Методическая статья

Использование газовой хроматографии для анализа изменения состава жирных кислот в ткани печени крыс во время беременности

DOI:

10.3791/51445

⸱

13 марта 2014 г.

 ,  ,  ,  , 
1Human Development & Health Academic Unit, Faculty of Medicine, University of Southampton

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Беременность приводит к значительным изменениям в составе жирных кислот материнских тканей. Профили липидов могут быть получены с помощью газовой хроматографии, чтобы идентификация и количественное определение жирных кислот в отдельных классов липидов среди крыс, которых кормили различные высокие и низкие жиров диеты во время беременности.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Метод газовой хроматографии (ГХ) является высокочувствительным методом, используемым для идентификации и количественного содержания жирных кислот липидов из тканей, клеток и плазмы / сыворотки, дает свои результаты с высокой точностью и высокой воспроизводимости. В исследованиях метаболических и питания GC позволяет оценить изменения концентрации жирных кислот следующих мероприятий или во время изменений в физиологическом состоянии, как беременность. Добыча твердой фазы (SPE) с помощью аминопропил кремнезема картриджей позволяет разделение основных классов липидов, включая триацилглицеринов, различных фосфолипидов, и эфиров холестерина (CE). ГК в сочетании с SPE был использован для анализа изменений в составе жирных кислот СЕ фракции в печени целинных и крыс, которые были кормили различные высокие и низкие жиров диеты. Существуют значительные эффекты взаимодействия диета / беременность от содержания омега-3 и омега-6 жирных кислот печени CE, указывая, что беременные самки имеют различный ответ на диетического manipulatионный, чем видно среди девственных самок.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Метод газовой хроматографии (ГХ) является устоявшихся метод, используемый для идентификации и количественного включение жирных кислот в липидные бассейнов и клеточных мембран 1,2 во добавок или физиологических условиях, таких как ожирение (и связанных с ним заболеваний, таких как диабет) или беременности 3 - 5. Он также подходит для анализа типов и количеств жиров в пищевых продуктах. Это полезно при характеристике экспериментальные диеты, а также обеспечение того, чтобы пищевой промышленности соответствует нормам. Например, ГК может быть использован для подтверждения личности и количество жирных кислот внутри продукта, таких как пищевая добавка для того, чтобы маркировка является правильным и правила будут соблюдаться 6,7. Анализ жирных кислот может обеспечить ценную информацию липидного обмена в норме и патологии, влияние изменения рациона питания, а также влияние изменений в физиологическом состоянии 8. Использование GC изучать образцы во время беременности оказывает важноеинформация об изменениях в жирной кислоты и сложного липидного гомеостаза 3.

В преддверии хроматографического разделения, липиды, как правило, извлекается из образца с помощью растворимости липидов в смеси растворителей хлороформ-метанол. Хлорида натрия, чтобы облегчить разделение смеси на водную и органическую фазы, содержащей липид 9,10. Сложные классы липидов интереса может быть отделен от общего липидного экстракта путем твердофазной экстракции (SPE). Этот метод разделения элюирует классы липидов на основе их полярности или аффинность связывания. Triacyglycerols (TAG) и сложные эфиры холестерина (CE), элюируют сначала в виде комбинированного фракции, еще классов, фосфатидилхолин (PC), фосфатидилэтаноламин (PE), и не этерифицированные жирные кислоты (NEFA), элюируют, увеличивая полярность элюирующего растворителя . Разделение TAG от CE использует связывание TAG только к свежим SPE патроныDGE, позволяя CE Элюируемый. TAG может быть затем элюировали путем увеличения полярность, элюируя 9,10 растворителя. Этот метод позволяет несколько образцов должны быть разделены одновременно с более высоким выходом, чем достигается при тонкослойной хроматографии, что означает, что относительно небольшие размеры образцов (например, <100 мкл плазмы или сыворотки, <100 мг ткани) могут быть проанализированы 11,12.

GC является хорошо отработанной технологией впервые описан в 1950; было предположено, что подвижная фаза в системах затем жидкость-жидкость может быть заменена с паром. Изначально он использовался для нефтяной анализа, но быстро расширяется в других областях, таких как аминокислотного анализа и липидов биохимии, которая по-прежнему большой интерес. Успехи в GC оборудования и технологий, таких как развитие капиллярных колонок из ранее использовавшихся упакованных колонках привело к наших текущих методов, в которых жирные кислоты способны бытьразделенных более эффективно при более низких температурах приводит к GC используется обычно для идентификации и количественного определения жирных кислот в широком диапазоне исследований 13.

GC требует жирные кислоты должны быть получены производные с тем, что они могут стать достаточно летучи, чтобы быть элюировали при разумных температурах без термического разложения. Это обычно включает замещение функциональной группы, содержащей водород с образованием сложных эфиров, сложные тиоэфиры или амиды для анализа. Метиловых эфиров обычно изучали производные, которые производятся путем метилирования. В этом методе сложноэфирные связи в сложных липидов гидролизуют, чтобы освободить свободные жирные кислоты, которые transmethylated с образованием метиловых эфиров жирных кислот (FAME). В результате профиль FAME, определяется GC, называют состава жирных кислот и могут быть легко по сравнению между различными экспериментальными группами 9,10. Методика позволяет обе пропорции отдельUAL жирные кислоты и их концентрации должны быть измерены.

В дополнение к использованию GC для анализа жирных кислот в питании исследований и в пищевой промышленности, методика может быть использована в широком диапазоне аналитических областей. Например, экологические анализы с использованием GC включают измерения загрязнения воды инсектицидами и почвы анализирует измерения содержания хлорбензол. В токсикологии, GC также используется для выявления запрещенных веществ в моче и образцах крови лиц; такие спортивный производительности усилители 12 и способность отделить сложные смеси углеводородов делает этот метод популярен в нефтяной промышленности для нефтехимической анализа 12.

Беременность связана со значительными изменениями в жирнокислотного состава материнской тканей, специально в содержании омега-3 (N-3) и омега-6 (п-6) полиненасыщенных жирных ациспуск (ПНЖК) 3. В текущем исследовании, мы иллюстрируют использование GC в измерении жирных кислот, описывая его использование в анализе состава жирных кислот ткани печени, взятой из целинных и беременных крыс кормили низкие и высоким содержанием жиров диеты с различными источниками нефти. Экспериментальные диеты, приведенные здесь были масляной основе диеты с низким содержанием жира сои, с высоким содержанием жиров на масляной основе диеты сои (130,9 г Всего жиров / кг жиров) или с высоким содержанием жиров на масляной основе диеты льняное (130,9 г Всего жиров / кг диета), при условии течение 20 дней. Состав кислота полный питательных веществ и жирных из этих диет были описаны ранее 14. Нефтяные диеты сои богаты линолевой кислоты (18:02 н-6) и содержат некоторое количество α-линоленовой кислоты (18:03 н-3), когда диета масло льняное богат α-линоленовой кислоты. Эти высоким содержанием жиров диеты представляют различные рационы линолевой к α-линоленовой кислот (рационах 8:01 и 1:1, соответственно). Метод выделения отдельных классов липидов и анализа ГХ, мыLL создана и утверждена, и был опубликован ранее 10, но без подробное техническое описание найденного здесь.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Процедуры животных

  1. Все животные работа должна проводиться в соответствии с домашнего офиса животных (научные процедуры) Закон (1986).
  2. Mate крыс линии Вистар в возрасте 10 недель на моногамных разведения и подтвердить беременность появлением вагинального вилкой. Запишите это как 1-й день беременности, и начать экспериментальную диету. Для целинных женщин, дом каждой крысы индивидуально, и начать экспериментальную диету.
  3. После кормления экспериментальных диет в течение 20 дней усыпить крысы по CO 2 удушья с последующим смещением шейных позвонков.
  4. Используйте рассечение пинцет и ножницы, чтобы разоблачить брюшной полости и вырезать печень, сокращая связки, соединяющие печень к диафрагме, переднюю стенку живота, желудка и двенадцатиперстной кишки. Промойте печень в PBS и заморозить в жидком азоте перед хранением при -80 ° С

2. Подготовка общих липидов Экстракт 9

  1. Добавить moleculар сита (заполнить 1/10 емкости растворителя) для всех растворителей для создания «сухой» растворители. Выполняйте все работы растворителя в вытяжной шкаф.
  2. Отрежьте около 100 мг мороженой печени и весят. Поместите ткань в трубку в ведро со льдом и добавить 0,8 мл ледяной 0,9% NaCl. Однородный ткани.
  3. Добавить внутренние стандарты растворяют в 1 мл / мг сухого хлороформа и метанола (2:1, об / об), содержащей бутилированный гидрокситолуол (ВНТ, 50 мг / л) в качестве антиоксиданта. Для 100 мг печени крыс добавить 100 мкг стандарта CE (холестерилацетат heptadecanoate 17:00) Внимание:. Хлороформ и ВНТ опасны.
  4. Добавить 5,0 мл сухого хлороформ: метанол (2:1, объем / объем), содержащий ВНТ (50 мг / л).
  5. Добавить 1,0 мл 1 М NaCl, тщательно перемешать встряхиванием, пока смесь не выглядит однородным. Образцы могут быть ограничен и хранили при -20 ° С на этой стадии до недели.
  6. Центрифуге при 1000 х г в течение 10 мин, низкий тормоза при комнатной температуре.
  7. Сбор нижефазы с использованием стекла пипетки Пастера, трансфер в новой винтовой крышкой стеклянной трубкой и сухой атмосфере азота при 40 ° С Образцы могут быть ограничен и хранили при -20 ° С на этой стадии до недели.

3. Разделение липидов классов по твердофазной экстракции (SPE) 10

  1. Соедин ют баллон с SPE с вакуумным насосом и поместить аминопропил кремнезема SPE картридж на резервуаре.
  2. Поместите новый винт-крышка стеклянная трубка с надписью TAG и CE в баке стойки под колонки собрать первую фракцию.
  3. Растворите общее липидный экстракт в 1,0 мл сухого хлороформа и вихревых.
  4. Применить образец колонки, используя стекло пипетки Пастера и позволяют капать через в завинчивающейся крышкой трубки под действием силы тяжести. Когда никакие дальнейшие капает не упасть, удалите оставшуюся жидкость с помощью вакуума.
  5. Элюции TAG и CE фракции под вакуумом, колонку промывают 2 х 1,0 мл моет сухого хлороформа.
  6. Когда вся жидкость удаляется, высушить TAG и CE fractioн в атмосфере азота при 40 ° С Образцы могут быть ограничен и хранили при -20 ° С на этой стадии до недели.
  7. Поместите новый завинчивающейся крышкой стеклянной трубки с надписью ПК в лоток бака в столбце.
  8. Элюции фракции PC под вакуумом с добавлением 2 х 1,0 мл сухого хлороформ: метанол (60:40, об / об), пока вся жидкость не будет удален из колонки.
  9. Снимите и сухая фракция ПК в атмосфере азота при 40 ° С Образцы могут быть ограничен и хранили при -20 ° С на этой стадии до недели.
  10. Установите новую завинчивающейся крышкой стекло PE пробирку в лоток резервуара и элюируют фракцию PE с добавлением 1,0 мл сухого метанола в вакууме.
  11. Удалить и сухой ЧП фракция в атмосфере азота при 40 ° С Образцы могут быть ограничен и хранили при -20 ° С на этой стадии до недели.
  12. Поместите новый завинчивающейся крышкой стеклянную трубку помечены NEFA в лоток резервуара и элюируют фракцию NEFA под вакуумом при добавлении 2 х 1,0 мл промывками безводного хлороформа, метанола и ледяной уксусной кислоты. (100:2:2, об / об / об) Предостережение: ледяной уксусной кислоты опасными.
  13. Удалить собранную NEFA фракции и сухой атмосфере азота при 40 ° С Образцы могут быть ограничен и хранили при -20 ° С на этой стадии до недели.
  14. Установите новую аминопропил кремнезема SPE картридж на SPE бака и поместите стеклянную трубку с завинчивающейся крышкой в лоток бака под патрон для сбора отходов.
  15. Промыть колонку с 3 стирок сухого гексана в вакууме, а затем окончательного 1,0 мл стирки под действием силы тяжести. Не допускайте, чтобы картридж становиться сухой (поворот каналы столбцов картридж в закрытое положение, когда уровень гексан близка к матрице картриджа). Внимание: гексан является опасным.
  16. Заменить отходов трубку с новым винтовой колпачок стеклянной трубки с маркировкой CE.
  17. Растворите высушенного TAG и CE фракцию (полученного на стадии 3.6) в 1,0 мл сухого гексана и вихря. Примените это к колонке с использованием стекла пипетки Пастера и позволяют капать через под гravity.
  18. Когда никакие дальнейшие капает не упасть, удалите оставшуюся жидкость в вакууме.
  19. Под вакуумом, колонку промывают 2 х 1,0 мл моет сухого гексана элюироваться CE и сухой собранную фракцию в атмосфере азота при 40 ° С Образцы могут быть ограничен и хранили при -20 ° С на этой стадии до недели.
  20. Поместите новый винт-крышка стеклянная трубка с надписью TAG в лоток резервуара и Элюции TAG с добавлением 2 х 1,0 мл моет сухого гексана: метанол: этилацетат (100:5:5) в вакууме.
  21. Сухой Собранную фракцию в атмосфере азота при 40 ° С Образцы могут быть ограничены и хранили при -20 ° С на данном этапе для до недели. Внимание: этилацетат является опасным.

4. Подготовка FAME от Е 10

  1. Добавить 0,5 мл сухого толуола, отделенной CE фракции (собраны в шаге 3.19) и вихрь. Внимание: толуол является опасным.
  2. Подготовка метилирования реагента (сухой метанол с 2% (об/ Объем) H 2 SO 4), из которых 1,0 мл требуется на образец. Внесите объем сухого метанола в стекло или подходящий пластиковый контейнер с крышкой и добавьте необходимое количество H 2 SO 4 каплям затем смешать инверсией. Внимание: Серная кислота является опасным.
  3. Добавить 1,0 мл метилирующего реагента для образцов, растворенных в сухом толуоле, колпачок пробирки надежно, и осторожно перемешать.
  4. Нагрейте образцы в течение 2 часов при 50 ° С
  5. Через 2 часа снять трубки от жары. После прохладной добавить 1,0 мл нейтрализующие решение (0,25 М КНСО3 0.5MK 2 CO 3). Внимание: Калий бикарбонат и карбонат калия являются опасными.
  6. Добавить 1,0 мл сухого гексана и вихревые.
  7. Центрифуга при 250 х г в течение 2 мин, низкий тормоза при комнатной температуре.
  8. Соберите верхнюю фазу, которая содержит FAME, и передать в новую, не завинчивающейся крышкой одноразовые стеклянной трубки.
  9. Высушите собранную FAME подазота при 40 ° С Образцы могут быть ограничен и хранили при -20 ° С на этой стадии до недели.

5. Удаление свободного холестерина загрязнения от CE FAME 14

(Бесплатный Холестерин может загрязнить образец; см. рисунок 1 Например хроматографа следов с и без удаления свободного холестерина).

  1. Поставьте отходов трубку в SPE бака и поместите силикагелевого SPE картридж на танк.
  2. Столбец Промыть 3 х 1 мл моет сухого гексана в вакууме и 1 х 1 мл под действием силы тяжести.
  3. Удалить моет отходов и добавить новую трубку отходов в баке.
  4. Растворите CE FAME в 1 мл сухого гексана, вихря.
  5. Нанести на колонки, используя стекло пипетки Пастера и позволяют капать через под действием силы тяжести.
  6. Столбец Промыть 3 х 1 мл моет гексана в вакууме.
  7. Удалить моет отходов и поместите новый неофициальный завинчивающейся крышкой трубки в бак помечены CE FAME.
  8. ЭлюцииCE FAME с 2 х 1 мл сухого гексана: диэтиловый эфир (95:5 об / об) моет.
  9. Высушите в атмосфере азота при 40 ° С Образцы могут быть ограничены и хранили при -20 ° С на данном этапе для до недели. Внимание: диэтиловый эфир является опасным.

6. Передача FAME в GC автосэмплера флакон

  1. Добавить 75 мкл сухого гексана, чтобы пробовать, вихрь, и перенести в авто образца флаконе GC.
  2. Добавить еще 75 мкл сухого гексана, чтобы пробовать, вихревые и трансфер в той же GC авто образца флаконе. Образцы могут быть ограничен и хранили при -20 ° С на этой стадии до одного месяца.

7. Анализ с помощью газового хроматографа 14

  1. Анализ FAME на газовом хроматографе. Пример настройки: 30 м 0,25 мкм х 0,25 мм BPX-70 из плавленого кварца капиллярная колонка с протоколом температуры:
    Начальная температура 115 ° С, провести 2 мин, рампа 10 ° С / мин до 200 ° С, удерживая 18,5 мин, рампы 60 ° С / мин до 245 ° С, чстарый 4 мин.
    Колонка: Гелий газ, расход 1,0, давление 14,6 и скорость 29.
    Инжектор: температура = 300 ° С.
    Детектор: Водород поток 40.0, воздушный поток 184,0, составляют газа гелий, расход 45,0, температура = 300 ° С.
  2. Установить сплит соотношение в зависимости от обстоятельств (например, 25:1 для CE анализа FAME).
  3. Определить площадь под каждым пиком, используя соответствующее программное обеспечение и определить FAME по сравнению со стандартами. См. Рисунок 2 Например хроматограмм.
  4. Использование площадь под пиком данных для вычисления вклада индивидуальных жирных кислот в процентах от общего количества жирных кислот.
  5. Рассчитать абсолютные концентрации жирных кислот путем деления площади внутреннего стандарта на величину добавлен. Разделить площадь каждой жирной кислоты этим результатом, чтобы получить абсолютные концентрации каждого жирной кислоты в количестве ткани, используемой.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Успех этого метода зависит от следующих протокол точно и на использовании чистых растворителей и реагентов, чтобы уменьшить "шум" и загрязнения, которые могут появиться на хроматограмме. Загрязненные образцы являются более сложными для анализа, снижения точности площади под расчетах кривой. Если протокол успешно следовать хроматограмму с четкими симметричными, хорошо выраженных пиков и с минимальным фонового шума должны быть получены, как показано на рисунке 3. Если загрязнение произошло хроматограмму п...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Газовая хроматография является точным метод, используемый для анализа жирных кислот, и его высокая воспроизводимость считает эту технику, подходящую для клинических анализов. Соответствующие столбцы GC должен использоваться для того, чтобы идентифицировать жирных кислот, представляющих интерес, с доступные столбцы, имеющие отклонения в полярности стационарной фазы, длиной столбца и внутренним диаметром. Использование плавленого колонке кварцевую капиллярную в этом методе анализа обеспечивает хорошую термическую стабильн...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы заявляют каких конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы хотели бы выразить признательность за вклад Меритшелльская Роме-Надаль в исследовании на крысах.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
МетанолFisher ScientificM/4056/17'ОСТОРОЖНО' Пары - Хлороформ класса ВЭЖХ
Fisher ScientificC/4966/17'ОСТОРОЖНО' Пары - ВЭЖХ
класса BHTSigma- ОлдричW218405'ОСТОРОЖНО' Пары пыли - безводный
NaClсигма- ОлдричS9888Безводный
гексанFisher ScientificH/0406/17'ОСТОРОЖНО' Пары - ВЭЖХ класса
Ледяная уксусная кислотаСигма- Олдрич695084'ОСТОРОЖНО' Ожоги - 99.85%
Серная кислотаСигма- Олдрич339741'ОСТОРОЖНО' Ожоги - 99.999%
Карбонат калияСигма- Олдрич20961999% ACS Реагент класса
Бикарбонат калияСигма- Олдрич23720599,7% ACS Реасгент марки
этилацетатаFisher Scientific10204340ОСТОРОЖНО' Дымовые газы - 99+% GLC Специфичный
толуолFisher ScientificT/2300/15'ОСТОРОЖНО' Дымовые газы
диэтилового эфирасигма- Олдрич309966'ОСТОРОЖНО' Дымовые газы
Азот (бескислородный) баллонBOC44-w'ОСТОРОЖНО' Сжатый газ - риск взрыва
Картриджи с аминопропилкремнеземом SPE КартриджиAgilent12102014- Масса шариков 100 мг
Силикагель SPE КартриджиAgilent14102010- Масса шариков 100 мг
Молекулярные сывороткиSigma- Aldrich334324Pellets, AW-300, 1,6 мм
Стеклянные пипетки ПастераFisher ScientificFB50251

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Browning, L. M., et al. Incorporation of eicosapentaenoic and docosahexaenoic acids into lipid pools when given as supplements providing doses equivalent to typical intakes of oily fish. Am. J. Clin. Nutr. 96 (4), 748-758 (2012).
  2. Cao, J., Schwichtenberg, K. A., Hanson, N. Q., Tsai, M. Y. Incorporation and clearance of omega-3 fattyacids in erythrocyte membranes and plasma phospholipids. Clin. Chem. 52 (12), 2265-2272 (2006).
  3. Lauritzen, L., Carlson, S. E. Maternal fatty acid status during pregnancy andlactation and relation to newborn and infant status. Matern. Child Health. 7 (2), 41-58 (2011).
  4. Kelsall, C. J., et al. Vascular dysfunction induced in offspring by maternal dietary fat involves altered arterial polyunsaturated fatty acid biosynthesis. PLoS One. 7 (4), (2012).
  5. Karpe, F., Dickmann, J. R., Frayn, K. N. Fatty acids, obesity, and insulin resistance: time for a re-evaluation. Diabetes. 60 (10), 2441-2449 (2011).
  6. Mossoba, M. M., Moss, J., Kramer, J. K. Trans fat labelling and levels in U.S. foods: assessment of gas chromatographic and infrared spectroscopic techniques for regulatory compliance. J. AOAC Int. 92 (5), 1284-1300 (2009).
  7. Chee, K. M., et al. Fatty acid content of marine oil capsules. Lipids. 25 (9), 523-528 (1990).
  8. American oil chemists society. Gas chromatographic analysis of molecular species of lipids. , The Oily Press, Inc. Available from: http://lipidlibrary.aocs.org (2013).
  9. Folch, J., Lees, M., Sloane-Stanley, G. H. A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues. J. Biol. Chem. 226 (1), 497-509 (1957).
  10. Burdge, G. C., Wright, P., Jones, E. A., Wootton, S. A. A method for separation of phosphatidylcholine, triacylglycerol, non-esterified fatty acids and cholesterol esters from plasma by solid-phase extraction. Br. J. Nutr. 84 (5), 781-787 (2000).
  11. Seppänen-Laakso, T., Laakso, I., Hiltunen, R. Analysis of fatty acids by gas chromatography, and its relevance to research on health and nutrition. Anal. Chim. Acta. 465 (1), 39-62 (2002).
  12. Beesley, T. E., Buglio, B., Scott, R. P. W. Quantitative chromatographic analysis. , Marcel Dekker. New York, NY. Part. (2000).
  13. Bartle, K. D., Myers, P. History of gas chromatography. Trends Anal. Chem. 21 (9), 9-10 (2002).
  14. Childs, C. E. The effect of gender, pregnancy and diet upon rat tissue fatty acid composition and immune function. , University of Southampton, School of Medicine. Available from eprints.soton.ac.uk 378 (2008).
  15. Harris, S. W., Pottala, J. V., Ramachandran, S. V., Larson, M. G., Robins, S. J. Changes in erythrocyte membrane Trans and marine fatty acids between 1999 and 2006 in older Americans. J. Nutr. 142 (7), 1297-1303 (2012).
  16. Rohwedder, W. K. Mass spectrometry of lipids (USDA). Northern Regional Research Laboratory ARS. , Available from: ddr.nal.usda.gov/bitstream/10113/29457/1/CAIN769045540.pdf (2013).
  17. Roberts, L. D., McCombie, G., Titman, C. M., Griffin, J. L. A matter of fat: An introduction to lipidomic profiling method. J. Chromatogr. B. 871 (2), 174-181 (2008).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи