Человеком 8-оксогуанин ДНК-гликозилаза (OGG1) вырезает мутагенных окислительное повреждение ДНК 8-оксо-7 ,8-dihydroguanine (8-oxoG) из ДНК. Кинетическая характеристика OGG1 проводится для измерения скорости 8-oxoG иссечение и выпуска продукции. Когда OGG1 концентрации ниже, чем субстратной ДНК, временной ход образование продукта являются двухфазные; быстрый экспоненциальной фазе (т.е. разрыв) образования продукта следует линейной стационарной фазы. Первоначальный выброс образования продукта соответствует концентрации фермента в зацепление на подложке, и взрыв амплитуда зависит от концентрации фермента. Первого порядка константа скорости взрыв соответствует истинный коэффициент 8-oxoG иссечение и медленнее стационарного скорости измеряет скорость выпуска продукта (продукт ДНК константы скорости диссоциации, K OFF). Здесь мы описываем стационарный, предварительно стационарных и одного оборота подходы для выделения и измерения зрecific шаги во OGG1 каталитического велоспорт. Меченных флуоресцентными поражение-содержащий олигонуклеотид и очищенный OGG1 используются для облегчения точного кинетических измерений. Так как низкие концентрации фермента используются для стационарных измерений, ручное перемешивание реагентов и гашение реакции может быть выполнен, чтобы установить стационарные скорости (к выключен). Кроме того, экстраполяция стационарных скоростью до точки на оси ординат в нулевой момент времени показывает, что взрыв образование продукта произошла во время первого оборота (т.е. у-перехват положительна). Первого порядка константа скорости экспоненциальной фазе всплеска может быть измерена с использованием быстрое смешивание и закалки метод, который проверяет объем продукта, полученного на короткие промежутки времени (<1 сек) до стационарной фазы и соответствует скорости 8 -oxoG иссечение (т.е. химии). Химические стадии, может также быть измерена с использованием одного оборота подход, при котором каталитический велосипедепредотвратить насыщение ДНК субстрата с ферментом (E> S). Эти подходы можно измерять элементарных констант скорости, которые влияют на эффективность удаления повреждений ДНК.