В естественных условиях 19 F МРТ для отслеживания сотовых

Краткое содержание

Мы опишем общую протокол для естественных отслеживания клеток при помощи МРТ в мышиной модели с бывших естественных условиях меченых клеток. Типичный протокол для маркировки клеток, обработки захвата изображений и количественного включен.

Аннотация

В естественных условиях ¹⁹ F МРТ позволяет отслеживать количественные клеток без использования ионизирующего излучения. Это неинвазивный метод, который может быть применен для человека. Здесь мы описываем общий протокол для маркировки клеток, работы с изображениями, и обработки изображений. Методика применима к различным типам клеток и животных моделях, хотя и здесь мы ориентируемся на типовой модели мыши для отслеживания мышиных иммунных клеток. Наиболее важные вопросы для маркировки клеток описаны, так как они относятся ко всем моделям. Аналогичным образом, основные параметры изображений перечислены, хотя подробности будут изменяться в зависимости от системы МРТ и индивидуальной настройки. Наконец, мы включили протокол обработки изображений для количественного определения. Вариации для этого, и другие части протокола, оцениваются в разделе обсуждения. На основе детального процедурой, описанной здесь, пользователю нужно будет адаптировать протокол для каждого конкретного типа клеток, этикетки клеток, животной модели, и настройки изображения. Отметим, что рrotocol также могут быть адаптированы для использования человеком, пока клинические ограничения будут выполнены.

Введение

В отслеживания естественных клеток имеет важное значение для оптимизации и контроля сотовых терапии ^1. Благодаря своей неинвазивной природы, изображения предлагает отличные возможности для мониторинга клетки в естественных условиях. Магнитно-резонансная томография (МРТ) не зависит от ионизирующего излучения и позволяет превосходное разрешение изображений и внутреннюю мягких тканей отличие. Отслеживание клеток МРТ на основе уже использовался клинически следовать дендритных клеток в больных меланомой ^2. Обычные клинические МРТ осуществляется на ¹ Н-ядром, присутствующих в подвижной воды в тканях. Кроме того, м....

Протокол

Примечание: Все эксперименты и процедуры с участием животных должно проводиться в соответствии с соответствующими этическими принципами, а также соответствовать стандартным ухода за животными и гуманных требований.

1. Маркировка ячеек (Стандартный протокол с Coincubation)

1. Добавить ¹⁹ F ⁸ метку в незрелых ДК в концентрации 4 мг/10 ⁶ клеток (в 2 мл среды). Хорошо перемешать, чтобы перемешать.
2. Инкубируйте клетки с лейблом в течение 3 дней до созревания и уборки РС.
3. Соберите РС и удалить излишки этикетку промывкой по крайней мере 3-кратным в PBS. Граф клеток.
4. Ресуспенди....

Результаты

Здесь показано типичные результаты для протокола с переносом ¹⁹ F-меченых клеток самонаводящихся к сливной лимфатического узла. Рисунок 2 показывает ¹⁹ F ЯМР-спектр 10 ⁶ меченых клеток с использованием опорного TFA. Установка изображений проводили, как описано в протоколе (рис. 3). Для естественных изображений, мы использовали ссылку, состоящий из герметичного цилиндра того же этикетке используемого для клеток, расположенных между ног мыши. Пред.......

Обсуждение

Протокол изложил здесь описывается общий порядок в естественных условиях ¹⁹ отслеживания F МРТ клеток. Несмотря описанного способа совместной инкубации, существует несколько различных протоколов для мечения клеток с ¹⁹ F агента. Тем не менее, совместной инкубации наиболее часто используется и можно дополнительно оптимизировать, например, добавлением агентов трансфекции ^6. Фактическое протокол мечения клеток будет зависеть от типа клеток. Только ключевые шаги маркировки .......

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
REAGENTS
PBS	Sigma-Aldrich	MFCD00131855
TFA	Sigma-Aldrich	76-05-1
Кетамин (Кетавет)	Pfizer	778-551
Ксилазин (Ромпун)	Bayer	QN05 cm92
Офтосан	Produlab Pharma	2702	глазная мазь
Название материала
МРТ-сканер	Bruker Biospec
ЯМР-спектрометр	Bruker Biospec