Парабиотического соединение двух организмов приводит к развитию общей системы кровообращения. В этом протоколе, мы описываем хирургические шаги по формированию парабиотического связь между мыши дикого типа и конститутивного GFP-экспрессирующих мыши.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Парабиозе у мышей: подробный протокол
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Парабиозе это хирургическая объединение двух организмов, позволяющих совместное использование кровообращения. Прикрепление кожу двух животных способствует формированию микрососудов в месте воспаления. Парабиотического партнеры поделиться своими циркулирующих антигенов и, следовательно, свободны от неблагоприятного иммунной реакции. Впервые описан Paul Bert в 1864 году 1, парабиозом операция была уточнена Бунстер и Мейера в 1933 для улучшения выживаемости животных 2. В текущем протокола, две мыши хирургически соединены следующие модификации Бунстер и Meyer техники. Животные подключены через локтевых и коленных суставов, после чего прикрепления кожи, позволяющей твердую поддержку, которая предотвращает нагрузку на ушивают кожи. Здесь мы подробно парабиотического присоединения вездесущий GFP, выражающей мыши дикого типа (WT) мыши. Через две недели после процедуры пара отделяется и GFP-положительных клеток могут быть обнаружены с помощью анализа проточной цитометрии в циркулирующей кровиион мыши мас. Химеризм крови позволяет изучить вклад циркулирующих клеток из одного животного в другой.
Введение
Парабиозе, хирургическое соединение двух организмов, был впервые описан в 1864 году Полом Bert как способ разработки модель для изучения общих кровеносной систем и состоял из присоединение кожи и мышечных стенок двух крыс 1. Парабиозе способствует формированию микрососудов в месте воспаления 3 и имел несколько приложений в физиологических исследований, такие как гормональный связи между гипофизом и половыми железами, а также роли почек при гипертонической болезни 4. Кроме того, было использован для расследования вербовки и интеграции клеток-предшественников в неоваскуляризации 5, миграции гемопоэтических стволовых клеток
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все исследования на животных были проведены в соответствии с руководящими принципами уходу и использованию животных комитета Калифорнийского университета и Национального института Руководство здравоохранения для уходу и использованию лабораторных животных. Продолжительность процедуры, описанной ниже примерно 45-60 мин от начала до конца.
1. Подготовка операционного поля
- Выполните процедуру в чистом животных операционной.
- Оборудование: изофлюран испаритель, Gaymer Т насос с грелку.
- Стерильные инструменты: две изогнутые щипцы, тонкие ножницы, иглодержатель.
- Стерильные перчатки должны быть использован....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Ожидаемый результат парабиозе двух организмов равна вклад сосудистой системы каждого животного к общей кровообращения (рис. 2). Легко проверить, успешное уравновешивание кровью parabiosed WT и GFP положительного мышей по проточной цитометрии анализа. Здесь венозной крови получали из хвостов обоих parabionts через 2 недели после операции и фракционировали на клетках периферической крови (эритроцитов, чтобы исключить). Гемопоэтических полученные фракции фракционируют клеток затем анализировали с помощью п.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Метод парабиозом обсуждается здесь представляет минимальные технические трудности и приводит к низкой смертности. Крепление коленных и локтевых суставов является значительное улучшение Бунстер и Meyer техники. Тем не менее, процедура остается инвазивной таким образом поддержание стерильных условиях всей операции является обязательным условием. Для дальнейшего предотвращения инфицирования хирургического участка, важно, что parabiosed животные получают комбинацию антибиотиков и контролироваться на регулярной основе. Для о.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют конкурирующие финансовые интересы.
Благодарности
Авторы хотели бы поблагодарить Adriane Мосли и Libuše Jerabek (Stanford) за помощь в хирургической техники.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Изофлуран-Феникс | Клиппер | NDC 57319-559-06 | |
| Индукционная камера Posi-Seal | Продукты молекулярной визуализации | AS-01-0530-SM | |
| Портативная система анестезии | Продукты молекулярной визуализации | AS-01-0007 | |
| Насос Gaymer T | Gaymar Industries, Inc | TP650 | |
| Согревающее одеяло (грелка) | Kent Scientific Corp | TP-22G | |
| Изогнутые щипцы | Roboz | RS-5101 | |
| Ножницы | Fine Science Tools (FST) | FST 14063-09 | |
| Иглодержатель | FST | FST 12501-13 | |
| Электробритва | Oster | Golden A5 |
Ссылки
- Bert, P. Expériences et considérations sur la greffe animale. Journal de l'Anatomie et de la Physiologie. 1, 69-87 Forthcoming.
- Bunster, E., Meyer, R. K. Improved methods of parabiosis. Anat. Rec. 57, 339-380 (1933).
- Waskow, C.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
