класс | Pharmco-AAPER | 111000200 | Разбавить до 70% дистиллированной воды |
| Раствор формальдегида | Sigma-Aldrich | F1635-500ML | Развести до 7-10% образованийldehyde концентрации в концентрации PBS в 1x PBS использованием раствора и воды |
| Хэнкс решение, не кальций, магний | Fisher Scientific | 21-022-CV | |
| Октябрь | Tissue-Tek | 4583 | |
| Пенициллина (10000 ЕД / мл) / стрептомицин (10.000 мг / мл) | Thermo Scientific | SV30010 | |
| Фосфатным буферным раствором (PBS), ни кальций, ни магний, 1x и 10x решения | Fisher Scientific | ||
| Пентобарбитала натрия 26% | Fort Dodge Animal Health | NDC 0856-0471-01 | |
| Лабораторное оборудование | |||
| Пластины 12, 24, 96 а | Сокол | ||
| Передача Pipet | Fisher Scientific | 13-711-9BM | |
| Tube, покрытые ЭДТА | Sarstedt | 2013-08 | |
| Трубы 0,65 мл и 1,7 мл микро-центрифуге | VWR | ||
| Трубы 12 х 75 мм, полипропилен | Fisher Scientific | 14-956-1D | |
| Трубы, различных размеров, полипропилен | Fisher Scientific | ||
| Инструменты | |||
| Пинцет, Дюмон # 5 Fine | Средства изобразительных наук | 11254-20 | |
| Пинцет, дополнительный штраф Грефе-0.5mm советы изогнутые | Средства изобразительных наук | 11152-10 | |
| Пинцет, дополнительно Fiпе Грефе-0.5mm советы прямой | Средства изобразительных наук | 11150-10 | |
| Канюля 18ga, 19 га | BD | Precision Glide иглы | Смена оптимальной длины, притупляются и за ее пределами прохрипел для создания грубой внешней поверхности |
| Ножницы, ножницы Dissector-тонкий лезвия 9см | Средства изобразительных наук | 14081-09 | |
| Шовный для BAL, плетеный шовный материал шелк, 4-0 | Средства изобразительных наук | SP116 | |
| Шовный для катетеризации правых отделов сердца, плетеные шелковые шва, 6-0 | Teleflex медицинских | 18020-60 | |
| Шприц 1 мл | BD | 309659 | |
| Оборудование | |||
| Усилители, PowerLab 4/30 | ADInstrument | Модель ML866 | |
| Катетер, давление F1.4 | Millar Instruments, Inc | 840-6719 | |
| Препаровальная лупа | Variscope | ||
| Щипцы, ножницы Vannas весна-2мм лезвия | Средства изобразительных наук | 15000-00 | |
| Галогенные освещенный бюро лупы | Fisher Scientific | 11-990-56 | |
| Портативный компьютер | Asus | Номер модели A52F i5 процессор; 15-дюймовых | |
| Источник света | Amscope | HL-250- | |
| Группа контроля давления | Millar Instruments, Inc | PCU-2000 | |
| Программное обеспечение, LabChart-Pro V.7 | Н.э. Вприборов |
Ссылки
- Price, L. C., et al. Inflammation in pulmonary arterial hypertension. Chest. 141, 210-221 (2012).
- Olschewski, H., et al. Cellular pathophysiology and therapy of pulmonary hypertension. J. Lab. Clin. Med. 138, 367-377 (2001).
- Hassoun, P. M., et al.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
