В этом исследовании, роман платформа для расследования внутринейрональную молекулярные подписи ответа на лечение биполярного расстройства (BD) была разработана и утверждена. Обонятельный эпителий от пациентов BD был получен с помощью назальных биоптатов. Тогда лазерного захвата микродиссекции сочетается с реальным временем ПЦР для исследования молекулярной подписи ответ лития в БД.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Обонятельных нейронов, полученных с помощью носовой биопсии в сочетании с лазерной съемки микродиссекции: возможный подход к исследуемым препаратом ответ психических расстройств
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Биполярное расстройство (BD) является серьезным психоневрологических расстройств, с плохо понимал патофизиологии и обычно обрабатывают с стабилизатором настроения, карбонат лития. Исследования на животных, а также генетические исследования человека показывают, что литий влияет молекулярные мишени, которые участвуют в нейронной роста, выживания и созревания, и, в частности молекул, участвующих в Wnt сигнализации. Учитывая этической проблемой для получения биопсии мозга для исследования динамических молекулярных изменений, связанных с литий-ответ в центральной нервной системе (ЦНС), можно рассмотреть возможность использования нейронов, полученных из обонятельных тканях для достижения этой цели goal.The обонятельный эпителий содержит обонятельные нейроны рецептора на разных стадиях развития и глиальных как опорных клеток. Это дает уникальную возможность для изучения динамических изменений в ЦНС у больных с нервно-заболеваний, используя обонятельный ткани безопасно, полученную из носовых биопсии. Чтобы преодолеть недостаток, исходящей от SUBSTantial загрязнение биопсию ткани обонятельной с не-нейрональных клеток, новый подход, чтобы получить обогащенные популяции нейрональных клеток был разработан путем объединения носовые биопсии с лазерным захвата микродиссекции. В этом исследовании, система расследования связанный с лечением, динамические молекулярные изменения в нервной ткани была разработана и утверждена, с помощью небольшой опытный образец пациентов BD, набранных для исследования молекулярных механизмов ответа на лечение литием.
Введение
Биполярное расстройство (BD) является серьезным психоневрологических расстройств, характеризующихся патологическим изменениям в настроении, драйв и познание 1. Литий используется для лечения BD было показано, чтобы изменить состояние стабильный уровень мРНК большого числа генов в исследованиях на животных 2, но остается неизвестным, если любой из этих молекул связана с клинической реакции в организме человека 2. Понимание механизма ответа лития потребует расследования литий-индуцированной молекулярные изменения в нервных тканях. К сожалению, это не практично, чтобы получить мозга биопсии пациентов BD пред- и пост-литиевой терапии для ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
ПРИМЕЧАНИЕ: Все исследовательские добровольцев в этом исследовании, были введены обоснованные документы согласия, утвержденные ведомственного комитета Говарда университет и Университета Джонса Хопкинса. Только те участники, кто согласился на подписание документов обоснованного согласия были включены в исследование. База исследования для этого анализа состояла из: 20 предметам (12 BD и 10 управления, 30% мужчин) и средний возраст (стандартное отклонение) 38,2 (14,1) лет.
ПРИМЕЧАНИЕ: Спрей все поверхности с РНКазы Зап удалить РНКазы загрязнения из стеклянных и пластиковых поверхностей.
1. Биопсия Процедура
- Спрей для местно....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Стратегия протокол и устранение неполадок в изучении молекулярных подписей были успешно оптимизированы. Качество РНК и нейронные критерии обогащения проб, которые будут использоваться в дальнейшем вниз по течению Real-временной анализ ПЦР были стандартизированы. Рин и концентрация РНК рассматривается как сопутствующих факторов, чтобы обнаруженные уровни экспрессии. На основе анализа нескольких образцов с RINS в пределах от 1 - 10, было определено, что минимальное RIN из ~ 3,0 и выше, достаточно для нисходящего анализа в.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Новая платформа для получения обогащенного обонятельные нервные слоев путем объединения носа биопсии и НОК представлена и была утверждена в данном исследовании. Этот метод может иметь широкие последствия. Он может быть применен к биомаркеров исследований, в том числе ответ на лечение, и усилия обнаружения наркотиков для других психоневрологических расстройств, что делает более широкое воздействие в этой области.
Для получения высокого качества нейроны поддающиеся последующих применений, не.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не сообщают никаких финансовых отношений с коммерческими интересами.
Благодарности
Эта работа была поддержана грантами USPHS MH-091460 (E.N.), MH-084018 (A.S.), MH-094268 Silvo O. Conte center (A.S.), MH-069853 (A.S.), MH-085226 (A.S.), MH-088753 (A.S.), MH-092443 (A.S.) и MH-096208 (K.I.), грантами от DANA (E.N.), Stanley (A.S.), RUSK (A.S.), S-R foundations (A.S.), NARSAD (A.S. и K.I.), и Мэрилендский фонд исследований стволовых клеток (A.S. и K.I.).
Мы искренне ценим усилия и вклад Перл Ким, Марии Папапавлу, Нао Гамо, Юджин Чунг, Юкико Лема и Марка Кристи в координацию процесса биопсии.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Tissue Preparation | |||
| Tissue-Tek Cryomold Molds | Sakura Finetek | 4557 | |
| Tissue-Tek O.C.T. Compound | Sakura Finetek | 4583 | |
| Cryosectioning | |||
| Membrane Slide 1.0 PEN (D) | Carl Zeiss Microscopy | 415190-9041-000 | |
| Rnase Zap | Ambion | AM9780 | |
| DEPC Обработанная вода | Качество Биологическая | 351-068-131 | |
| Microdissection | |||
| Микроскоп: Микролазерная система серии PALM | Carl Zeiss | Модель: Axiovert 200M Программное обеспечение: Robo v3.2 | |
| No. 5 Dumont Microdissction Щипцы | Roboz | RS-49085 | |
| RNA Extraction | |||
| RNAqueous Micro Kit | Ambion | AM1931 | |
| cDNA Synthesis | |||
| SuperScript III First Strand Synthesis Kit | Invitrogen | 18080-051 | |
| OMP qPCR | |||
| SYBR GreenER qPCR SuperMix | Invitrogen | 11760-500 | |
| Taqman qPCR | |||
| TaqMan Expression Probes | Applied Biosystems | Различные | |
| TaqMan Gene Expression Master Mix | Applied Biosystems | 4369016 | |
Ссылки
- Goodwin, F. K., Jamison, K. R. Manic-depressive illness. , Oxford University Press. (1990).
- Einat, H., Manji, H. K. Cellular plasticity cascades: genes-to-behavior pathways in animal models of bipolar disorder. Biol Psychiatry. 59 (12), 1160-1171 (2006).
- Severino, G., et al.....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
