Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Хирургическое извлечение, Изоляция и

11.1K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/51597

⸱

30 апреля 2014 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Medical Microbiology, Immunology & Cell Biology, Southern Illinois University School of Medicine, 2Division of Orthopaedics and Rehabilitation, Department of Surgery, Southern Illinois University School of Medicine, 3Department of Electrical and Computer Engineering, Biomedical Engineering Program, Southern Illinois University Carbondale, 4University of Illinois at Springfield

В этой статье

Краткое содержание

Для будущих приложений, как патч для ремонта частичные слезы передней крестообразной связки (ACL), человеческий ACL, полученные клетки выделяли из ткани, полученной в ходе реконструктивных процедур, расширенных в пробирке и выращенных на ткани инженерии лесов. Клеточной адгезии и морфология Затем проводили для подтверждения биосовместимости на эшафот поверхности.

Аннотация

Повреждение ACL является часто встречающихся проблем в активных людей. Даже частичные слезы этом внутрисуставной связок колена приводят к биомеханических недостатков, которые препятствуют функции и стабильности. Текущие параметры для лечения в частных слез ACL варьироваться от консервативного, консервативного лечения на несколько хирургических вариантов, таких как: термической модификации, одно-расслоения ремонта, полной реконструкции, и реконструкции поврежденного участка родного связки. В нескольких исследованиях, если таковые имеются, продемонстрировали какого-либо одного способа управления, чтобы быть последовательно превосходит, и во многих случаях пациенты продолжают демонстрировать сохраняющейся нестабильности и другие сопутствующие заболевания.

Целью данного исследования является выявление потенциального источника клеток для использования в разработке ткани инженерии патча, которые могли бы быть реализованы в ремонте частично разорванной ACL. Протокол роман был разработан для расширения клеток, полученных из PatieНТС, проходящие реконструкцию ACL. Чтобы изолировать клетки, фарш hACL ткани, полученные в ходе реконструкции передней крестообразной связки расщепляли в растворе коллагеназы. Расширение проводили с использованием среде DMEM/F12, дополненной 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS) и 1% пенициллина / стрептомицина (P / S). Затем клетки хранили при -80 ° С или в жидком азоте в морозильной среды, состоящей из диметилсульфоксида, FBS и средой расширения. После оттаивания эти hACL, полученные Затем клетки высевали на ткани инженерии строительных лесов, PLAGA (поли молочной-со-гликолевой кислоты) и контрольной культуре ткани полистирола (ТКТ). После 7 дней, SEM была выполнена для сравнения клеточную адгезию к PLAGA по сравнению с контрольной ПСТК. Клеточной морфологии оценивали с помощью иммунофлуоресцентного окрашивания. SEM (сканирующий электронный микроскоп) микрофотографии показали, что клетки росли и придерживались с обеих PLAGA и ТКТ поверхностей и были сливающийся в течение всей поверхности на 7 день. Иммунофлуоресцентное окрашивание показала нормальный, без напряженного морфологическиеAl узоры на обеих поверхностях. Этот метод является перспективным для применения в регенерации ACL и реконструкции.

Введение

Передней крестообразной связки (ACL) является широко ранения внутрисуставной связки колена. Приблизительно 200 000 (ACL) травмы Ежегодно в Соединенных Штатах. Более 75% пациентов, испытывающих ACL травмы выбирают для ортопедической реконструктивной хирургии 1,2,3,4. Хирургическое вмешательство часто обозначается из-за своей сути плохое заживление потенциала 3. Реконструкция ACL обычно осуществляется с помощью аутотрансплантата или аллотрансплантата сухожилия. Аутотрансплантатом и аллотрансплантата представляют золотой стандарт для реконструкции, как они похвастаться высокие показатели успеха и первичный ремонт шовный, другой вариант лечения, показал интенсивности отказов до 94% 5,6,7.

Частичные слезы ACL составляют 10% до 28% всех ACL слез 8. В проспективном исследовании, подсчитано, что 50% пациентов с частными слез, которые занимают более половины ACL прогрессировала, чтобы завершить ACL недостаточность после не-Нойес и др..оперативное лечение 9. Другие исследования показывают, сохраняющейся нестабильности и снижения функции с менее чем 30% пациентов смогли вернуться к их до травмы Уровень активности 9,10,11,12,13. Варианты лечения ограничены и включают консервативные условия, тепловой усадки оставшейся ACL или реконструкции ACL. В последнее время наблюдается повышенный интерес к расширенной первичной ремонта. Эти методы используют биопрепараты для повышения первичные ремонт шовные 14. Недавние исследования попытались собрать мезенхимальных-как hACL получены стволовые клетки, чтобы обойти ограничения привитые, 31,32, но действительность и эффективность этих клеток до сих пор неизвестно. Идеальный источник клеток для тканевой инженерии, кажется, не-mesechymal hACL получены клетки фибробластов.

Современные исследования ориентирована на определение подходящего материала матрицы и источник клеток для инженерных эшафот. Это стандартная процедура для разорванной ACL должна быть уничтожена как суrgical отходов во время операции восстановления, однако, это поврежденный связки могут быть источником качества на приобретение клеток, необходимых для развития и укрепления идеальную ткань инженерии замену ACL. Наша лаборатория разработала протокол для расширения в пробирке этих собранных hACL полученных клеток. Использование инженерии 2D матрицу придают с hACL клеток, полученных из, мы разработали патч, который потенциально может увеличить частичный ремонт ACL и укрепления порванные связки.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. Хирургическое извлечение

Примечание: IRB утверждение было получено для сбора ACL пень во ACL реконструктивной хирургии. IRB освобождение было дано как ACL пень используется, как правило, отбрасываются как хирургическая отходов. 20 пациентов были использованы для сбора ACL пень.

  1. Администрирование общей анестезии и дооперационные антибиотики согласно протоколу учреждения для пациента.
  2. Применить жгут и надуть 100 мг выше систолического артериального давления.
  3. Расположите пациента в положении лежа на спине. Сделать горизонтальную переднелатеральный разрез с колена в 30-45 ° сгибания для 5 мм портала в и вставьте артроскопической троакар и камеру в suprapatellar сумке на 30 °.
  4. Выполните обычную диагностической артроскопии.
  5. Введите ступеньку выше и предотвращать мембранных синовиальной оболочки над разорванной ACL.
  6. Используйте 4,5 мм бритву и абляционный материал для идентификации ACL пень.
  7. Используйте утконоса прямо горький собрать несколько спеcimens от остальных ACL пень.
  8. Поддержание образца в нормальном физиологическом растворе в стерильном контейнере.
  9. Отправить образцы к патологии для декодирования и окончательной поставкой лабораторной установке.
  10. Восстановление пациента и выполнять послеоперационный уход согласно протоколу учреждения.

2. Ткани Пищеварение и hACL Изоляция

  1. Передача человека ACL ткань, полученную от патологии в чашку Петри стерильным физиологическим раствором / PBS (забуференный фосфатом физиологический раствор).
  2. Фарш ткани с использованием стерильных ножниц в 1-2 мм 3 шт и мыть фарш ткани физиологическим раствором по крайней мере 3 раза.
  3. Дайджест Измельченную ткань с 0,4% коллагеназы в DMEM/F-12 (50/50, 1x) среде, дополненной 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS) и 1% пенициллина / стрептомицина в течение 4-6 ч при 37 ° С.
  4. Центрифуга клетки при 1000 х г в течение 5 мин и затем ресуспендирования клеток в среде.
  5. Промывают клетки со средой 2-3 раза, а затем сEED / культура в Т-25 колб в течение 2-3 дней.

3. Сотовый Расширение, замораживания и оттаивания

  1. С помощью светового микроскопа для визуализации клетки культивировали в течение 2-3 дней в Т-25 колбу.
  2. Поддержание клеток при 37 ° С в DMEM/F-12 (50/50, 1x) среде, дополненной 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS) и 1% пенициллина / стрептомицина (P / S).
    Примечание: Изменение СМИ, когда клетки показывают приверженность и стандартное морфологию. С помощью светового микроскопа наблюдать клетки.
  3. Вымойте сливной клетки с PBS на 7 день (~ 1,3 х 10 6 клеток / колбы). Добавить трипсин (0,5 г / л) и инкубируют клетки при 37 ° С в течение 5 мин. Добавить медиа для взвешенных клеток нейтрализовать трипсин. Разделить смесь СМИ-клеток между тремя Т-25 колб.
  4. Промыть вырожденная клетки с PBS, добавляют трипсин (0,5 г / л), и ресуспендируют в их замораживания среде, содержащей ДМСО, FBS и полную среду (DMEM/F-12 Средний + 10% FBS и 1% P / S) в Соотношение 1:02:07.
  5. Магазинкриогенные флаконов -80 ° С, если клетки будут использоваться в течение месяца, и в жидком азоте, если клетки будут храниться в течение более длительные.
  6. Оттепель флаконы в C водяной бане 37 ° для повторного использования.
    Примечание: Обычно 90-95% клеток выжить.

4. Изготовление ткани Engineered 2-D Poly молочной-со-гликолевой кислоты (PLAGA) Леса

  1. Растворить 1 г PLAGA в 12 мл дихлорметана в 20 мл сцинтилляционный флакон и вихревых раствор в течение 8 часов при постоянной скорости (800 оборотов в минуту).
    Примечание: Детальное описание в Гупта и др. 15.
  2. Передача растворенного раствора в стеклянную чашку Петри, выровненной с Фторированные защиты бумаги.
  3. Поместите чашку Петри под вакуумным колпаком в течение 30 мин. Оставьте чашку Петри при температуре -20 ° С в течение ночи и затем при комнатной температуре. Поместите чашки Петри в лиофилизатор, чтобы обеспечить полное испарение растворителя для получения тонких пленок полимера.
  4. Поместите полимерной FiLMS в эксикаторе в течение 24 часов.
  5. Разрежьте полимерных пленок на 12 мм в диаметре круглых дисков и сохранять их в эксикаторе до необходимости.

5. Сканирующей электронной микроскопии (SEM)

  1. Вымойте клетки (50000 клеток / диск) высевают на контрольной ПСТК и PLAGA эшафот с PBS 7 дней, следующего посева.
  2. С помощью 1,5% глутарового альдегида в 0,1 М какодилатном буфере для фиксации клеток и 2,5% OsO 4 в 0,1 М какодилатном буфере для последующей фиксации.
  3. Промыть фиксированные клетки с 0,1 М какодилатном буфере. Сушат фиксированных клеток с использованием последовательного этанола обезвоживание (50%, 70%, 80%, 90% и 100%) в течение 15 мин каждого, а в дальнейшем сухой в гексаметилдисилазана (HMDS) в течение ночи.
  4. Vent Палаты SEM системы распыления покрытия с помощью кнопки клапана и поднять верхнюю пластину.
  5. Поместите высушенные образцы в камере. Опустите верхнюю пластину.
  6. Переключите ручку управления, чтобы накачать, чтобы начать вакуумирования камеры.
  7. Открыть аргон утечка клапана. Подождидля вакуум, снизится до 0,05 мбар.
  8. Coat высушенные образцы с тонким слоем (0,13 нм) золота / палладий.
  9. Возврат на герметичность клапана аргона в его закрытое положение.
  10. Переключите регулятор выключен.
  11. Удалить воздух из камеры с помощью кнопки клапана и поднять верхнюю пластину.
  12. Удалить образцы и сохранить их в эксикаторе в течение 24 часов.
  13. Обратите внимание на образцы под сканирующим электронным микроскопом.

6. Иммунофлуоресценции Окрашивание

  1. Вымойте клетки (50000 клеток / диск) высевают на контрольной ПСТК и PLAGA эшафот с PBS 7 дней, следующего посева.
  2. Фиксации клеток с использованием 70%-ного этанола (холод) в течение 10 мин.
  3. Инкубировать фиксированные клетки при комнатной температуре с 1% бычьего сывороточного альбумина (BSA) в PBS, имеющие 0,05% Triton X-100 в течение 20 мин.
  4. Погрузить образцы в 1% Tween при комнатной температуре в течение 20 мин.
  5. Добавить моноклональное мыши Anti-β-актин антитела (1:400) и инкубировать клетки overnighт при 4 ° С.
  6. Промывают клетки с 0,05% Tween. Добавить вторичное антитело (козий анти-мышь F (аb ') 2-фрагмент из IgG, конъюгированного с флуоресцентным зондом, 1:400) к клеткам и инкубируют в течение 1 часа при комнатной температуре.
  7. Вымойте клетки с PBS. Пятно клетки с ядерной пятно и смонтировать с помощью 80% Глицерин.
  8. Соблюдайте клетки под конфокальной микроскопии.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Действующая модель для хирургического извлечения, ткани пищеварения и выделения человеческого передней крестообразной связки (hACL) клетки, полученные из показано на рисунке 1. Клетки, перенесенных из эксплантов и прилипшие к Т-25 колб. Эти клетки культивировали в течение 3 дней и затем визуализировали под световым микроскопом (рис. 2). Сливающийся монослой получен 7-й день. Присутствие здоровых, жизнеспособных клеток указал на успешное извлечение и культуру hACL полученных клеток.

...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Основная цель данного исследования лесов hACL/2D было использовать полученные клетки в патче, чтобы увеличить первичный ремонт частных слез ACL. Консервативное управление частичных слез ACL может включать в себя короткий период иммобилизации, общеукрепляющее, прогрессивной программы реабилитации и регулярных оценок Последующие меры 13,16,17. Тем не менее, многие исследования показывают, что консервативное лечение у спортсменов было связано с плохими результатами и неудачи. Бакли и др.. Оценивали 25 п...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что они не имеют конкурирующие финансовые интересы.

Благодарности

Авторы хотели бы выразить признательность пуска фонд и отдел хирургии исследовательского гранта от Университета Южного Иллинойса, школы медицины; и гранта Мемориальный медицинский фонд.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Чашка ПетриFisher Scientific08-757-103C
Фосфат буферизованный физиологический раствор (PBS)Fisher ScientificBP3994
КоллагеназаGibco17018-029Хранить в 4 ° C
DMEM/F-12Cellgro10-092-CVХранить в 4 °C. Тепло в 37 ° C водяной баней перед использованием.
Фетальная бычья сыворотка (FBS)Gibco10082Магазин в -80 ° C
Пенициллин/СтрептомицинЛонза17-602ЕХранить в 4 ° C
Центрифужные пробирки - 15 млCorning430790
T-25 колбыBD Falcon3013
Трипсин-Версен смесьLonza17-161EХранить при 4 °C. Согреть в 37 ° C водяной баней перед использованием.
ДМСОFisher ScientificBP231-100Горючая жидкость. Может вызывать раздражение кожи, глаз и дыхательных путей.
Криогенные флаконыCorning430489
PLAGAPurac BiomaterialsPurasorb PLG8523хранить при -80 ° C
TCPS дискиFisher Scientific12-545-82
ДихлорметанFisher ScientificAC36423-0010Возможная опасность рака. Хранить в сухом, прохладном месте.
Bytac paperSaint gobin performance plastics1420652
Scintillation флаконFisher Scientific03-339-21G
Бычья сыворотка альбумин (BSA)Sigma AldrichA7906Магазин в 4 ° C
TweenFisher ScientificBP337-500
мышиное анти-&бета;-актиновое антитело (1° Ab)Sigma AldrichA5441Магазин при -20 ° C
козье антитело к мышам (2° Ab)Cell Signaling4408сохраняет при -20 ° C
краситель HoechstSigma Aldrich14530Магазин при -20 ° C
ГлицеринFisher ScientificBP229-1
глутаральдегидFisher ScientificBP2547-1Токсичен при вдыхании и проглатывании. Вызывает ожоги всеми путями воздействия.
ГексаметилдисилазанFisher ScientificAC43085-1000Легковоспламеняющаяся жидкость и пар. Вызывает ожоги всеми путями воздействия.
Стерильные ножницыMcKesson25-716
ЦентрифугаEppendorf5804R
Световой микроскопOlympusCK40
Водяная баняThermo scientific2845
VortexLabnetVX-200
Стеклянные пластины Петриfisher ScientificS31473
Аку-ПанчАкудерм Инк.P1225Acu-Punch использовался для резки 12 мм дисков
Cacodylate bufferSigma Aldrich97068Легковоспламеняющаяся жидкость, канцероген и раздражитель.
Тетраоксид осмияSigma Aldrich201030Высокотоксичный
Triton X-100Sigma AldrichT8787Вреден при проглатывании
этанолаDecon Labs2705Хранить вдали от источников тепла, искр, пламени и других форм возгорания.
Общая/регионарная анестезияAmphastar Pharmaceuticals1% Лидокаин, 0,25% Бупивакаин,Анестетики для индукции и поддержания
АнтибиотикиHospira0409-0805-01Ancef 1 г в/в
Артроскопия троакарСмита и племянника
Артроскопия КамераСмита и племянника
Артроскопический захват и горькаяArthrex
4,5 ммArthrex
ВинтыArthrexиз нержавеющей стали
Sputter CoaterPolaronE5400
бритва Интерференционные винты

Ссылки

  1. Johnson, R. J. The anterior cruciate ligament: A dilemma in sports medicine. Int J Sports Med. 3, 71-79 (1982).
  2. Owings, M. F., Kozak, L. F. Ambulatory and inpatient procedures in the United States, 1996. Vital Health Stats. 13, 1-119 (1998).
  3. Frank, C. B., Jackson, D. W. The science of reconstruction of the anterior cruciate ligament. J Bone Joint Surg Am. 79, 1556-1576 (1997).
  4. Miyasaka, K. C., Daniel, D. M., Stone, M. L., Hirshman, P. The incidence of knee ligament injuries in the general population. Am J Knee Surg. 4, 3-8 (1991).
  5. Taylor, D. C., Posner, M., Curl, W. W., Feagin, J. A. Isolated tears of the anterior cruciate ligament: over 30 year follow-up of patients treated with arthrotomy and primary repair. Am J Sports Med. 37 (1), 65-71 (2009).
  6. Liljedahl, S. O., Lindvall, N., Wetterfors, J. Early diagnosis and treatment of acute ruptures of the anterior cruciate ligament: a clinical and arthrographic study of forty-eight cases. J Bone Joint Surg Am. 47, 1503-1513 (1965).
  7. Oensten, M., Lysholdm, J., Gillquist, J. Suture of fresh ruptures of the anterior cruciate ligament: A 5 year follow up. Acta Orthop Scan. 55, 270 (1984).
  8. Buckley, S. L., Barrack, R. L., Alexander, A. H. The natural history of conservatively treated partial anterior cruciate ligament tears. Am J Sports Med. 17 (2), 221-225 (1989).
  9. Noyes, F. R., Mooar, L. A., Moorman, C. T. 3rd, McGinnis, H. G. Partial tears of the anterior cruciate ligament. Progression to complete ligament deficiency. J Bone Joint Surg Br. 71 (5), 825-833 (1989).
  10. Bak, K., Scavenius, M., Hansen, S., Norring, K., Jensen, K. H., Jorgensen, U. Isolated partial rupture of the anterior cruciate ligament. Long term followup of 56 cases. Knee Surg Sports Traumatol Arthrosc. 5 (2), 66-71 (1997).
  11. Fritschy, D., Panoussopoulos, A., Wallensten, R., Peter, R. Can we predict the outcome of a partial rupture of the anterior cruciate ligament? A prospective study of 43 cases. Knee Surg Sports Traumatol Arthrosc. 5 (1), 2-5 (1997).
  12. Sommerlath, K., Odensten, M., Lysholm, J. The late course of acute partial anterior cruciate ligament tears. A nine to 15 year follow-up evaluation. Clin Orthop. , 281-2152 (1992).
  13. Barrack, R. L., Buckley, S. L., Bruckner, J. D., Kneisl, J. S., Alexander, A. H. Partial versus complete acute anterior cruciate ligament tears: the results of nonoperative treatment. J Bone Joint Surg Br. 72 (4), 622-624 (1990).
  14. Murray, M. M. Current status and potential of primary ACL repair. Clin Sports Med. 28 (1), 51-61 (2009).
  15. Gupta, A., et al. Single walled carbon nanotube composites for bone tissue engineering. J Orthop Res. 9, 1374-1381 (2013).
  16. Fruensgaard, S., Johannsen, H. V. Incomplete ruptures of the anterior cruciate ligament. J Bone Joint Surg Br. 71, 526-530 (1989).
  17. Sandberg, R., Balkfors, B., Nilsson, B., Westlin, N. Operative versus non-operative treatment of recent injuries to the ligaments of the knee. A prospective randomized study. J Bone Joint Surg Am. 69, 1120-1126 (1987).
  18. Lamar, D. S., Bartolozzi, A. R., Freedman, K. B., Nagda, S. H., Fawcett, C. Thermal modification of partial tears of the anterior cruciate ligament. Arthroscopy. 21 (7), 809-814 (2005).
  19. Indelli, P. F., Dillingham, M. F., Fanton, G. S., Schurman, D. J. Monopolar thermal treatment of symptomatic anterior cruciate ligament instability. Clin Orthop. 407, 138-147 (2003).
  20. Smith, D. B., Carter, T. R., Johnson, D. H. High failure rate for electrothermal shrinkage of the lax anterior cruciate ligament: a multicenter follow-up past 2 years. Arthroscopy. 24 (6), 637-641 (2008).
  21. Buda, R., Ferruzzi, A., Vannini, F., Zambelli, L., Di Caprio, F. Augmentation technique with semitendinosus and gracilis tendons in chronic partial lesions of the ACL: clinical and arthrometric analysis. Knee Surg Sports Traumatol Arthrosc. 14 (11), 1101-1107 (2006).
  22. Sekiya, J. K., Golladay, G. J., Wojtys, E. M. Autodigestion of a hamstring anterior cruciate ligament autograft following thermal shrinkage: a case report and sentinel of concern. J Bone Joint Surg Am. 82 (10), 1454-1457 (2000).
  23. Farquharson-Roberts, M. A., Osborne, A. H. Partial rupture of the anterior cruciate ligament of the knee. J Bone Joint Surg Br. 65, 32-34 (1983).
  24. Rue, J. P., Ghodadra, N., Bach, B. R. Jr Femoral tunnel placement in single-bundle anterior cruciate ligament reconstruction: a cadaveric study relating transtibial lateralized femoral tunnel position to the anteromedial and posterolateral bundle femoral origins of the anterior cruciate ligament. Am J Sports Med. 36, 73-79 (2008).
  25. Carey, J. L., Dunn, W. R., Dahm, D. L., Zege, S. L., Spindler, K. P. A systematic review of anterior cruciate ligament reconstruction with autograft compared with allograft. J Bone Joint Surg. 91, 2242-2450 (2009).
  26. Murray, M. M., Martin, S. D., Martin, T. L., Spector, M. Histological changes in the human anterior cruciate ligament after rupture. J Bone Joint Surg Am. 82, 1387-1397 (2000).
  27. Andrish, J., Holmes, R. Effects of synovial fluid on fibroblasts in tissue culture. Clin Orthop Relat Res. (138), 279-283 (1979).
  28. Murray, M. M., Spindler, K. P., Ballard, P., et al. Enhanced histologic repair in a central wound in the anterior cruciate ligamentwith a collagen-platelet-rich plasma scaffold. J Orthop Res. 25, 1007-1017 (2007).
  29. Carter, T. R. Anterior cruciate ligament thermal shrinkage. Clin Sports Med. 21, 693-700 (2002).
  30. Perry, J. J., Higgins, L. D. Anterior and posterior cruciate ligament rupture after thermal treatment. Arthroscopy. 16, 732-736 (2000).
  31. Cheng, M. T., Yang, H. W., Chen, T. H., Lee, O. K. Isolation and characterization of multipotent stem cells from human cruciate ligaments. Cell Prolif. 42 (4), 448-460 (2009).
  32. Matsumoto, T., et al. Isolation and characterization of human anterior cruciate ligament-derived vascular stem cells. Stem Cells Dev. 21 (6), 859-872 (2012).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Клеткиполученные из ПКСизоляция клетокколлагеназное перевариваниеэкспансия клетоккаркас из PLAGAсканирующая электронная микроскопияиммунофлуоресцентное окрашиваниеполистирол для культивирования тканей
Хирургическое извлечение, Изоляция и
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.