Методическая статья

Оценка функции мышц-разгибателей мышц пальцев Longus EX VIVO И передней большеберцовой мышцы В месте У мышей

DOI:

10.3791/50183

⸱

9 февраля 2013 г.

 ,  , 
1Department of Molecular Microbiology and Immunology, School of Medicine, University of Missouri

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Изменения в мышцах конечностей сократительной и пассивные механические свойства имеют важное значение биомаркеров заболевания мышц. Эта рукопись описывает физиологические тесты для измерения этих свойств в мышиной мышцы пальцев разгибателей и передней большеберцовой мышцы.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Движения тела в основном обеспечиваются механической функцией скелетных мышц. Скелетная мускулатура состоит из многочисленных пучков миоволокон, которые окружены внутримышечными соединительными тканями. Каждая миофибра содержит множество миофибрилл, которые проходят продольно по длине миофибрилла. Миофибриллы являются сократительным аппаратом мышц и состоят из повторяющихся сократительных единиц, известных как саркомеры. Саркомерная единица содержит актиновые и миозиновые филаменты, которые расположены на расстоянии Z-дисков и белка титина. Механическая функция скелетных мышц определяется сократительными и пассивными свойствами мышцы. Сократительные свойства используются для характеристики величины силы, возникающей во время сокращения мышц, времени генерации силы и времени расслабления мышц. Любой фактор, влияющий на сокращение мышц (например, взаимодействие между актином и миозиновыми филаментами, гомеостаз кальция, соотношение АТФ/АДФ и т.д.), влияет на сократительные свойства. Пассивные свойства относятся к упругим и вязким свойствам (жесткости и вязкости) мышцы при отсутствии сокращения. Эти свойства определяются внеклеточными и внутриклеточными структурными компонентами (например, титином) и соединительными тканями (главным образом коллагеном)1-2. Сократительные и пассивные свойства являются двумя неразделимыми аспектами функции мышц. Например, сгибание локтя осуществляется за счет сокращения мышц в переднем отделе плеча и пассивного растяжения мышц в заднем отделе плеча. Чтобы по-настоящему понять функцию мышц, следует изучить как сократительные, так и пассивные свойства.

Сократительные и/или пассивные механические свойства мышц часто нарушаются при мышечных заболеваниях. Хорошим примером является мышечная дистрофия Дюшенна (МДД), тяжелое заболевание мышечной атрофии, вызванное дефицитом дистрофина 3. Дистрофин – это белок цитоскелета, который стабилизирует мембрану мышечных клеток (сарколемму) во время сокращения мышц 4. В отсутствие дистрофина сарколемма повреждается под действием силы сдвига, создаваемой при передаче силы. Этот разрыв мембраны инициирует цепную реакцию, которая приводит к гибели мышечных клеток и потере сократительного механизма. Как следствие, мышечная сила уменьшается, и мертвые миоволокна заменяются фиброзными тканями. Это более позднее изменение увеличивает мышечную ригидность 6. Точное измерение этих изменений является важным руководством для оценки прогрессирования заболевания и определения терапевтической эффективности новых генных/клеточных/фармакологических вмешательств. В данной работе мы представляем два метода оценки сократительных и пассивных механических свойств мышцы-разгибателя длинного пальца (EDL) и сократительных свойств передней мышцы большеберцовой кости (TA).

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Оценка сократительной и пассивные свойства EDL естественных условиях Ex мышц

Сократительной и пассивных свойств EDL мышцы измеряется бывших естественных помощью Aurora Научно в пробирке тест-системы мышц. См. Таблицу 1 для материалов и оборудования.

1.1 Оборудование подготовки

  1. Соберите ткань органа ванны, обеспечивая oxytube в воде ткань куртки ванны. Прикрепите собранную ванны в мышцах монтажного устройства. Подключите газовой линии, oxytube. Закрепить линии циркуляции воды в воде ткань куртки ванну и поставить игольчатый клапан в ванну дренаж.
  2. Включите циркулирующей водой ванну и отрегулировать температуру до 30 ° С 7. Разрешить 5 PSI (фунтов на квадратный дюйм) 95% O 2 -5% CO 2 течь через oxytube. Наполните ванну с буфером Рингера. Уравновешивают буфером, по крайней мере10 мин с постоянным потоком газа, регулируя oxytube клапана.
  3. Включите инструментов (стимулятор, двухрежимный рычажной системы, и сигнал интерфейса). Загрузите динамического мышечного контроля (DMC) программного обеспечения в соответствии с инструкцией завода-изготовителя.

1,2 EDL рассечение мышц

Все исследования на животных должны быть одобрены Институциональные уходу и использованию животных комитета.

  1. Anesthetize мыши с внутрибрюшинного введения 2,5 мкл / г веса тела коктейль анестетика (см. раздел материалов). На протяжении хирургической процедуры, глубины седации было проверено выполнение ноги шнура. Добавка в размере 10% начальной дозы анестетика управляется при необходимости держать животных под наркозом. Бритье задних конечностей. Поддержание температуры тела на 37 ° C до рассечения процедуру размещения мыши на грелку. Температура тела контролируется постоянно измерения ректальной температЮр использованием теплового зонда.
  2. Поместите мышь на спине на вскрытие доски (рис. 1). Снимите кожу ног, чтобы открыть задние мышцы конечностей. Закрепите ноги на блоке Sylgard с помощью двух портниха контактами, один в ногу, а другой в мышцах гасШз. Место тепла лампы над корпусе мыши для поддержания температуры тела при температуре 37 ° C. Постоянно переливать все открытые мышцы с буфером Рингера. Слейте избыток буфера через вакуумную линию.
  3. Expose дистального сухожилия TA и разгибателей связки под стереомикроскопом анализируя кожу на ноге. Аккуратно удалите фасцию покрытие TA мышцы. Вырезать разгибателей связки, чтобы освободить дистального сухожилия TA.
  4. Вырезать дистального сухожилия TA и использовать его для шелушиться мышцы TA. Осторожно снимите TA мышцы на его проксимального крепления. Поместите тонкий кусок буфера Рингера пропитанной хлопковой рядом с EDL мышцы поглощают кровотечения, вызванные разрывом мышц сосудистой TA. Используйте вакуумную линию, чтобы удалить излишки буфера и крови.
  5. Галстук двойных квадратных узлов следует цикл узел помощью шовного хлеб шелка на стыке сухожилий мышц (MTJ) дистального EDL мышцы (рис. 2). Сделайте разрез в дистальной части двуглавой мышцы бедра, чтобы разоблачить проксимального EDL мышцы. Повторите тот же набор узлов (рис. 2) на MTJ проксимального отдела EDL сухожилия. Прикрепите крючок рычага, либо проксимальных или дистальных узлы с двойным квадратный узел использованием той же линии шва. Отрежьте оставшиеся линии шва.
  6. Вырезать проксимального EDL сухожилия выше проксимального узел шва. Поднимите EDL мышцы с крючка и сократить сосудистую под мышцу. Вырезать дистального сухожилия EDL уступает дистальных узел шва, чтобы удалить EDL мышцы задних конечностей. Изолируйте открытый задних конечностей с куском буфер Рингера пропитанной хлопка.
  7. Прикрепите крючок рычага. Совместите мышцы вертикальномежду двумя электродами. Закрепить дистальной линии шва фиксированной пост. Поднимите ткани ванну, чтобы погрузить мышцы в буфер Рингера. Отрегулируйте покоя напряжение до 1,0 г с использованием двойного грубой / точной стадии перевода и позволит мышцы, чтобы уравновесить течение по крайней мере 10 мин.

1,3 Измерение сократительной и пассивных свойств EDL мышцы

Используйте таблицу 2 для настройки параметров в DMC программное обеспечение для каждого из следующих измерений. Анализ данных с помощью динамического анализа мышцы (DMA) программного обеспечения.

1.3.1 Измерение сократительные свойства мышц EDL

  1. Стимулировать EDL мышцы в три раза при 150 Гц с 60 секунд друг от друга, чтобы стабилизировать мышц 8.
  2. Стимулировать EDL мышцы при различных покоя напряжение для определения оптимальной длины (Lo). Оптимальная длина длина, на которой мышца развивает максимальную напряженность дергаться. Разрешить мышцыотдохнуть в течение 2 мин.
  3. Отрегулируйте отдыха напряженности Ло. Измерение мышечной силы в одном стимуляции дергаться. Определить абсолютную силу подергивания (Pt), время до пика напряжения (ТРТ) и половина времени релаксации (½ RT) из Pt. Разрешить мышц, чтобы расслабиться в течение 2 мин.
  4. Отрегулируйте отдыха напряженности Ло. Измерьте тетаническое мышечной силы генерируются на разных частотах стимуляции (50, 80, 100, 120, 150 и 200 Гц). Определение абсолютных максимальных тетаническое силы мышц (Po), где мышечное усилие достигает максимальной. Измерьте TPT и ½ РТ Po 9.
  5. Разрешить мышц, чтобы расслабиться в течение 5 мин. Отрегулируйте отдыха напряженности Ло. Применить 10 циклов эксцентричного сжатия с 2 минуты отдыха между циклами. Рассчитать относительную потерю силы Po после каждого цикла эксцентричного сжатия.
  6. Снимите EDL мышцы от аппарата и сократить сухожилия на шов сайта. Определите мышцы сырого веса и рассчитать мышцы площадь поперечного сечения (CSA)6,10.

1.3.2 Измерение пассивных свойств EDL мышцы

  1. Проанализируйте контралатеральной EDL мышцы и приложите его к аппарату, как описано в разделе 1.2, шаг 2 до 7.
  2. Тема EDL мышцы шестиступенчатой ​​растяжение протокол, в котором мышца напряжена до 160 Lo% с шагом 10% Ло. Анализ напряженно-деформированного профиля 6.
  3. Оцените вязкая собственности EDL мышцы, измеряя скорость релаксации напряжений (SRR) в следующие сроки после растяжения и проведение мышц на 10% Lo: от пика до 0,1 с после пика (размах), от 0,1 до 0,2 с ПП, от 0,2 до 0,5 п.п., от 0,5 до 1 с п.п. и от 1 до 1,5 с С.
  4. В конце исследования, усыпить мышей путем смещения шейных позвонков и / или обезглавливания в то время как мыши все еще под наркозом. Снимите EDL мышцы от аппарата и сократить сухожилия на шов сайта. Определите мышцы сырого веса и рассчитать мышцы крест себеctional области (CSA) 6, 10.

2. Оценка сократительные свойства мышц TA На месте

Сократительные свойства мышц TA измеряется с помощью Aurora Научно на месте тест-системы мышц. См. Таблицу 1 для материалов и оборудования.

2.1 Оборудование подготовки

  1. Нагрейте термо-контролируемых животной стадии до 37 ° С с использованием циркулирующей водой ванну.
  2. Включите инструментов (стимулятор, двухрежимный рычажной системы, и сигнал интерфейса). Загрузите DMC программного обеспечения в соответствии с инструкцией завода-изготовителя.

2.2 Подготовка мышц TA на месте для измерения силы

  1. Anesthetize мыши, бритье задних конечностей и разоблачить TA мышцы, как описано в шагах с 1 по 3 в разделе 1.2.
  2. Завяжите двойной квадратный узел вокруг коленной чашечки связки УЗИнг шва хлеб шелка. Завяжите двойной квадратный узел следуют петли узел на MTJ дистальных мышц TA (рис. 2), связать еще один двойной квадратный узел, оставляя ~ 10 мм петля из дистального сухожилия узел TA использованием той же линии шва. Поместите второй двойной квадратный узел на стороне петли.
  3. Снимите штифты из задних конечностей и положение животного лежа. Expose двуглавой мышцы бедра. Сделайте надрез по средней линии, чтобы показать седалищного нерва. Завяжите двойной квадратный узел вокруг проксимального конца седалищного нерва. Обрезать одной стороны шва линии и сократить нерва выше узла. Аккуратно потяните седалищного нерва к коленного сустава с использованием шва и очистить окружающую соединительную ткань, чтобы бесплатно ~ 5 мм его длины. Не растягивайте нерва во время этой процедуры и постоянно переливать нерва с буфером звонка.
  4. Подготовка противоположной мышцы TA, как описано в шагах с 1 по 3. Обложка одного из открытых задних конечностей с куском RiБуфер nger в пропитанной хлопка. Постоянно переливать обе задние конечности с подогретого (37 ° C) буфера Рингера. Удалите излишки буфера через вакуумную линию.
  5. Поместите животных ничком на животных платформы. Установите держатель колена зажим для животных платформе и закрепить оба колена на металлический штифт с двойной квадрат узлов использованием коленную чашечку линии шва связки. Pin обеими ногами на блоке Sylgard использованием портниха контакты. Закрепить животных платформы на термо-контролируемом этапе. Установите тепла лампы для поддержания тела животного температура ядра при 37 ° C.
  6. Закрепите держатель электрода для животных платформы и заложить седалищного нерва на электрод с помощью шва. Держите электрод от задних мышц конечностей. Вырезать дистального сухожилия TA непокрытого задних конечностей на месте шва MTJ. Прикрепить дистального сухожилия TA шов петля на крючок рычага. Изолируйте открытый мышцу задней конечности с буфером теплой Рингера пропитанной хлопка.

2,3 Измерение сократительные свойства мышц TA

  1. Используйте таблицу 2 для установки параметров в DMC программного обеспечения. Следуйте тем же протоколом, описанным в разделе 1.3.1 для определения сократительные свойства мышц TA. Анализ данных с помощью программного обеспечения DMA.
  2. После сократительной измерения собственность, отделить дистального сухожилия TA шов петля с крючка руку моста. Снимите TA мышцы. Определите мышцы сырого веса и рассчитать CSA 10.
  3. Измерьте сократительные свойства мышц контралатеральной ТА в соответствии с шаги с 1 по 3, описанные выше. Усыпить мыши в соответствии с руководящими принципами институциональной в конце исследования.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Следующие результаты являются представления наших предыдущих докладах 6,9. Данные представлены в виде среднего значения ± стандартная ошибка среднего. Таблица 3 показывает морфометрических свойств EDL мышцы в нормальном BL10 и дистрофин-дефицитных (MDX) мышей от 4 до 6 месяцев. Рисунке 4 показана представитель сократительной и пассивные свойства EDL мышцы BL10 и MDX мышей. Сократительные свойства мышц EDL описывается следующими условиями, включая конкретные (абсолютная сила, деленная на CSA) дергаться силы (рис. 4а), конкретные максимальной силы тетаническое (рисунок 4B), TPT и ½ RT абсолютных максимальных тетаническое силу (рис. 4С и D). TPT и ½ RT можно также вычислить с абсолютной силы дергаться. Напряженно-деформированного профиля (рис. 4E) и SRR (рис. 4F)повторно используемый для описания свойств пассивных EDL мышцы.

Отсутствие дистрофина оказывает значительное влияние на сократительную и пассивных свойств EDL мышцы 6,9. Конкретные дергаться и тетаническое силы значительно сокращаются в мышцах MDX EDL. TPT значительно быстрее, в то время как ½ RT значительно медленнее в мышцы MDX EDL. Напряженно-деформированного профиля показывает, что жесткость значительно увеличивается в мышцах MDX EDL. Мышцы MDX EDL также дает значительно намного выше сила сопротивления (пассивный стресс) до достижения пика напряжения, в то время как после пика напряжения снижаться гораздо быстрее. Кроме того, SRR был значительно выше в мышцах MDX EDL по сравнению с BL10 EDL мышцы.

Статистический анализ

Статистическая значимость между двумя группами анализируется Стьюдента-тест. Для SТАТИСТИЧЕСКИЕ значение среди нескольких групп, в одну сторону или двусторонней ANOVA анализ следует Bonferroni анализ постфактум рекомендуется использование программного обеспечения SAS (SAS Institute Inc, Cary, NC). Разница считается значимым при р <0,05.

Таблица 1. Материалов и оборудования.

Эксперимент Отдыхая напряжения (грамм) Частота импульса (Гц) Длительность импульса (мс) Стимуляция продолжительность (мс) Stretch длины Stretch продолжительность (мс) Stretch скорости Комментарии
1. Оценка сократительной и пассивных свойств EDL естественных бывших мышц
1.3.1 Измерение сократительные свойства мышц EDL
1. Разминаться 1,0 150 0,2 300 Отдых мышцы в течение 60 секунд между каждым стимулом. Эти предварительные тетаническое сокращений стабилизации мышц для последующего измерения.
2. Оптимальная длина мышцы (Lo) 0,5, 1,0, 1,5 и 2,0 1 0,2 300 Разрешить мышц, чтобы расслабиться в течение 30 секунд между каждым стимулом. Измерьте мышцы оптимальной длины с помощью цифровой суппорта.
3. Одноместный TWITCH силы (Pt) Отрегулируйте отдыха напряженности Lo 1 0,2 300
4. Тетаническое силу мышц Отрегулируйте отдыха напряженности Lo 50, 80, 100, 120, 150 и 200 0,2 300 Разрешить мышц, чтобы расслабиться в течение 1 мин между каждым стимулом. Определить частоты, которые генерируют максимальную абсолютную тетаническое силы (Po).
5. Эксцентричный сокращения Отрегулируйте отдыха напряженности Lo Использование частот, что создает максимальную силу тетаническое (Po) 0,2 700 10% Lo последние 200 мс стимуляции продолжительности 0,5 Lo / сек Повторите эксцентричных сокращений в течение 10 циклов с 2 минуты отдыха между циклами.
6. CSA из EDL мышцы CSA = (мышечная масса (г) / [1,06 г / см 3 х (Lo х 0,44)]. 1,06 г / см 3, плотность мышц и 0,44 является EDL длины мышечных волокон к Ло отношение.
1.3.2 Измерение пассивных свойств EDL мышцы
1. Шесть шагов растяжения протокола Отрегулируйте отдыха напряженности Lo 10% Lo 2 см / сек Повторите растяжку протокола с добавлением 10% Lo до 160% Lo будет достигнута. Младший байт регистра АХ общего назначения ЦП 1,5 сек между протяжении цикла.
2. SRR Отрегулируйте отдыха напряженности Lo 10% Lo 2 см / сек ССР, рассчитывается путем деления разницы в напряжении с тIME прошедшее между двумя временными точками в срок.
2,3 Измерение сократительные свойства мышц TA
1. Разминаться 4,0 150 0,2 300 Отдых мышцы в течение 60 секунд между каждым стимулом.
2. Оптимальная длина мышцы (Lo) 3,0, 4,0, 5,0, 6,0 и 7,0 1 0,2 300 Разрешить мышц, чтобы расслабиться в течение 30 секунд между каждым стимулом. Измерьте мышцы оптимальной длины с помощью цифровой суппорта.
3. CSA мышц TA CSA = (мышечная масса (г) / [1,06 г / см 3 х (Lo х 0,6)]. 0.6 будет TA длины волокна мышц Lo РАТио.

Таблица 2. Параметры для оценки механических свойств EDL и TA мышц.

Напрягаться Возраст (месяцев) Масса тела (г) EDL веса (мг) EDL Lo (мм) EDL CSA (мм 2)
BL10 6 32,03 ± 0,57 13,90 ± 0,77 14,09 ± 0,04 2,12 ± 0,12
MDX 6 35,44 ± 0,42 * 16,73 ± 0,42 * 13,93 ± 0,05 * 2,57 ± 0,07 *

Таблица 3. Морфометрические свойства EDL мышцы. *, Значение в MDх мышей значительно отличается от соответствующего возраста BL10 мышей.

figure-results-1
Рисунок 1. Схема заказные платы рассечение мышь. Рассечение доска изготовлена ​​из ½ дюйма толщиной оргстекла и был изготовлен на институциональном магазин. Нажмите, чтобы увеличить показатель .

figure-results-2 />
Рисунок 2. Серия цифровых фотографий, иллюстрирующая этапы связывания двойной квадратный узел следуют петли узел на MTJ. Asterisk,EDL мышцы; Arrow, дистального сухожилия EDL мышцы.

figure-results-3 />
Рисунок 3. Схема заказные платформы для анализа на месте мышечной функции TA. Платформы оргстекла животных и держатель из нержавеющей стали колена были разработаны для установки на 809B на месте аппаратов мыши. *, Нержавеющей стальной стержень (Cat # MPR-2.0 , Siskiyou, Grants Pass, Орегон); # Универсальный держатель электрода (Cat # MXB, Siskiyou, Grants Pass, Орегон); §, стержень электрода вложения (Cat # MPR-3.0, Siskiyou, Grants Pass, Орегон); ** Sylgard блок. Нажмите, чтобы увеличить показатель .

/>
Рисунок 4. Представитель результаты для сократительной и пассивных свойств EDL мышцы. Сократительные свойства мышц EDL характеризуются удельной силы подергивания (A), удельная сила тетаническое (B), время до пика напряжения (C) и половину времени релаксации (D). Пассивного свойства EDL мышцы оценивали по профилю напряжения деформации (E) и ССР. * MDX мышей значительно отличается от соответствующего возраста BL10 мышей.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В этом протоколе, мы проиллюстрировали физиологические тесты для измерения сократительной и пассивных свойств EDL мышцы и сократительные свойства мышц TA. Одной из основных проблем в мышцах исследования физиологии оксигенации целевой мышцы. Для больших мышц (например, мышцы TA), в местах подхода является предпочтительным, поскольку диффузия кислорода из буфера Рингера не может добраться до центра мышцы в анализе пробирке. На месте подход не нарушает нормального кровоснабжения и гипоксии связанного искусственных эффектов можно избежать. EDL мышцы является одним из наиболее часто используемых мышц в исследовании физиологии. Адекватной оксигенации всей мышцы может быть достигнуто в пробирке в системе из-за малого размера мышц. Кроме того, в системе пробирке обеспечивает закрытую среду для управления концентрацией ионов (Ca 2 +, Na + и K +) и химическойКлиентские лицензии (АТФ и глюкозы), которые необходимы для оптимальной генерации силы мышц. Это дает прекрасную возможность для изучения влияния этих переменных на производстве силы.

Точное измерение сократительной и пассивные свойства мышц конечностей имеет решающее значение для изучения функции скелетных мышц. Характерные изменения этих свойств часто рассматриваются как признаки различных заболеваний мышц. Изменения в этих параметрах являются также важными показателями для определения экспериментальная терапия является эффективной или нет.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Нет конфликта интересов объявлены.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа была поддержана грантами от Национального института здоровья (AR-49419, DD), мышечная дистрофия ассоциации (DD) и NIH грант подготовки T90DK70105 (CH).

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Материал Производитель Технические характеристики и комментарии
Tissue-ванночку Radnoti LLC, Калифорния, США Вода куртка ткань ванны (Cat # 158351-LL), кислород диспергатор трубки (Cat # 160192), Luer клапана (Cat # 120722)
Циркуляционный водяной бане Fisher Scientific, Waltham, MA, USA
Газовой смеси Airgas национального, Шарлотт, Северная Каролина, США 95% O 2 и 5% CO 2
В пробирке мышечного аппарата анализа функций Aurora научных, Aurora, ON, Канада Система состоит из стимулятора (Model # 701A), двухрежимные рычажной системы (Model # 300C и 305C), сигнал интерфейсом (модель № 604b) и тест APрат (модель № 800A) для вертикально установить ванну ткани органа
В пробирке мышцы программное обеспечение анализа функций Динамические мышечного контроля (DMC) программного обеспечения и динамического мышечного контроля, анализа данных (DMA) программного обеспечения
Мышь анестезией коктейль, приготовленный в 0,9% NaCl Обратитесь к институциональные рекомендации Кетамин (25 мг / мл), ксилазина (2,5 мг / мл) и Ацепромазин (0,5 мг / мл). На протяжении хирургической процедуры, добавка 10% от начальной дозы может быть необходимо для поддержания животных под наркозом.
Sylgard Инструмент Всемирного Precision Cat # SYLG184
Заказные оргстекла рассечение платы В доме предназначены См. Рисунок 1
Отопление лампы Тензорное Lighting Company,Бостон, Массачусетс, США 15 Вт лампы держать мышь теплым в течение диссекции
Рингер буфера Химические вещества закупаются у Fisher Scientific, Waltham, MA, USA Состав, мм: 1,2 NaH 2 PO 4 (Cat # S369), 1 MgSO 4 (Cat # M63), 4,83 KCl (Cat # P217), 137 NaCl (Cat # 217), 24 NaHCO 3 (Cat # S233), 2 CaCl 2 (Cat # C79) и 10 глюкозы (Cat # D16). Растворите химических веществ в отдельности и смешать в указанном выше порядке. Хранить при температуре 4 ° C.
Stereo рассекает микроскопом Nikon, Мелвилл, Нью-Йорк, США
Dissection инструменты Средства изобразительных наук, Foster City, CA, USA Грубо щипцы, ножницы грубые, тонкие щипцы (прямые и под углом 45 °)
Плетеные шелковые шов # 4-0 SofSilk USSC сувания, Norwalk, CT, США Cat # SP116
На заказ из нержавеющей стали крюк Мелкие детали, Inc 2'' долго S / S 304V (0,18'' диаметре) для силовых преобразователей 305C или 2,5'' долго S / S 304V (0,012'' диаметре) для преобразователей 300C (Cat # ASTM A313)
На месте функции системы анализа мышц Aurora научных, Aurora, ON, Канада Система (809B, на месте аппаратов мыши) состоит из стимулятора (Model # 701B), двухрежимные рычажной системы (Model # 305C), сигнал интерфейсом (модель № 604A) и термо контролируемого аппарата подножку (модель № 809A )
В пробирке мышцы программное обеспечение анализа функций Aurora научных, Aurora, ON, Канада Динамические мышечного контроля (DMC) программного обеспечения и динамического мышечного контроля, анализа данных (DMA) программного обеспечения
Заказные TA анализ животного платформы В доме предназначены См. Рисунок 2
На заказ из нержавеющей стали крюк Мелкие детали, Inc Cat # ASTM A313 0.5'' долго S / S 304V (0,18'' диаметре)
Заказные 25G платиновыми электродами Chalgren предприятий, Гилрой, Калифорния Припой два 0,016'' толстые провода платины на два 24G электрических проводов

Таблица 1. Материалов и оборудования.

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Huijing, P. A. Muscle as a collagen fiber reinforced composite: a review of force transmission in muscle and whole limb. J. Biomech. 32, 329-345 (1999).
  2. Moss, R. L., Halpern, W. Elastic and viscous properties of resting frog skeletal muscle. Biophys. J. 17, 213-228 (1977).
  3. Hoffman, E. P., Brown, R. H., Kunkel, L. M. Dystrophin: the protein product of the Duchenne muscular dystrophy locus. Cell. 51, 919-928 (1987).
  4. Petrof, B. J., Shrager, J. B., Stedman, H. H., Kelly, A. M., Sweeney, H. L. Dystrophin protects the sarcolemma from stresses developed during muscle contraction. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90, 3710-3714 (1993).
  5. Pastoret, C., Sebille, A. mdx mice show progressive weakness and muscle deterioration with age. J. Neurol. Sci. 129, 97-105 (1995).
  6. Hakim, C. H., Grange, R. W., Duan, D. The passive mechanical properties of the extensor digitorum longus muscle are compromised in 2- to 20-mo-old mdx mice. J. Appl. Physiol. 110, 1656-1663 (2011).
  7. Segal, S. S., Faulkner, J. A. Temperature-dependent physiological stability of rat skeletal muscle in vitro. Am. J. Physiol. 248, 265-270 (1985).
  8. Grange, R. W., Gainer, T. G., Marschner, K. M., Talmadge, R. J., Stull, J. T. Fast-twitch skeletal muscles of dystrophic mouse pups are resistant to injury from acute mechanical stress. Am. J. Physiol. Cell Physiol. 283, 1090-1101 (2002).
  9. Hakim, C. H., Duan, D. Gender differences in contractile and passive properties of mdx extensor digitorum longus muscle. Muscle Nerve. 45, 250-256 (2012).
  10. Hakim, C. H., Li, D., Duan, D. Monitoring murine skeletal muscle function for muscle gene therapy. Methods Mol. Biol. 709, 75-89 (2011).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Muscle Function EvaluationContractile PropertiesPassive PropertiesEx Vivo AnalysisIn Situ MeasurementDMC SoftwareMuscle DissectionStress Strain Profile

Похожие статьи