Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Экс внутриутробно электропорации и всего Экспланты полушарии: Простой экспериментальный метод исследования раннего развития коры

12.6K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/50271

⸱

3 апреля 2013 г.

 ,  ,  , 
1Department of Neuroscience and Physiology, SUNY Upstate Medical University

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Этот протокол описывает улучшенную процедуру эксплантов, что включает в себя Экс внутриутробно Электропорации, рассечение и культуры целых полушарий головного мозга из эмбриональных мыши. Подготовка облегчает фармакологических исследований и анализов функции гена в начале развития коры.

Аннотация

Кортикальные развития предполагает сложное взаимодействие между нейронами и не-нейрональных элементов, включая клетки-предшественники, кровеносных сосудов, мозговых оболочек и связанных с ними внеклеточного матрикса. Потому что они предоставляют подходящую органотипических окружающей среды, корковой эксплантов срез часто используются, чтобы исследовать те взаимодействия, которые контролируют дифференцировку нейронов и развития. Хотя полезно, модель срез эксплантов могут страдать от недостатка том числе аберрантных сотовой ламинирования и миграции. Здесь мы приводим все системы мозгового полушария эксплантов для изучения раннего развития коры, которое легче подготовить, чем кортикальные ломтиками и показывает последовательное органотипических миграции и ламинирование. В этой модели система раннего ламинирования и миграции проходят нормально в течение двух дней в пробирке, включая период preplate расщеплению, в ходе которой предполагаемый кортикальный слой шесть форм. Затем мы разработали бывшего электропорации внутриутробно (EUEP)Подход, который достигает ~ 80% успеха в планировании GFP выражение для развивающихся нейронов в спинном медиальная кора.

Вся модель эксплантов полушарие делает раннего развития коры доступными для электропорации, фармакологическое вмешательство и живой подходы изображений. Этот метод позволяет избежать выживание операции требуется внутриутробно электропорации (IUEP) подходов при одновременном повышении и трансфекции и площадные таргетинга консистенции. Этот метод будет способствовать экспериментальных исследований нейронов пролиферации, миграции и дифференциации.

Введение

Млекопитающих мозговой коры форм на основе согласованных пролиферации, миграции и дифференцировки последовательно генерируются нейронов. Каждый нейрон родился в вентрикулярной зоне (VZ) и мигрирует из VZ в промежуточной зоны (ИЗ), образуя кортикальной пластинки (CP) 1. Как они проходят через различные корковых областей, мигрирующие нейроны отображать несколько режимов миграции 2,3, что зависит от внеклеточной среды и других клеточных элементов (например, радиальной глии) в развивающиеся ткани. Корковых нейронов затем арестовать миграции в верхней части формирования кортикальной пластинки в совпадающие процессы нейронов арест миграции и дендритогенез 4.

Кортикальные развития, начатый между эмбриональными дней 11-13 (E11-13) с 5 по созданию первичного слоя плексиформные 6 или preplate (PP), слой пионером нейронов, которые перекрывает VZ. Перспективныйслой 6 корковых нейронов (т.е. первый корковых нейронов родился в VZ), то ориентировать свои somata в стереотипные модели и сливаются в различных слоя в пределах PP 7. Эти события разделили preplate в поверхностном предельные (будущий корковый слой 1) и глубоководной зоны, последняя состоит из плите клетки (переходные коркового слоя 7). Этот процесс, называемый preplate расщепления, является основополагающим событием в будущем рост коры головного мозга 8.

Многие генетические мутации были идентифицированы, которые нарушают различные аспекты развития коры 9. Развития коры также может быть негативное влияние воздействия попадании токсинов, таких как кокаин, алкоголь 10 и 11. Потому что корковые пороки развития, возникающие в процессе развития, скорее всего, вклад в неврологических расстройств (например, аутизм, шизофрения), эмпирические исследования возмущения развития коры присущиют важное. В связи с этим большое значение для создания подходы к изучению развития коры, которые позволяют быстрое анализы генетических или токсин эффекты, но которые также сохранение возможных взаимодействий между дифференциации нейронов, другие типы клеток и внеклеточного матрикса (ECM) в этот ранний период развития мозга 12 .

Slice эксплантов 13 из которых условии, что такая система и была широко используется для анализа развития коры нейрон 14-16. Тем не менее, часть анализов могут страдать от недостатка, что миграцию нейронов и ламинирования может быть ненормальной 17 возможно, связано с повреждением менингеальных клетки, которые окружают развивающегося мозга и якорь радиальной глии эшафот. Как волокон радиальной глии являются важным субстратом для корковых нейронов миграции 18 нарушения базальной пластинки, нарезая может локально нарушить радиальной глии архитектуры и привести к изменению корковых миграции. Кроме того SLIКНИ поверхности эксплантов предоставляет региона мертвых клеток, которые могут изменить нормальный состав ECM в этих областях.

Более поздние подходы были сосредоточены на анализе клеток, расположенных в глубине среза, которые окружены соответствующей здорового типов клеток и ECM. Тем не менее, в некоторых случаях эти новые подходы могут требовать, чтобы оригинал толстый культурный срез быть крио-секционного или парафин-секционного после фиксации, так что относительно нормальный интерьер кусочек становятся доступными для анализа 19-21. Оба оригинальных vibratome секционирования для подготовки живых ломтиками для культуры, а также последующее cryosectioning основных срезы для анализа требуют ухода и усилий для этих анализов, чтобы работать.

Для обеспечения простого, взаимодополняющий подход для исследования ранней развития коры, мы изменили существующие подходы кусочек от 13 до содействия исследованиям раннего развития коры. Мы разработали WHоле полушарии эксплантов модель похожа на существующие модели E14 целом полушарии, участвующих встряхивания культур на 65 оборотов в минуту и позволил органотипических рост в течение 16-18 ч 22,23. В нашем подходе целый эксплантов полушарии расположены на полупроницаемую мембрану 13 с в атмосфере высокой культуры кислорода 21,24 расширить органотипических корковых роста в течение 48 часов. Этот подход также позволяет последовательно электропорации развития корковых нейронов. Эмбрионы удаляют из матки и электропорации введения плазмидной ДНК и конечного мозга, затем расчленены. Каждое полушарие изолирован и помещен медиальной стороне вниз по коллагена покрытием фильтра. Эксплантов затем культивировали в течение 48 часов, период, который охватывает preplate расщепление 8. Во время периода культивирования, L6 нейроны развиваются из предшественников нейронов, чтобы дифференцировать 25, правильно расположены в кортикальной пластинки. В этот период развиваетсянейрон окружен соответствующей ECM и типы клеток, которые противостоят соответствующие клетки в живом организме. Эта система уже доказала ценным в расшифровке клеточных событий, которые лежат в основе этанола токсичность 26, слой 6 формирования и preplate расщепления 7,25.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. Ex внутриутробно Electroporations с зеленого флуоресцентного белка выражения плазмиды

  1. Плазмида растворы для инъекций ДНК готовятся с CAG-EGFP ДНК 27 разбавляется до конечной рабочей концентрации 0,33 мг / мл в DDH 2 O. Qiagen Endo-Free Maxi-Preps используется для очистки плазмид из трансформированных бактерий. Быстрый зеленый краситель в 0,02% (вес / объем финал) будет добавлен в раствор ДНК в виде инъекции индикатора.
  2. Для подготовки хирургической области, спрей вниз верхней скамейке и рассекает микроскопом сцене с 70% раствор этанола и вытереть насухо. Спрей хирургические ножницы и щипцы с 70% этанола до вскрытия и вытрите насухо.
  3. Временный Беременные Швейцарская / Webster плотины жертву на E13 переводом в камеру, заполненную CO 2 от давления цилиндра и плотины контролируется, пока все движение остановилось, по крайней мере 1 мин. После жертву CO 2 ингаляции эмбрионы удаляют из матки и помещают в10 см чашки Петри содержащие ледяной Хэнкс сбалансированный солевой раствор (HBSS).
  4. Тщательно анализировать каждый эмбрион от окружающих внеэмбриональной мембран и держать в ледяной HBSS.
  5. Передача каждого эмбриона индивидуально второй 10 см чашки Петри содержащий холодную HBSS. С помощью шприца Hamilton вводить 2-3 мкл ДНК быстрой зеленых смесь в желудочек левого полушария головного мозга, заботясь, чтобы внедрить в области коры пространственно отделены от области коры для последующего анализа.
  6. Для electroporate, держите эмбриона аккуратно пинцетом и слегка разместить положительный весло пинцет электродов на спинной средней линии головы и слегка разместить отрицательные весло под подбородком эмбриона. Electroporations достигается при BTX830 электропоратора запрограммирована поставить пять 30 V импульсами длительностью 50 мс, разделенных на 950 интервалов мс. Эти настройки предназначены для BTX830 модели. Другие системы могут быть использованы в соответствии с РУКОВОДСТВО производителянс.

2. Всего Подготовка эксплантов полушарии

  1. После электропорации эмбрионы помещают обратно в ледяную HBSS. Мозг удаляют с помощью двух # 5 щипцы для удаления ювелирных кожи и хрящевой череп из эмбриона голову. Forcep затем скользнул под мозг, чтобы удалить неповрежденного мозга из черепа. Электропорации полушарии (слева), затем отсечен от мозга и придает середине мозговой ткани удаляется. На протяжении процедуры ухода рассечение осторожность, чтобы не повредить мозговые оболочки покрывающей левое полушарие корковые.
  2. После расчлененный каждый эмбрион переносится в HBSS помощью пипетки с разрезом 1 совет мл пипетки. Полушарии мягко изгнаны на коллагена покрытием вставки культуры. До шести эксплантов полушарии расположены медиальной стороне вниз на каждые 24 мм вставки. После устроен, избыток HBSS удаляется из вставки и вставки помещается в один 35 мм и от 6 хорошо блюдо. Также содержит EXActly 2,7 ​​мл среды: DMEM-F12 средах, содержащих Glutamax и с добавлением 2% B-27, 1% G5 и 1% пенициллин-Strep. Несколько капель средства массовой информации из колодца можно пипеткой друг на эксплантов, но не добавляйте средства массовой информации более оригинальные 2,7 мл на лунку.
  3. После эксплантов были размещены на коллаген фильтры 6 хорошо блюдо, содержащее эксплантов помещается в Биллапс Ротенберг (BR) камеры (которая также содержит увлажняющие блюдо воды). 95% / 5% кислорода / CO 2 газовая смесь вливается в камере по крайней мере 1 мин до герметизации камеры закрытым и отключением 95% / 5% кислорода / CO 2 газ трубку. BR камеру помещают в 37 ° C культуре ткани инкубатора в течение оставшегося периода культивирования, 1-2 DIV.

3. Фиксация эксплантов тканей для гистологии

  1. В вытяжного шкафа приготовления раствора Пагано фиксации, сначала солюбилизирующего 8 г параформальдегида в 100 мл предварительно нагретого (~ 80 и де-г; C) DDH 2 O. Добавить 1-3 капли сосредоточены NaOH способствовать солюбилизации и аккуратно перемешать. После растворяются смешайте 8% параформальдегида решение 1:1 с решением, которое находится в 500 мМ сахарозы, 100 Hepes мМ, рН 7,4, 50 мМ MgCl 2, 5 мМ KCl до конечной концентрации 4% параформальдегида в 250 мМ сахарозы, 50 мМ Hepes , 25 мМ MgCl 2, 2,5 мМ KCl, рН 7,4.
  2. Чтобы исправить эксплантов теплый раствор Пагано исправление до 37 ° C. Быстро удалить большую часть DMEM/F12 средств массовой информации из каждой культуры хорошо и добавить 5 мл Fix Пагано в каждую лунку эксплантов. Убедитесь в том, чтобы охватить каждый эксплантов полностью исправить. Исправить в течение 1 часа при комнатной температуре. Не снимайте эксплантов от фильтра до 1 часа фиксации.
  3. После фиксации удаления раствора Пагано исправление и замену с Пагано решение без исправлений (250 мМ сахарозы, 50 мМ Hepes, 25 мМ MgCl 2, 2,5 мМ KCl, рН 7,4). Добавить несколько капель 10% азида натрия и хранят при 4 ° С до внедрения.

4. Внедрение и Sectioning для гистологии

  1. Подготовить 10% телячьей кожи раствор желатина по солюбилизации 10 г телячьей кожи желатин в 100 мл теплой воды (55-60 ° C). Поместите раствор желатина на горячей плите, установленной на 60 ° C и вихрем периодически, пока растворяются.
  2. Налейте примерно 10 мл 10% раствора желатина в нижней части на 10 см блюдо Петри и дать 30 минут до затвердевания. Это позволит сформировать «площадку» для встраивания эксплантов. Эти подушечки может быть подготовленными дней и хранят при 4 ° C. Используйте линейку, чтобы нарисовать сетку на дно чашки Петри и передавать отдельные эксплантов в каждом окне решетки. Удалите остатки решения Пагано и с помощью пипетки, покрывают друг эксплантов с теплым 10% раствора желатина и дать затвердеть. Резюме медленным добавлением раствора желатина, пока каждый эксплантов полностью окружен желатин, заботясь, чтобы не расплавиться площадки путем добавления слишком много теплого желатина сразу. Разрешить для желатина затвердеть в течение ~ 1 часа. После затвердевания отдельUAL эксплантов можно вырезать в небольших блоков желатин. Блоки затем пост-фиксируется в Пагано исправить в течение 24-48 ч до секционирования с vibratome.
  3. Эксплантов в желатиновые блоки расположены обонятельные луковицы и разрезом во фронтальной плоскости на 100 мкм толщины. Секции собираются и хранятся в PBS + 0,1% азида натрия при температуре 4 ° С до иммуногистохимического обработки.
  4. Иммуногистохимическое обнаружения производится путем перечисления секций в 24-луночный планшет (2-3 разделов на лунку). Первый блок неспецифического связывания антител путем добавления 0,5 мл PBST + B (PBS + 0,5% Triton X 100 и 2% BSA) в каждую лунку, инкубировать 1 час при осторожном встряхивании. Соответствующие первичные антитела затем разбавляют в PBST + B и 0,4 мл на лунку добавляют для инкубации в течение ночи при комнатной температуре. Основной вымывается с 3-кратным PBS моет, по крайней мере 10 минут каждый. Вторичными антителами и 2 мкг / мл Hoechst 33342 ядерной пятно, затем разбавляют в PBST + B и образцы инкубировали в течение 2 часов при комнатной температурепри осторожном встряхивании. Три PBS промывки (10 минут каждый) выполняются, а затем секции смонтированы на слайды, используя 90% глицерина, 50 мМ Трис, рН 7,4, монтаж средств массовой информации.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Эмбриональных грызунов кора обладает поперечного градиента нейрогенного всему периоду развития, такие, что боковые коры головного мозга составляет приблизительно 1 день более зрелым, чем спинной медиальная кора головного мозга 28. Большая часть нейронов слоя 6, таким образом, генерируется (т.е. выставлять свои окончательные S-фаза) на E12 в боковой коры (также называется поле 40 5) и E13 в спинной медиальная кора головного мозга (также называется Поле 1 5). Preplate расщепление ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Мы улучшили и оценка экспериментальной модели - все эксплантов полушарие - для изучения раннего развития коры (E13-E15). Модель оказалась полезной для анализа миграции и дифференциации возбуждающих нейронов линии, что составляет слой 6 коры головного мозга 25,37. Принцип преимуществами системы являются: 1) органотипических рост на 2 DIV, 2) простота получения, и 3) экспериментальные доступом к нейронам для электропорации, фармакологических манипуляций и изображений в этот ранний, критический период развития м...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

Эта работа была поддержана грантами от NINDS (NS066071) и NIAAA. (P50AA017823) в ОЭС. Авторы выражают благодарность д-р Роберт Куинн и персонала в отделе лабораторных животных ресурсов для ухода за животными. Мы благодарим Джадсон Belmont технической поддержки, Николь Belletier для помощи в летние Бакалавриат научный сотрудник (SURF). Мы также благодарим д-р Дэвид Кэмерон комментарии и изменения на более раннюю версию рукописи.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
<сильный>реагенты
DMEM/F12 + GlutaMAXGIBCO10565
G5 Добавка 100XInvitrogen17503-012
B27 Сыворотка без сыворотки 50XInvitrogen1504-044
Pen / Strep Liquid 100XInvitrogen15140-122
HBSS 500 млGIBCO14025
Культуральный вкладыш с коллагеновым покрытием Costar3492
Желатин из бычьей кожи SigmaG9382
H– chst 33342InvitrogenH1399
Бычья сыворотка альбуминSigma7906
EndoFree Plasmid Maxi KitQiagen12362
Equipment
BTX 830 ЭлектропораторHarvard Apparatus450052
пинцетные электроды 10 ммHarvard Apparatus450166
ИнкубаторBillups RothenbergMIC-101
Шприц Hamilton (5 мкл)Hamilton87930
Игла для шприца HamiltonHamilton7803-04Укажите 1" и стиль 4
Пинцет Dumont #5FST11251-10
Ножницы тонкой резки 9 смFST14058-09

Ссылки

  1. Rakic, P. Principles of neural cell migration. Experientia. 46, 882-891 (1990).
  2. Tabata, H., Nakajima, K. Multipolar migration: the third mode of radial neuronal migration in the developing cerebral cortex. J. Neurosci. 23, 9996-10001 (2003).
  3. Noctor, S. C., Martinez-Cerdeno, V., Ivic, L., Kriegstein, A. R. Cortical neurons arise in symmetric and asymmetric division zones and migrate through specific phases. Nat. Neurosci. , (2004).
  4. Olson, E. C., Kim, S., Walsh, C. A. Impaired neuronal positioning and dendritogenesis in the neocortex after cell-autonomous Dab1 suppression. J. Neurosci. 26, 1767-1775 (2006).
  5. Takahashi, T., Goto, T., Miyama, S., Nowakowski, R. S., Caviness, V. S. Sequence of neuron origin and neocortical laminar fate: relation to cell cycle of origin in the developing murine cerebral wall. J. Neurosci. 19, 10357-10371 (1999).
  6. Marin-Padilla, M. Early prenatal ontogenesis of the cerebral cortex (neocortex) of the cat (Felis domestica). A Golgi study. I. The primordial neocortical organization. Z. Anat. Entwicklungsgesch. 134, 117-145 (1971).
  7. Nichols, A. J., Olson, E. C. Reelin promotes neuronal orientation and dendritogenesis during preplate splitting. Cerebral Cortex. 20, 2213-2223 (2010).
  8. Sheppard, A. M., Pearlman, A. L. Abnormal reorganization of preplate neurons and their associated extracellular matrix: an early manifestation of altered neocortical development in the reeler mutant mouse. J. Comp. Neurol. 378, 173-179 (1997).
  9. Manzini, M. C., Walsh, C. A. What disorders of cortical development tell us about the cortex: one plus one does not always make two. Current Opinion in Genetics & Development. 21, 333-339 (2011).
  10. Jones, L., Fischer, I., Levitt, P. Nonuniform alteration of dendritic development in the cerebral cortex following prenatal cocaine exposure. Cereb. Cortex. 6, 431-445 (1996).
  11. Olney, J. W. Fetal alcohol syndrome at the cellular level. Addict. Biol. 9, 137-149 (2004).
  12. Levitt, P., Reinoso, B., Jones, L. The critical impact of early cellular environment on neuronal development. Prev. Med. 27, 180-183 (1998).
  13. Stoppini, L., Buchs, P. A., Muller, D. A simple method for organotypic cultures of nervous tissue. J. Neurosci. Methods. 37, 173-182 (1991).
  14. O'Rourke, N. A., Dailey, M. E., Smith, S. J., McConnell, S. K. Diverse migratory pathways in the developing cerebral cortex. Science. 258, 299-302 (1992).
  15. Elias, L. A., Wang, D. D., Kriegstein, A. R. Gap junction adhesion is necessary for radial migration in the neocortex. Nature. 448, 901-907 (2007).
  16. Franco, S. J., Martinez-Garay, I., Gil-Sanz, C., Harkins-Perry, S. R., Muller, U. Reelin regulates cadherin function via Dab1/Rap1 to control neuronal migration and lamination in the neocortex. Neuron. 69, 482-497 (2011).
  17. Gotz, M., Bolz, J. Formation and preservation of cortical layers in slice cultures. J. Neurobiol. 23, 783-802 (1992).
  18. Cameron, R. S., Rakic, P. Identification of membrane proteins that comprise the plasmalemmal junction between migrating neurons and radial glial cells. J Neurosci. 14, 3139-3155 (1994).
  19. Lizarraga, S. B., Coser, K. R., Sabbagh, M., Morrow, E. M. Methods for Study of Neuronal Morphogenesis: Ex vivo RNAi Electroporation in Embryonic Murine Cerebral Cortex. J. Vis. Exp. (63), e3621(2012).
  20. Jossin, Y., Goffinet, A. M. Reelin signals through phosphatidylinositol 3-kinase and Akt to control cortical development and through mTor to regulate dendritic growth. Mol. Cell Biol. 27, 7113-7124 (2007).
  21. Jossin, Y., Ogawa, M., Metin, C., Tissir, F., Goffinet, A. M. Inhibition of SRC family kinases and non-classical protein kinases C induce a reeler-like malformation of cortical plate development. J. Neurosci. 23, 9953-9959 (2003).
  22. Kingsbury, M. A., Rehen, S. K., Contos, J. J., Higgins, C. M., Chun, J. Non-proliferative effects of lysophosphatidic acid enhance cortical growth and folding. Nat. Neurosci. 6, 1292-1299 (2003).
  23. Rehen, S. K., et al. A new method of embryonic culture for assessing global changes in brain organization. J. Neurosci. Methods. 158, 100-108 (2006).
  24. Jossin, Y., et al. The central fragment of Reelin, generated by proteolytic processing in vivo, is critical to its function during cortical plate development. J. Neurosci. 24, 514-521 (2004).
  25. O'Dell, R. S., et al. Layer 6 cortical neurons require Reelin-Dab1 signaling for cellular orientation, Golgi deployment, and directed neurite growth into the marginal zone. Neural. Dev. 7, 25(2012).
  26. Powrozek, T. A., Olson, E. C. Ethanol-induced disruption of Golgi apparatus morphology, primary neurite number and cellular orientation in developing cortical neurons. Alcohol. , (2012).
  27. Matsuda, T., Cepko, C. L. Electroporation and RNA interference in the rodent retina in vivo and in vitro. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 16-22 (2004).
  28. Suter, B., Nowakowski, R. S., Bhide, P. G., Caviness, V. S. Navigating neocortical neurogenesis and neuronal specification: a positional information system encoded by neurogenetic gradients. The Journal of Neuroscience : The Official Journal of The Society for Neuroscience. 27, 10777-10784 (2007).
  29. Englund, C., et al. and Tbr1 are expressed sequentially by radial glia, intermediate progenitor cells, and postmitotic neurons in developing neocortex. J. Neurosci. 25, 247-251 (2005).
  30. Kwon, G. S., Hadjantonakis, A. K. Eomes::GFP-a tool for live imaging cells of the trophoblast, primitive streak, and telencephalon in the mouse embryo. Genesis. 45, 208-217 (2007).
  31. Pearlman, A. L., Sheppard, A. M. Extracellular matrix in early cortical development. Prog. Brain Res. 108, 117-134 (1996).
  32. Milev, P., et al. Differential regulation of expression of hyaluronan-binding proteoglycans in developing brain: aggrecan, versican, neurocan, and brevican. Biochemical and Biophysical Research Communications. 247, 207-212 (1998).
  33. Kwan, K. Y., et al. SOX5 postmitotically regulates migration, postmigratory differentiation, and projections of subplate and deep-layer neocortical neurons. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105, 16021-16026 (2008).
  34. McKenna, W. L., et al. Tbr1 and Fezf2 regulate alternate corticofugal neuronal identities during neocortical development. The Journal of Neuroscience : The Official Journal of the Society for Neuroscience. 31, 549-564 (2011).
  35. Tabata, H., Nakajima, K. Efficient in utero gene transfer system to the developing mouse brain using electroporation: visualization of neuronal migration in the developing cortex. Neuroscience. 103, 865-872 (2001).
  36. Stancik, E. K., Navarro-Quiroga, I., Sellke, R., Haydar, T. F. Heterogeneity in ventricular zone neural precursors contributes to neuronal fate diversity in the postnatal neocortex. J. Neurosci. 30, 7028-7036 (2010).
  37. Powrozek, T. A., Zhou, F. C. Effects of prenatal alcohol exposure on the development of the vibrissal somatosensory cortical barrel network. Brain Res. Dev. Brain Res. 155, 135-146 (2005).
  38. O'Dell, R., et al. Society for Neuroscience. , Washington D.C. (2011).
  39. Tombol, T., Hajdu, F., Somogyi, G. Identification of the Golgi picture of the layer VI cortic-geniculate projection neurons. Experimental Brain Research. Experimentelle Hirnforschung. Experimentation Cerebrale. 24, 107-110 (1975).
  40. Brumberg, J. C., Hamzei-Sichani, F., Yuste, R. Morphological and physiological characterization of layer VI corticofugal neurons of mouse primary visual cortex. Journal of Neurophysiology. 89, 2854-2867 (2003).
  41. Jones, E. G. Synchrony in the interconnected circuitry of the thalamus and cerebral cortex. Annals of the New York Academy of Sciences. 1157, 10-23 (2009).
  42. Kowalczyk, T., et al. Intermediate Neuronal Progenitors (Basal Progenitors) Produce Pyramidal-Projection Neurons for All Layers of Cerebral Cortex. Cereb. Cortex. , (2009).
  43. Konig, N., Roch, G., Marty, R. The onset of synaptogenesis in rat temporal cortex. Anatomy and Embryology. 148, 73-87 (1975).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

GFP
Экс внутриутробно электропорации и всего Экспланты полушарии: Простой экспериментальный метод исследования раннего развития коры
Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.