Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Определение транспортных Оценить ксенобиотиков и наноматериалы через плаценту помощью

17.1K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/50401

⸱

18 июня 2013 г.

 ,  ,  ,  , 

В этой статье

Краткое содержание

Экс естественных условиях Двойной рециркуляции плаценты человека модели перфузии может быть использован для исследования передачи ксенобиотиков и наночастиц через плаценты человека. В этом видео мы опишем протокол оборудования и методов, необходимых для успешного выполнения перфузии плаценты.

Аннотация

Несколько десятилетий назад плаценты человека считалось непроницаемый барьер между матерью и еще не родившегося ребенка. Однако открытие талидомида индуцированных врожденных дефектов и многие более поздние исследования впоследствии доказал обратное. На сегодняшний день некоторые вредные ксенобиотиков как никотин, героин, метадон или наркотиков, а также загрязнение окружающей среды были описаны для преодоления этого барьера. С ростом использования нанотехнологий, плацента, вероятно, вступают в контакт с новыми наночастицы либо случайно, в результате воздействия или умышленно в случае потенциального наномедицинские устройства. Данные экспериментов на животных не могут быть экстраполированы на людей, потому что плацента является наиболее видоспецифической органом млекопитающих 1. Таким образом, экс естественных условиях двойной рециркуляции перфузии плаценты человека, разработанная Panigel соавт. 2 в 1967 году и постоянно изменены Schneider и соавт. 3 в 1972 году, может служить отличной моделью TO изучать передачи ксенобиотиков или частиц.

Здесь мы концентрируем внимание на экс естественных условиях двойной рециркуляции плаценты человека протокол перфузии и его дальнейшее развитие приобретать воспроизводимые результаты.

Плаценты, полученной после информированного согласия матерей от несложных срока беременности кесарево доставки. Матери и плода сосуды интактного семядоли вводили канюлю и перфузии по крайней мере в течение пяти часов. В качестве модели частиц флуоресцентно меченых частиц полистирола с размерами 80 и 500 нм были добавлены к материнской цепи. 80 нм частиц смогли проникают через плацентарный барьер и обеспечивают идеальный пример для вещества, которое передается через плаценту к плоду в то время как 500 нм частицы были сохранены в плацентарной ткани или материнской цепи. Экс естественных человеческих плацентарной перфузии модель является одной из немногих моделей, обеспечивающих надежную информацию отранспорта поведения ксенобиотиков на важный барьер ткани, которая обеспечивает интеллектуальный и клинических соответствующих данных.

Введение

Плацента представляет собой сложный орган, который отвечает за обмен кислорода, углекислого газа, питательных веществ и отходов и в то же время в состоянии держать две цепи крови матери и растущего плода отделены друг от друга. Кроме того, он предотвращает отказ от ребенка по материнской иммунной системы и вырабатывает гормоны для поддержания беременности. Клеточный барьер образован цитотрофобласта клетки, которые сливаются и образуют истинно синцития без боковых клеточных мембран 4,5. Весь плаценты организована в несколько семядоли, которые содержат один плода ворсинок дерева и представляют собой один функциональный блок плаценты.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. Подготовка Система перфузии

  1. Настройка перфузии система, состоящая из водяной бани, перфузии камеры, две колонки для оксигенации, два перистальтических насоса, две ловушки пузырь, два нагревателя потока и одного датчика давления (рис. 1). Соединение этих компонентов с трубкой разделов состоит из силиконовых материалов и поливинилхлорида в соответствии со схемой на фиг.2. Наконец, существуют две цепи представляющего плода и матери цепи соответственно.
  2. Включите водяной бане, поток обогреватели и отопление для перфузии камеры. Температура должна быть 37 ° С.
  3. Подогреть перфузии среда (NCTC-135 тканевой ку....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Фиг.4А показывает перфузии профилей из мелких частиц полистирола (80 нм), которые переносятся через плаценту по сравнению с большими частицы полистирола (500 нм), которые не были переданы в плода отсека. Каждая точка представляет собой среднюю концентрацию частиц в данный момент времени не менее 3 независимых экспериментов. Для наночастиц полистирола плацентарной передачи в зависимости от размера 19. Через 3 часа перфузии плаценты уже 20-30% от первоначально добавлены 80 нм частиц полистирола.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Под двойной рециркуляции перфузии показали здесь, есть несколько других экспериментальных конфигурациях возможны в зависимости от вопроса, который должен быть дан ответ. Особенно плацентарной перфузии открытым обычно используются для оценки клиренс лекарственного средства в стационарном состоянии концентрации 3. Рециркуляции перфузии настройки может также применяться для подтверждения активного транспорта эндогенных или экзогенных веществ. При таком подходе той же концентрации ксенобиотиков должен быть добавл.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

Эта работа осуществляется при финансовой поддержке Швейцарского национального фонда (NRP 64 программы, грант № 4064-131232).

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
NCTC-135 среднийICN Biomedicals, Inc.10-911-22Cможно заменить на Medium 199 от Sigma (M3769)
Sodium chloride (NaCl)Sigma-Aldrich, Fluka71381
Potassium chloride (KCl)Больничная аптекатакже возможна: Sigma (P9541)
Мононатрия фосфат (2PO4 · H2O)Merck106346
сульфат магния (MgSO4 · H2O)Sigma-Aldrich, Fluka63139
Хлорид кальция (CaCl, безводный)Merck102388
D(+) Глюкоза (безводная)Sigma-Aldrich, Fluka49138
Бикарбонат натрия (NaHCO3)Merck106329
Dextan от Leuconostoc spp.Sigma-Aldrich31389
Бычий сывороточный альбумин (БСА)АпплименемA1391
Амоксициллин (Кламоксил)GlaxoSmithKline AG2021101A
Гепарин натрияB. Braun Medical AG3511014
гранулы гидрооксида натрия (NaOH) Merck106498ВНИМАНИЕ: коррозионный
Ортофосфорная кислота 85% (H3PO4)Merck100573ВНИМАНИЕ: коррозионная
Материнская газовая смесь: 95% синтетический воздух, 5% CO2PanGas AG
Фетальная газовая смесь: 95% N2, 5% CO2PanGas AG
Антипирин (N-метил-14C)Американская радиомаркированная химическая компания, Inc.АРК 0108-50 μ CiВНИМАНИЕ: радиоактивный материал (удельная активность: 55 мКи/ммоль)
Сцинтилляционный коктейль (IrgaSafe Plus)Zinsser Analytic GmbH1003100
Частицы полистирола 80 нмPolyscience, Inc.17150
Частицы полистирола 500 нмPolyscience, Inc.17152
EQUIPMENT
Водяная баняVWR462-7001
ТермостатIKA-Werke GmbH Co. KG3164000
Перистальтические насосыIsmatecISM 833
Пузырьковые ловушки (стекло)UNI-GLAS Laborbedarf
Датчик давления + Программное обеспечение для анализаMSR Electronics GmbH145B5
НоутбукHewlett Packard
Миниатюрный газообменный оксигенаторЖивые системы Контрольно-измерительные приборыLSI-OXR
Tygon Tube (ID: 1,6 мм; Наружный диаметр: 4,8 мм)IsmatecMF0028
Трубки для насосов (PharMed BPT; ID: 1.52 мм)IsmatecSC0744
Тупые канюли ( 0.8 мм)Медицинский центр Полимед03.592.81
Тупые канюли ( 1.2 мм)Медицинский центр Полимед03.592.90
Тупые канюли ( 1.5 мм)Медицинский центр Полимед03.592.94
Тупые канюли ( 1.8 мм)Медицинский центр Полимед03.952.82
ПарапленкаVWR291-1212
Перфузионная камера с держателем ткани (оргстекло)Внутренний технический отделАналогичное оборудование доступно в Hemotek Limited, Великобритания
Хирургический шовный материал (PremiCron)B. Braun Medical AGC0026005
набор для инфузионной терапии крылатой иглой (21G Butterfly)Hospira, Inc.ASN 2102
Многонаправленный стопорный кран (Discofix C-3)B. Braun Medical AG16494C
Хирургические ножницыB. Braun Medical AGBC304R
Ножницы для пресеченияB. Braun Medical AGBC162R
ИглодержательB. Braun Medical AGBM200R
Щипцы для рассеченияB. Braun Medical AGBD215R
Автоматизированная система оценки газов крови Радиометр медицинский ApSABL800 FLEX
Многорежимный микропланшетный считывательBioTekSynergy HT
Жидкостный сцинтилляционный анализаторGMI, Inc.Packard Tri-Carb 2200
Сцинтилляционные пробирки 5,5 млZinsser Analytic GmbH3020001
тканевый гомогенизаторOMNI, Inc.pH-метр TH-220
+ электродVWR662-2779
Проточный нагреватель UNI-GLAS Laborbedarf

Ссылки

  1. Ala-Kokko, T. I., Myllynen, P., Vahakangas, K. Ex vivo perfusion of the human placental cotyledon: implications for anesthetic pharmacology. Int. J. Obstet. Anesth. 9, 26-38 (2000).
  2. Panigel, M., Pascaud, M., Brun, J. L.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

транспорт ксенобиотиковперенос наночастицплацента человекамодель ex vivoплацентарный барьерполистирольные наночастицыматеринско-плодовой переносперфузионная камерапассивная диффузия