Методическая статья

Универсальная автоматизированная платформа для микро-масштабе Эксперименты стимуляции клеток

DOI:

10.3791/50597

⸱

6 августа 2013 г.

 ,  ,  ,  , 
1Department of Systems Biology, Sandia National Laboratories, 2Department of Biotechnology and Bioengineering, Sandia National Laboratories, 3Canon U.S. Life Sciences, 4Department of Advanced Systems Engineering and Deployment, Sandia National Laboratories

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы разработали автоматизированную культуре клеток и допроса платформы для микро-масштабе экспериментов стимуляции клеток. Платформа предлагает простые, универсальный и точный контроль в выращивании и стимулирования небольших популяциях клеток и восстановление лизаты для молекулярного анализа. Платформа хорошо подходит для исследования, которые используют драгоценные клетки и / или реагентов.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Изучение клеток в культуре (в пробирке анализа) предоставил важное понимание сложных биологических систем. Обычные методы и оборудование для анализа в пробирке хорошо подходят для изучения большого количества клеток (≥ 10 5) в миллилитре масштабе объемы (≥ 0,1 мл). Однако существует много случаев, когда это необходимо или желательно уменьшать размер культура сократить потребление интересующих клеток и / или реагенты, необходимые для их культуры, стимуляции или обработки. К сожалению, традиционные подходы не поддерживают точные и воспроизводимые манипуляции микро-масштабе культур и микрофлюидики основе автоматизированных систем в настоящее время являются слишком сложными и специализированными для рутинного использования в большинстве лабораторий. Чтобы решить эту проблему, мы разработали простой и универсальной технологической платформы для автоматизированного культуры, стимулирование и восстановление малых популяциях клеток (100 - 2000 клеток) в микро-масштабе объемс (1 - 20 мкл). Платформа состоит из набора фибронектина покрытием микрокапиллярах ("ячейки перфузии камеры"), в пределах которой микро-масштабе культур установлено, сохраняется, и стимулировали; цифровой микрофлюидики (ДМФ) устройство оснащено "передача" микрокапиллярах ("центрального узла »), который маршрутов клеток и реагентов к и от перфузии камеры; высокоточных шприцевой насос, который приводит транспортировки материалов между перфузии камеры и центральным узлом, и электронный интерфейс, который обеспечивает контроль над транспортировки материалов, которые скоординированы и автоматизированы с помощью заранее определенных сценариев. В качестве примера мы использовали платформу для облегчения изучения транскрипционной реакции, индуцируемые в иммунных клетках на заражение бактериями. Использование платформы позволило нам сократить потребление клетками и реагенты, свести к минимуму эксперимент до эксперимента изменчивость, и перенаправляют практический труд. Учитывая преимущества, что оно придает, а также его доступности и универсальности, оур платформа должна найти применение в самых различных лабораторий и приложений, а также оказаться особенно полезны в облегчении анализа клеток и стимулов, которые доступны только в ограниченных количествах.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Изучение клетки поддерживали в культуре (в пробирке анализа) предоставил бесценный понимании фундаментальных принципов и молекулярных механизмов, регулирующих сложные биологические системы и здоровье человека. Обычных методов культуры, стимулирование, и сбор клеток для анализа, которые используют чашки Петри и планшеты для микротитрования, были разработаны для изучения больших популяций клеток (≥ 10 5) в миллилитре масштабе объемов культуры (≥ 0,1 мл). Тем не менее, есть много случаев, в которых только ограниченное количество клеток доступны (например, первичные клетки) или небольшой популяции клеток желательно (например, для уменьшения клетка-клетка изменчивость среди населения) или необходимых реагентов трудно получить или слишком дорого (например, очищенные клетки секретируемых факторов). Такие вопросы могут быть успешно решены путем масштабирования вниз культуре размера, который имеет дополнительное преимущество снижения потребления всехреагенты для анализа в 1,2 пробирке. К сожалению, обычные оборудование и методы, не поддерживают точные и воспроизводимые манипуляции микро-масштабе культур и микрофлюидики основе автоматизированных систем в настоящее время 3-11, слишком сложны и специализированные для рутинного использования в большинстве лабораторий.

В этом докладе мы описываем сборку и использование простой и универсальной технологической платформы для автоматизированного культуры, стимулирование и восстановление малых популяциях клеток (100 - 2000 клеток) в микро-масштабе объемы (1 - 20 мкл). Архитектура платформы (рис. 1) имеет модульную структуру: набор фибронектина покрытием микрокапиллярам ("ячейки перфузии камеры" модуль) служит в качестве площадки для установления, поддержания и стимулирования микро-масштабе культур и цифровые микрофлюидики (DMF ) 12,13 Устройство оснащено "передача" микрокапиллярам ("центральный узел" модуль) 14,15 маршрутах клеткии реагенты, и из перфузии камеры. DMF позволяет пользователю индивидуально адресации нескольких капель и одновременно изменить или изменить порядок манипуляций (т.е. перенастроить поездов обработки образцов) без изменения аппаратного устройства. Его огромную гибкость проявляется в его недавнее появление как ключевая технология в широком диапазоне применений, включая клеточную культуру 16,17, 18,19 ферментные тесты, иммунологические 20,21, 22,23 анализа ДНК, белков переработки, 24,25 и клинической обработки образца. 26,27 Наш центральный узел использует гибкость присущие ДМФА устройств, а также дополнительно усиливает его посредством добавления микрокапиллярных интерфейса, который предоставляет возможность осуществлять подмножество манипуляции (например, клеточная культура) в специализированных периферийных модулей, а не на устройстве ДМФА себя. Компартментализацией обработки поездов на этом пути также упрощает конструкцию плаTForm архитектуры (не нужно строить DMF устройство, которое может выполнять все этапы обработки) и облегчает его эволюцию как новые функции требуется (просто интегрировать новые периферийные модули по мере необходимости). Транспорт клеток и реагентов в пределах центрального узла обусловлен электросмачивания сил, возникающих при последовательной активации электродов в устройстве DMF 13,28; транспорта в, из и в пределах перфузии камеры питается от изменения давления порожденных высокоточных шприца насосе. Все эти жидкости движения управляется с помощью простой электронный интерфейс и автоматизирован посредством использования заранее определенных сценариев.

В качестве иллюстративного примера, мы демонстрируют использование платформы для изучения транскрипционной реакции, индуцируемые в иммунных клетках на заражение бактериями (рис. 2). Проведение этих экспериментов на платформе позволило нам работать с небольшим количеством клеток (~ 1000 в экспериментальныхТаль условие), свести к минимуму эксперимента до эксперимента изменчивости, экономии реагентов и перенаправить практический труд. Учитывая преимущества, что оно придает, а также его доступности и универсальности, эта платформа должна найти применение в самых различных лабораторий и приложений и быть особенно полезно в облегчении анализа клеток и стимулов, которые доступны только в ограниченных количествах.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Этот общий протокол предназначен для поддержки применения платформы для самых разнообразных исследований; аспекты, характерные для представителем исследовании, описанном в этом докладе отделяются в скобках Фиг.2 иллюстрирует представитель исследований, проведенных с использованием протокола.. Следует отметить, что в протоколе, все "указания" команды автоматизированы посредством использования заранее определенных сценариев. Обратите внимание на то, что шаг 2 может осуществляться параллельно с этапом 1 (например, во время шагов 1.7 и 1.8), и этот шаг 2,1 часто обходили (потому узорные / покрытие пластин DMF устройства можно мыть и использовать повторно, см. шаг 5.2) .

1. Соберите и заполнения палат Сотовые перфузии

  1. Нанести на внутренней поверхности стерилизованных (автоклаве) микрокапиллярах (из кварцевого стекла; 679 мкм ОД, идентификатор 534 мкм, 15 см в длину) с фибронектином, посредством инструктирования шприцевой насос, чтобы привлечь стерильного раствора фибронектина (30 мкл 50 мкг / мл) в каждыймикрокапиллярных, инкубации (37 ° С в течение 2 часов), поручив шприцевой насос, чтобы вывести решение, и позволяя микрокапиллярам сухие (комнатной температуре (RT) в течение 6 ч).
  2. Подключите каждый фибронектина покрытием микрокапиллярных (перфузии камеры) для поликарбоната труб (диаметр 500 мкм, 100 мкм ID) и трубки к многоходовой шприцевой насос, используя CapTite гарнитуры (6 перфузии камеры, 8-портовый шприцевой насос).
  3. Использование ленты крепления кузова перфузия каждой камеры в нагревательный блок установлен на желаемую температуру (37 ° C).
  4. Погружают открытые концы перфузии камеры в резервуар (трубка microcentifuge или планшет для микротитрования а), содержащий клеток (P388D.1 мышиных макрофагах) суспендируют в свежей питательной среды (RPMI-1640, 10% FBS, 500 единиц / мл пенициллина, 500 мкг / мл стрептомицина) в необходимой концентрации (10 6 клеток / мл).
  5. Поручить шприцевой насос, чтобы привлечь клетки (10 мкл, 10 4 клеток) в каждую камеру перфузии последующим достаточно А.И.т, чтобы переместить жидкость пробка (~ 4,5 см), в секцию прикреплена к нагревательный блок.
  6. Разрешить клетки придерживаться фибронектина покрытием внутренних поверхностей перфузии камеры (37 ° C в течение 1 - 2 ч). В то же время передачи открытые концы перфузии камеры из резервуара клетки на новый резервуар, содержащий свежую среду роста.
  7. После присоединения периода инструктировать шприцевой насос для отправки жидкого пробки (кондиционированных сред и неприкрепленной клетки) в отходы, снять свежую среду (10 мкл), а затем с достаточно воздуха, чтобы расположить новую жидкость пробки (свежей среды) в течение придерживались клетках.
  8. Продолжайте выполнять средние обмены (т.е. повторите шаг 1.7) через регулярные промежутки времени (каждые 2 часа), пока клеточные популяции не является достаточно уравновешенной и расширенный (16 - 24 ч микро-масштабе культуры генерируется популяций ~ 1000 клеток / камера).

2. Изготовление DMF устройств и собрать Hub Architecture

    Как описано выше 14,29, шаблон нижней панели устройства ДМФА сорок шесть оксида индия и олова (ITO) электрода (драйверы капель приведение в действие) посредством фотолитографии и травления и слой с 5 мкм Parylene-C и 50 нм из тефлона-AF. Формирования верхней панели устройства DMF покрытием ITO стекла без рисунка подложки с тефлоновым AF, как указано выше.
  1. Использование металлических конструкций сжатие, зафиксировать ДМФА пластин в литой полимер 14,30 с углублениями, которые поддерживают 400 мкм расстояние между пластинами; этот интервал, в сочетании с размером приведение в действие электрод (2,5 мм 2), определяющий объем капли (2,5 мкл на электрод). Следует отметить, что ДМФ сборка может быть выполнена более простыми средствами 24.
  2. Вставка тефлоновым покрытием передачи микрокапиллярах (360 мкм ОД, 100 мкм идентификатор, 3,5 - 4,0 см) в пространство между пластинами ДМФА, позиционирование каждого распространяться на краю его родственные электрод приведения в действие.
  3. На противоположной END каждой передаче микрокапиллярных прикрепить CapTite Место.
  4. Включите электрические разъемы подачи напряжения на электроды ITO. Электрод последовательности активации автоматизированы путем использования управляемых компьютером электронный интерфейс работает заранее определенных сценариев.
  5. Дополнительно: Переместить собраны DMF ступицу на стадии поступательного микроскопом (SZ-6145TR (Olympus, Япония)), снабженный прибор с зарядовой связью (ПЗС) камеры (DCR-HC96 (Sony, Япония)) для облегчения отслеживания капель 31.

3. Подключите перфузии палат в Хаб DMF и стимулируют клеточные популяции

  1. Удалить открытые концы перфузии камеры из среды резервуар (см. шаг 1.6) и вставить их в CapTite фитинги, прикрепленные к концам передачи микрокапиллярах концентратора ДМФА (см. шаг 2.4).
  2. Поручить шприцевой насос для отправки жидкого пробки (кондиционированные среды) в перфузионной камеры для отходов.
  3. Ин-тruct концентратор ДМФА рисовать стимул (E.coli BioParticles в концентрации 100 мкг / мл в свежей среде с 0,1% Pluronic F127 вес / объем) от бортового резервуара и доставлять капли соответствующего размера (10 мкл) в каждой передаче микрокапиллярных . Бортовой резервуаров состоят из цилиндрических отсеков (1,5 х 1,5 см каждый) и подключенный к концентратору ДМФА через трубопровод.
  4. Поручить шприцевой насос, чтобы привлечь стимулом подключается к передаче микрокапиллярам, ​​и следовать с достаточно воздуха, чтобы позиционировать пробки на клеточных популяций в перфузионной камеры.
  5. Инкубируйте клетки с стимула (37 ° С в течение 1 - 4 ч). Дополнительно: Обмен на свежий стимул (т.е. повторите шаги 3.2-3.4) на регулярной основе.

4. Завершить Стимуляция и восстановление клеточных лизатов анализа

  1. Необязательно: Если после периода стимуляции требуется, обменять стимул жидкости, содержащей разъемы для свежей средой (т.е. повторите шаги 3,2 - 30,4, заменяя свежую среду для стимула), и продолжают инкубировать и обменивать по мере необходимости.
  2. Биржа жидкости пробки в перфузионной камеры для промывочного буфера (буфера прелюдия Прямая модуль Лизис B) (то есть повторить шаги 3.2 - 3.4, заменяя промывочного буфера для стимула), и инкубируют при необходимости (5 мин).
  3. Биржа жидкости пробки (промывочный буфер) для лизирующего раствора (прелюдия Прямая буфера для лизиса модуль с 0,1% Pluronic F127 вес / об) (т.е. повторите шаги 3,2 - 3,4, заменяя лизирующего раствора для стимула), и инкубируют при необходимости (5 мин) .
  4. Поручить шприцевой насос для отправки жидкой пробки (клеточные лизаты) к ступице ДМФ.
  5. Разберите ступицу DMF, снимите верхнюю панель устройства DMF (используя осторожны, чтобы не наклонить пластину в сторону, так как это может привести к капле перемешивания), и собирать лизатов использованием Pipetman или шприц для офф-платформа анализа (профилирования экспрессии генов с помощью количественной ПЦР).

5. Чистый аппаратную платформу дляПовторное использование

  1. Погрузите передачи микрокапиллярам CapTite и арматуры в 10% отбеливателя (V / V в воде) в течение 10 минут при комнатной температуре, хорошо промыть деионизированной водой и сухой с использованием газообразного азота.
  2. Погружают ДМФА пластины в устройстве 10% отбеливателя в течение 10 мин при комнатной температуре, хорошо промыть изопропанол последующим деионизированной водой и сушат с использованием газообразного азота последующей выпечки при 160 ° С в течение 10 мин.
  3. Поликарбонатной трубки шприцевой насос, а полимер устройства ДМФА броска и сжатие кадра, могут быть повторно использованы без очистки. Перфузии камеры микрокапиллярам отбрасываются после каждого эксперимента.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В качестве демонстрации автоматизированную платформу, мы использовали его для проведения исследования, в котором небольшие популяции иммунных клеток выращивали в микро-масштабе культур, зараженных бактериями, и лизируют для офф-платформа анализа про-воспалительных реакций (рис. 2 ).

Каждый из шести камер клетки перфузии засевали 10 4 иммунные клетки (P388D.1 мышиных макрофагах) ресуспендировали в 10 мкл среды для роста. После соблюдение периода (37 ° С в течение 2...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы разработали простой и универсальной автоматизированной платформы для микро-масштабе культуре клеток и стимуляции экспериментов. Платформа позволяет нам работать с небольшими объемами культуры и клеточных популяций (1 - 20 мкл и 100 - 2000 клеток, в камере); культуры размеров может быть снижен за счет использования микрокапиллярам меньшего диаметра. Рабочие на этих масштабах снижает стоимость рутинных исследований и делает возможным исследованиях, связанных с использованием драгоценных реагентов и / или клето...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы благодарят Рональд Ф. Рензи и Майкл С. Барч за их вклад в проектирование и разработку устройств DMF и ступицей DMF. Это исследование было полностью поддерживается лаборатории, которой руководил научно-исследовательской программы в Sandia National Laboratories. Sandia является многопрофильным программы лаборатории управляется и эксплуатируется Sandia Corporation, дочерняя компания корпорации Lockheed Martin, для американского Министерства Национальной энергетической администрации по ядерной безопасности в рамках контракта DE-AC04-94AL85000.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Prelude Direct Lysis ModuleNuGEN1400-24
Trypan Blue (0,4% w/v)GIBCO15250-061
Cell StripperCellgro25-056-C1
Ovation PicoSL WTANuGEN3310-048
Agencourt RNAClean XPBeckman Coulter GenomicsA63987
pHrodo BioParticlesInvitrogenP35361
CCL4 TaqMan qRT-PCR анализApplied BiosystemsMm00443111_m1
CCL5 TaqMan qRT-PCR анализApplied BiosystemsMm01302428_m1
PTGS2 TaqMan qRT-PCR анализApplied BiosystemsMm00478374_m1
TNF TaqMan qRT-PCR анализApplied BiosystemsMm00443258_m1
GAPDH TaqMan qRT-ПЦР анализПрикладные биосистемыMm99999915_g1
Плурон F127Sigma Chemical2594628
Fluorinert FC-40Sigma Chemical51142-49-5
Парилен C димерСпециальные системы покрытий28804-46-8
Teflon-AFDuPontAF1600
Полиимидная лентаULINES-11928
Стеклянные подложки с покрытием из оксида индия и олова (ITO) Delta TechnologiesCB-40IN-1107
Концентратор DMF с тефлоновым покрытием микрокапилляры из плавленого кремнеземаPolymicro TechnologiesTSU100375
Перфузионная камера микрокапиллярыPolymicro TechnologiesTSP530700
трубки и микрокапиллярные фитингиSandia National Laboratories
Поликарбонатная трубкаParadigm OpticsCTPC100-500-5
8-портовый прецизионный шприцевой насос, оснащенный 30 мм (500 μ емкость) шприцыHamilton Company54848-01
Прибор для осаждения парилен-C из паровойСпециальные системы покрытийPDS 2010 Labcoter 2
Высоковольтный функциональный генераторTrek615A-1 615-3
MVX10 микроскопOlympusОпционально (облегчает отслеживание капель на концентраторе DMF)
QIClick цифровая ПЗС-камераQImagingQIClick-F-CLR-12Опционально (облегчает отслеживание капель на концентраторе DMF)
фазы

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Young, E. W. K., Beebe, D. J. Fundamentals of microfluidic cell culture in controlled microenvironments. Chemical Society Reviews. 39, 1036-1048 (2010).
  2. Yeo, L. Y., Chang, H. C., Chan, P. P. Y., Friend, J. R. Microfluidic devices for bioapplications. Small. 7, 12-48 (2011).
  3. Zhang, B., Kim, M. C., Thorsen, T., Wang, Z. A self-contained microfluidic cell culture system. Biomedical Microdevices. 11, 1233-1237 (2009).
  4. Skafte-Pedersen, P., et al. A self-contained, programmable microfluidic cell culture system with real-time microscopy access. Biomedical Microdevices. 14, 385-399 (2012).
  5. Barbulovic-Nad, I., Au, S. H., Wheeler, A. R. A microfluidic platform for complete mammalian cell culture. Lab Chip. 10, 1536-1542 (2010).
  6. Zhou, Y., Pang, Y., Huang, Y. Openly Accessible Microfluidic Liquid Handlers for Automated High-Throughput Nanoliter Cell Culture. Analytical Chemistry. 84, 2576-2584 (2012).
  7. Wang, H. Y., Bao, N., Lu, C. A microfluidic cell array with individually addressable culture chambers. Biosensors and Bioelectronics. 24, 613-617 (2008).
  8. Cimetta, E., Cagnin, S., Volpatti, A., Lanfranchi, G., Elvassore, N. Dynamic culture of droplet-confined cell arrays. Biotechnology Progress. 26, 220-231 (2010).
  9. Hung, P. J., Lee, P. J., Sabounchi, P., Lin, R., Lee, L. P. Continuous perfusion microfluidic cell culture array for high-throughput cell-based assays. Biotechnology and Bioengineering. 89, 1-8 (2005).
  10. King, K. R., et al. A high-throughput microfluidic real-time gene expression living cell array. Lab on a Chip. 7, 77-85 (2007).
  11. Gómez-Sjöberg, R., Leyrat, A. A., Pirone, D. M., Chen, C. S., Quake, S. R. Versatile, fully automated, microfluidic cell culture system. Analytical Chemistry. 79, 8557-8563 (2007).
  12. Wheeler, A. R. Chemistry - Putting electrowetting to work. Science. 322, 539-540 (2008).
  13. Gong, J., Kim, C. J. All-electronic droplet generation on-chip with real-time feedback control for EWOD digital microfluidics. Lab Chip. 8, 898-906 (2008).
  14. Choi, K., et al. Integration of field effect transistor-based biosensors with a digital microfluidic device for a lab-on-a-chip application. Lab Chip. 12, 1533-1536 (2012).
  15. Barbulovic-Nad, I., Yang, H., Park, P. S., Wheeler, A. R. Digital microfluidics for cell-based assays. Lab Chip. 8, 519-526 (2008).
  16. Gentilucci, L., de Marco, R., Cerisoli, L. Chemical modifications designed to improve peptide stability: incorporation of non-natural amino acids, pseudo-peptide. 16, 3185-3203 (2010).
  17. Miller, E. M., Wheeler, A. R. A digital microfluidic approach to homogeneous enzyme assays. Anal. Chem. 80, 1614-1619 (2008).
  18. Jebrail, M. J., Bartsch, M. S., Patel, K. D. Digital microfluidics: a versatile tool for applications in chemistry, biology. 12, 2452-2463 (2012).
  19. Ng, A. H. C., Choi, K., Luoma, R. P., Robinson, J. M., Wheeler, A. R. Digital Microfluidic Magnetic Separation for Particle-Based Immunoassays. Analytical Chemistry. 84, 8805-8812 (2012).
  20. Sista, R. S., et al. Heterogeneous immunoassays using magnetic beads on a digital microfluidic platform. Lab Chip. 8, 2188-2196 (2008).
  21. Malic, L., Veres, T., Tabrizian, M. Biochip functionalization using electrowetting-on-dielectric digital microfluidics for surface plasmon resonance imaging detection of DNA hybridization. Biosens. Bioelectron. 24, 2218-2224 (2009).
  22. Malic, L., Veres, T., Tabrizian, M. Nanostructured digital microfluidics for enhanced surface plasmon resonance imaging. Biosens. Bioelectron. 26, 2053-2059 (2011).
  23. Jebrail, M. J., Wheeler, A. R. Digital microfluidic method for protein extraction by precipitation. Anal. Chem. 81, 330-335 (2009).
  24. Nelson, W. C., et al. Incubated protein reduction and digestion on an electrowetting-on-dielectric digital microfluidic chip for MALDI-MS. Anal. Chem. 82, 9932-9937 (2010).
  25. Mousa, N. A., et al. Droplet-scale estrogen assays in breast tissue, blood, and serum. Sci. Transl. Med. 1, 1ra2(2009).
  26. Jebrail, M. J., et al. A digital microfluidic method for dried blood spot analysis. Lab Chip. 11, 3218-3224 (2011).
  27. Choi, K., Ng, A. H. C., Fobel, R., Wheeler, A. R. Digital microfluidics. Annual Review of Analytical Chemistry. 5, 413-440 (2012).
  28. Jebrail, M. J., et al. Digital Microfluidics for Automated Proteomic Processing. J. Vis. Exp. (33), e1603(2009).
  29. Thaitrong, N., et al. Quality Control of Next Generation Sequencing Library through an Integrative Digital Microfluidic Platform. , Submitted (2012).
  30. Shin, Y. J., Lee, J. B. Machine vision for digital microfluidics. Review of Scientific Instruments. 81, (2010).
  31. Thornton, M., Eward, K. L., Helmstetter, C. E. Production of minimally disturbed synchronous cultures of hematopoietic cells. BioTechniques. 32, 1098-1105 (2002).
  32. Huang, X., Dai, W., Darzynkiewicz, Z. Enforced adhesion of hematopoietic cells to culture dish induces endomitosis and polyploidy. Cell Cycle. 4, 801-805 (2005).
  33. Raje, M., et al. Charged nylon membrane substrate for convenient and versatile high resolution microscopic analysis of Escherichia coli & mammalian cells in suspension culture. Cytotechnology. 51, 111-117 (2006).
  34. Chatterjee, D., Hetayothin, B., Wheeler, A. R., King, D. J., Garrell, R. L. Droplet-based microfluidics with nonaqueous solvents and solutions. Lab Chip. 6, 199-206 (2006).
  35. Perroud, T. D., et al. Microfluidic-based cell sorting of Francisella tularensis infected macrophages using optical forces. Analytical Chemistry. 80, 6365-6372 (2008).
  36. Wang, Z., Gerstein, M., Snyder, M. RNA-Seq: A revolutionary tool for transcriptomics. Nature Reviews Genetics. 10, 57-63 (2009).
  37. Malone, J. H., Oliver, B. Microarrays, deep sequencing and the true measure of the transcriptome. BMC Biology. 9, (2011).
  38. Wu, M., et al. Microfluidically-unified cell culture, sample preparation, imaging and flow cytometry for measurement of cell signaling pathways with single cell resolution. Lab on a Chip. 12, 2823-2831 (2012).
  39. Srivastava, N., et al. Fully integrated microfluidic platform enabling automated phosphoprofiling of macrophage response. Analytical Chemistry. 81, 3261-3269 (2009).
  40. Herr, A. E., et al. Microfluidic immunoassays as rapid saliva-based clinical diagnostics. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104, 5268-5273 (2007).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Micro scale Cell CultureDigital MicrofluidicsCell Perfusion ChambersSyringe Pump ControlAutomated Cell StimulationQuantitative RT PCR AnalysisFibronectin CoatingMicrocapillary TransportCell Lysate RecoveryImmune Cell Stimulation

Похожие статьи