Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

В режиме реального времени изображений миелоидных клеток Dynamics в Арс Мин / + Кишечная Опухоли на вращающемся диске конфокальной микроскопии

9.1K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/51916

⸱

6 октября 2014 г.

 ,  , 
1Department of Oncology, INSERM U661, Functional Genomic Institute, 2Department of Anatomy, University of California

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Используя трансгенных репортерных мышей и инъекционные флуоресцентные метки, долгосрочная прижизненная конфокальная микроскопия с вращающимся диском позволяет напрямую визуализировать поведение миелоидных клеток в кишечной аденоме в модели колоректального рака ApcMin/+.

Аннотация

Миелоидных клеток являются наиболее распространенными иммунные клетки в опухоли и, как было показано, чтобы способствовать прогрессии опухоли. Современные методы визуализации прижизненные включить наблюдение за живой клеточной поведения внутри органа, но может быть сложным в некоторых видов рака за счет органов и опухоли доступности таких как кишечник. Прямое наблюдение кишечных опухолей ранее не сообщалось. Хирургическая процедура, описанная здесь позволяет прямое наблюдение динамики миелоидных клеток внутри кишечника опухоли в живых мышей с помощью трансгенных люминесцентные репортер мышей и инъекционные индикаторов или антитела. Для этого, четыре цвета, мульти-область, микро-линзами вращающийся диск конфокальной микроскопии, который позволяет долгосрочное непрерывное изображений с быстрым получения изображений был использован. APC мин / + мышей, которые развиваются несколько аденомы в тонком кишечнике пересекаются с C-FMS-EGFP мышей визуализировать миелоидных клеток и на мышах ACTB-ECFPвизуализировать кишечные эпителиальные клетки крипт. Процедуры маркировки различных компонентов опухоли, такие как кровеносные сосуды и нейтрофилов, и порядок расположения опухоли для получения изображений с помощью поверхности серозной оболочки, также описаны. Покадровой фильмы, собранные от нескольких часов визуализации позволяют анализировать миелоидной поведения клеток на месте в желудочно-кишечном микросреды.

Введение

Подавляющее доказательства теперь показывает, что микроокружение опухоли, состоящей из гетерогенных клеточных популяций, в том числе фибробласты, эндотелиальные клетки, иммунных и воспалительных клеток, внеклеточный матрикс, и растворимых факторов, играет важную роль в инициации и прогрессировании солидных опухолей, способствуя почти все отличительными чертами рака 1. Действительно, во время прогрессирования опухоли, есть постоянные динамические взаимодействия между трансформированных раковых клеток и стромальных клеток, которые развиваются генерировать микросреду благоприятной для злокачественного 2. Среди иммунных клеток, которые проникают микросреды опухоли, миелоидных клеток являются наиболее распространенными 3. Состоит из ассоциированных с опухолью макрофагов (ТАМ), полученный из миелоидных клеток-супрессоров (MDSCs), дендритные клетки (DC) и нейтрофилов (ПМЯ), миелоидные клетки набраны из костного мозга и постепенно проникнуть опухоли, выпуская цитокинов, факторов роста и протеаз, которые может способствоватьрост опухоли и распространение 4. Перекрестные помехи между раковыми клетками и миелоидных клеток является сложной, но динамично. Таким образом, понимание природы их взаимодействия имеет решающее значение для определения, почему эти клетки способствуют прогрессии рака вместо участия в противоопухолевой иммунной реакции, и может помочь найти новые цели для контроля его.

Прямое наблюдение по прижизненной микроскопии предоставляет информацию о динамике клеточных в тканях живого мышей 5. Четыре цвета, мульти-область, микро-линзами вращающийся диск конфокальной система была разработана для изучения стромальных клеток в опухоли молочной железы 6. Такой подход позволяет долгосрочное непрерывное изображений и включает в себя ряд преимуществ, таких как (а) приобретение быстрые изображения, чтобы минимизировать артефакты движения, (б) долгосрочного анестезии, (с) четыре приобретение цвет следовать различные типы клеток, (г) люминесцентная маркировки из различных опухолевых компонентов, и (е) наблюдение различных опухолевых микросреды остроумияхин тот же мышь, чтобы избежать мышь к изменчивости мыши 7-9. С помощью этой технологии, различные типы поведения клеток были зарегистрированы в вируса опухоли молочной железы (MMTV) промоутер управляемой полиома среднего T онкоген (PyMT) модели, которая отображает прогрессивные этапы туморогенеза. Регуляторные Т-лимфоциты (Tregs, визуализированы трансгеном Foxp3 EGFP) мигрируют преимущественно в непосредственной близости от кровеносных сосудов, тогда как ДК (CD11c-DTR-EGFP), карциномы связано фибробластов (Fsp1 + / + -EGFP) и миелоидных клеток (C-FMS -EGFP) проявляют высокую подвижность на периферии опухоли, чем в опухолевой массы. В условиях острой системной гипоксии, клетки мигрировали по-разному: Tregs остановки миграции в отличие от миелоидных клеток, которые продолжают двигаться 6. Кроме того, в той же модели на мышах, было показано, что изменения чувствительности доксорубицин с стадии опухоли, распространение наркотиков связано с ответом наркотиков, и доксорубицинаобработка приводит к CCR2-зависимой найма миелоидных клеток к опухолям. Таким образом, живая изображений также может быть использован получить представление ответов наркотиков в месте и биологию химиорезистентности 10,11.

САП палочка (APC) генные мутации обычно возникают в аденом человека колоректального и рака 12 и мутации одной копии результатов генных APC в САП (ФАП), который придает чрезвычайно высокий риск развития рака толстой кишки 13. Штамм мыши Арс Мин / + несет усечения мутацию в кодоне 850 гена APC И спонтанно развивается несколько кишечные аденомы всему тонкой кишки 14 по 16. Долгосрочный прижизненной визуализации кишечника является сложной задачей, так как в инвазивности процедуры, с момента открытия в брюшную полость необходимо для доступа к кишечнике. Краткосрочная жить изображений улudies опубликованы ранее на здорового кишечника 17,18, но долгосрочное прямое наблюдение кишечных опухолей не сообщалось. Хирургическая процедура была разработана и уточнена визуализировать опухоли через серозной поверхности кишечника, с помощью прижизненной спиннинг системы диска микроскопии ранее использовался для изображения опухолей молочной железы 6,10. В этой статье, протокол описывается, что позволяет проследить поведение миелоидных клеток в опухоли в тонкой кишке с помощью APC мин / + мышей.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

ПРИМЕЧАНИЕ: Все эксперименты на животных были проведены в соответствии с процедурами, утвержденными уходу и использованию комитета Институциональная животных (IACUC), UCSF на. Все эксперименты изображений были процедуры не-выживания, и животные были подвергнуты эвтаназии сразу после окончания получения изображений.

1 поколение мышей

ПРИМЕЧАНИЕ: Арс Min / + мышей, несущих мутацию в гене APC, спонтанно развиваться 50-100 аденомы в тонком кишечнике.

  1. Крест Арс Мин / + мышей с ACTB-ECFP линии, которая выражает ECFP под промотор актина, и далее с линии С-FMS-EGFP, выражающей EGFP под промотор с-FMS обнаружить миелоидных клеток. Гетерозиготные животных для ACTB-ECFP и С-FMS-EGFP используются для обнаружения флуоресценции.
  2. Используйте мышей на 3-4 месячного возраста, чтобы изображения четко определяемых аденом.

2 Получение Мaterials до операции

ПРИМЕЧАНИЕ: Детали микроскопа настройке были описаны ранее 6,7.

  1. Микроскоп
    1. Включите отопления одеяло. Включите аргонового лазера для 488 нм возбуждения и твердотельный 405 нм, 561 нм и 640 нм лазеров. Включите микроскопом, блок управления вращающимся диском, AOTF, блок управления лазером, и контроллер камеры.
    2. Откройте микроскопа затвор, который превращает красный светодиод. Включите компьютер и программное обеспечение камеры.
  2. Изображений Платформа
    1. Убедитесь, что этап вставка чист. В противном случае, чисто с мылом и водой и затем сушат.
    2. Возьмите две покровные и использовать лабораторную ленту, чтобы защитить их от вставки. Поместите вставку на сцене и очистить его спиртовыми салфетками.
    3. Использование лаборатории ленту, прикрепите отопления одеяло на правой стороне сцены.
    4. Проверьте целостность резиновой диафрагмы на носовом обтекателе и изменить его, если necessarу. Положение и зафиксировать носовой обтекатель для изофлурана обезболивания родов к животному с помощью марли и лаборатории ленту.
  3. Isoflurane Анестезия система
    1. Заполните ИФ бак.
    2. Включение в вакууме и отрегулировать до 1,2 л / мин.
    3. Добавить дистиллированную воду в распылитель и подключить распылитель к изофлурана системы.
    4. Включите анализатор кислорода и подключить его к системе изофлурана. Включите кислородного бака и убедитесь, что анализатор кислорода показывает 100%. Отрегулируйте поток O 2 до 0,2 л / мин.
    5. Включите резервуара азота и регулировать поток в 0,8 л / мин. Убедитесь, что анализатор кислорода показывает 21%.
  4. Подготовка хирургии инструменты и платформы
    1. Чистые 2 пары рассечение щипцы и ножницы с мылом и водой.
    2. Включите горячую борта стерилизатора и пусть он достигнет 250 ° C. Стерилизовать хирургии инструменты в течение 30 сек. Пусть они остыть.
    3. Поставьте лаборатории Soaker на хирургии скамейке.
    4. Используйте пенопласта крышку в качестве хирургического платформы. Накрыть куском лаборатории проливной дождь. Подготовьте второй кусок лаборатории проливной дождь, чтобы изменить после бритья мыши.
    5. Поместите носовой обтекатель с линией анестезии на крытой пенополистирола крышкой, и приложите его к крышке пенополистирола (не на лабораторном проливной дождь) с некоторой ленты и использовать две иглы с обеих сторон носовой конус, чтобы держать его на месте.
    6. Соберите бетадин, спиртовые салфетки, стерильные марлевые, супер клей, предметные стекла, электробритвы, и 4 единиц лабораторного ленты.

3 Получение инъекций

  1. Под капотом, подготовить инсулиновый шприц (28 G х ½ в) с 7 мкл складе AF647-сопряженного LY-6G (Gr1) антитела (1 мг / мл) в 100 мкл 2000 кДа родамина-декстран (4 мг / мл ) для ретроорбитального инъекции. Ретро-орбиту рекомендуется в мин / + мышей APC с анемией, которая развивается у этих животных делает difficu хвостовой веныл обнаружить через кожу.
  2. Подготовьте второй шприц инсулина с 1 мг / кг атропина разбавленного в 150 мкл PBS для подкожного (SC) инъекции до визуализации, чтобы ослабить перистальтических движений кишечника.

4 Подготовка кишечника для визуализации

  1. Убедитесь, что анестезия линия к индукции камеры открыт, и линии на операционном столе и микроскопом закрыты.
  2. Перевести животное к анестезии камеры. Закройте анестезии камеру и включите изофлураном до 4% (с 21% O 2).
  3. Когда мышь дышит глубоко и медленно (через 5-6 мин), перенести его на хирургического этапа на своем фланге и привнести решение Gr1 антител и / или декстран решение ретро-орбитально.
  4. Откройте анестезии линию, связанную с хирургической платформы. Закройте строку в анестезии камеры и положить мышь на спине с его носом в анестезии конуса.
  5. Уменьшите изофлуранаконцентрации от 4% до 2,5%.
  6. Убедитесь, что мышь хорошо наркозом, зажимая его в подушечку лапы и тестирование роговицы рефлекс.
  7. Добавить глазной смазочных мазь на глазах, чтобы предотвратить сухость в то время как под наркозом.
  8. Закрепите конечности мыши к хирургической стадии, добавив лаборатории ленту.
  9. Удалить волосы от брюшной поверхности с помощью электробритвы. Также удалить волосы с левой задней конечности позиционировать оксиметр перед приобретением. Снимите лаборатории Soaker от хирургического этапа и заменить чистой одного, чтобы избежать загрязнения волос.
  10. Лечить вентральной поверхности с спиртовыми салфетками и бетадином.
  11. Введите атропин решение (от 3,2) подкожно в одном фланге мыши.
  12. Сделать 1 см вентральной средней линии разрез через кожу и брюшины с помощью ножниц и одну пару щипцов. Осторожно выньте 3-4 см кишечника и определить один или несколько опухолей в изображении.
  13. Возьмите стеклянную MICRoscope слайд и положение петли кишечника на нем с опухолью в верхней части.
  14. Добавьте немного супер клей до нескольких местах вдоль кишки, чтобы прикрепить ее к слайду. Подождите одну мин для клею высохнуть. Используйте маркер, чтобы нарисовать линию на слайде, указывающих на опухоли, чтобы облегчить его локализацию с конфокальной.

5 Позиционирование мыши в рабочей области и подготовка к захвата изображений

  1. Удалить лаборатории ленту с конечностей.
  2. Откройте анестезии линию столик микроскопа и закрыть один в хирургическое платформы.
  3. Трансфер мышь тщательно столике микроскопа с его вентральной стороной вниз и носом в носовом обтекателе. Закрепите анестезии линию с некоторой лаборатории ленты.
  4. Re-установить мышь и / или слайд, чтобы иметь кишечник в центре одного из кавер-поскользнулся окон. Аккуратно прикрепите вниз слайд с лабораторной ленты.
  5. Прикрепите пульсоксиметра зонд к левой конечности мыши кследить за его сердце и скорости и артериальная насыщения кислородом уровни респираторных.
  6. Накройте мышь с нагревательным одеяло, чтобы избежать переохлаждения.
  7. Уменьшите ИФ концентрации от 2,5% до 1-1,5% для визуализации.

6 Приобретение образов с помощью μManager программного обеспечения

  1. Увеличить скорость CSUX в 2500 оборотов в минуту, чтобы улучшить качество изображения в параметрах конфигурации.
  2. Используйте меню Objective выпадающий выбрать 10X 0,5 NA или 20X 0.75 NA Fluar объектива цели.
  3. Выберите лазера 405 нм от меню Color списка.
  4. Нажмите на эфир и настроить фокус с микроскопом.
  5. Нажмите на Auto для автоматической настройки максимальные и минимальные интенсивности пикселей в изображении монитора в зависимости от крайних значений пикселов в изображении. Гистограмма интенсивности отображения изображения в пиксельных представлена ​​на графике в нижней части главного окна.
  6. Отрегулируйте экспозицию камеры в окне панели управления Пайпер поизменения количества часов (Один часы 33.333 мсек).
  7. Если сигнал слишком яркий с низкой воздействия, снизить интенсивность лазерного излучения с помощью блока управления микроскоп.
  8. Проверьте интенсивность сигнала для 488 нм, 561 нм и 640 нм лазерных линий. Отрегулируйте интенсивность лазера с собственным блоком лазера управления (488 нм и 561 нм) или блока управления микроскоп.
  9. В окне Мульти D Acquisition, установите флажок Время баллов и введите в число временных точек и нужный интервал.
  10. Установите флажок Z-стеки, выберите "относительную Z" и определить Z-старт и Z-конечный относительно текущей позиции.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Для 10X или 20X цели, начните с 3 Z самолетов, 8 мкм или 4 мкм друг от друга соответственно.
  11. Проверьте Несколько позиций (XY) окно для визуализации в нескольких местах, нажмите кнопку Редактировать позиции, отмечают 4 до 6 различных позиций.
  12. Установите флажок Каналы и добавить каналы из новых и выберите лазеры строки из выпадающего меню и номе в экспозиции для каждого канала (в упаковке 33,333 мс).
  13. Проверьте Сохранение изображений в окне "Сбор нескольких D".
  14. Выберите папку и все изображения, полученные будут автоматически сохранены в этой папке с префикса данного.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Каждое непрерывное приобретение будут сохранены в отдельном вложенную папку, в отдельные файлы TIFF для каждого Z среза каждого цвета в каждый момент времени.
  15. Сохраните все настройки, нажав Сохранить настройки в окне нескольких D Acquisition.
  16. Нажмите Приобретать в многомерном окне Приобретение начать приобретение.
  17. Если оксигемометр датчик не используется или перестает работать хорошо (когда импульс не является стабильным или трудно обнаружить), проверить эффективность анестезии каждые 15 мин в течение процедуры визуализации, зажимая в подушечку лапы и проверка роговицы рефлекс. Отрегулируйте анестезии, если мышь реагирует на эти раздражители.
  18. После приобретения, усыпить мыши путем увеличения ИФ ОБОГАЩЕНИЯРацион до 5%. Когда нет дыхательные движения не могут быть обнаружены, удалите мышь со сцены и выполнить шейки дислокации.

7 Анализ изображений с помощью Imaris программного обеспечения

  1. Преобразование в .ims файлов (Дополнительный Рис 1А)
    1. Откройте программное обеспечение камеры, нажмите на файл, то Batch Converter.
    2. Нажмите на Добавить файлы и выбрать первый файл первой позиции. Повторите для каждой позиции.
    3. Для каждого файла загруженного, нажмите на Настройки и проверьте, что параметры "T" для Time, "C" для каналов и "Z" для Z-стеки появляются именно в таком порядке.
    4. Сохранить в нужную папку. Обзор и создать новый файл в пересчете.
    5. Нажмите на Набор для всех, создание.
  2. Корректировки (Дополнительный Рис 1B)
    1. Перейти в конкретной Старинное папку и открыть первый файл.
    2. В окне Настройка дисплея, настроить фонсреза сигнала путем изменения количества мин в течение каждого канала, если это необходимо.
    3. При необходимости, регулировать интенсивность сигнала, изменяя Макс номер (нижний максимальное число, тем выше интенсивность сигнала).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Настройки сигнала интенсивности / контраста позволяют выделить из поведения клеток или купе, чтобы иметь более хороший визуализации. Это не влияет на сам результат.
    4. Нажмите на Изменить и изображения свойства.
    5. Измените X, Y, и значения Z (для 10-кратным объективной, х и у = 0,712, г = 8 мкм; для 20-кратным объективной: х и у = 0,36, г = 4 мкм).
    6. Нажмите на All равном расстоянии настроить временные точки. Добавить дату начала и время приобретения начать. Добавить конечную дату и время окончания приобретения (Дополнительный Рис 1С).
    7. Нажмите на кнопку Play, чтобы посмотреть фильм.
    8. Нажмите кнопку Изменить и Удалить временные точки удалить размытые изображения.
    9. Чтобы присоединиться два отдельных приобретений тогэTher в один фильм, перейти к последней точке времени первого фильма и нажмите на Edit> Добавить временные точки, чтобы добавить второй файл.
  3. Сохранение в виде фильма (Дополнительный Рис 1D)
    1. Нажмите на запись, выбрать расширение .mov и коэффициент сжатия 0.
    2. Нажмите на Сохранить.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Используя спиннинг диск конфокальной микроскопии, неопухолевые и опухолевые ткани в тонком кишечнике АПК Мин / +; ACTB-ECFP; мышей с-FMS-ECFP могут быть визуализированы с поверхности серозной. После визуализации, программное обеспечение камеры используется для анализа и корректировки приобретение (Дополнительный рисунок 1). После внутривенного (в) инъекции флуоресцентного 2000 кДа декстран-родамин и Ли-6G 647 конъюгированного антитела, кровеносные сосуды и PMNs могу...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

В этой статье, подробный протокол описывается для прядения диска конфокальной микроскопии динамики миелоидных клеток в кишечных опухолей в течение нескольких часов в живого животного, изображение получено с серозной стороны кишечнике.

Чтобы избежать воспаления и иметь оптимальные физиологические условия, томография кишечника должно быть сделано на интактной органа. Тем не менее, изображения с серозной стороны кишечника является сложной задачей, так как свет должен пройти через различные слои...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Мы хотели бы поблагодарить Ин ю для Apc Min / + мышей генотипирования. Работа выполнена при поддержке за счет средств INSERM и грантов (CA057621 и AI053194) из Национального института здоровья.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
ApcMin/+ мышиJackson Laboratory2020
ACTB-ECFP мышиJackson Laboratory3773
cfms-EGFP мышиJackson Laboratory18549
2,000 kDa Dextran, родамин-конъюгированныйInvitrogenD7139
IsofluraneButler Animal Health Supply29450
АзотUCSF
КислородUCSF
1x PBSУстановка для культивирования
Солевой буферУстановка
Антитело против мыши Ly-6G (GR1) AF647UCSF ЯдроБульон 1 мг/мл. Используйте при 7 μ г/мышь
АтропинLARC UCSFИспользование в дозе 1 мг/кг мышиные
спиртовые салфеткиBecton Dickinson326895
28 г x 1/2 дюйма инсулиновый шприцBecton Dickinson329465
Remium крышка стеклаFisher Scientific12-548-5M24x50-1
BetadineLARC UCSF
Тепловое одеялоGaymar Отрасли промышленности
Стерилизатор горячих шариковИнструменты для тонкой науки18000-45Включить за 30 минут до использования
Апликаторы с хлопчатобумажными наконечниками 6-дюймовыеЭлектронная микроскопия Sciences72310-10
Система анестезииSummit Поддержка
анестезии Инвертированный микроскопCarl Zeiss IncZeiss Axiovert 200M
СтоликПрикладные научные приборы
Mouse Ox оксиметр, программное обеспечение и датчикиStarr Life SciencesMouseOx
НебулайзерSummit Поддержка анестезии Imaris
Bitplane
μ Руководительлаборатории Vale, UCSFПрограммное обеспечение с открытым исходным кодом
ICCD камераStanford PhotonicsXR-Mega-10EX S-30
Вращающийся диск конфокальная сакан-головкаYokogawa CorporationCSU-10b
клеток UCSFдля культивирования клеток UCSF моноклонального антитела

Ссылки

  1. Hanahan, D., Weinberg, R. A. Hallmarks of cancer: the next generation. Cell. 144 (5), 646-674 (2011).
  2. Hanahan, D., Coussens, L. M. Accessories to the crime: functions of cells recruited to the tumor microenvironment. Cancer Cell. 21 (3), 309-322 (2012).
  3. Schouppe, E., De Baetselier, P., Van Ginderachter, J. A., Sarukhan, A. Instruction of myeloid cells by the tumor microenvironment: Open questions on the dynamics and plasticity of different tumor-associated myeloid cell populations. Oncoimmunology. 1 (7), 1135-1145 (2012).
  4. Egeblad, M., Nakasone, E. S., Werb, Z. Tumors as organs: complex tissues that interface with the entire organism. Dev Cell. 18 (6), 884-901 (2010).
  5. Lohela, M., Werb, Z. Intravital imaging of stromal cell dynamics in tumors. Curr Opin Genet Dev. 20 (1), 72-78 (2010).
  6. Egeblad, M., et al. Visualizing stromal cell dynamics in different tumor microenvironments by spinning disk confocal microscopy. Dis Model Mech. 1 (2-3), discussion 165 155-167 (2008).
  7. Ewald, A. J., Werb, Z., Egeblad, M. Dynamic long-term in vivo imaging of tumor-stroma interactions in mouse models of breast cancer using spinning-disk confocal microscopy. Cold Spring Harb Protoc. 2011 (2), pdb top97 (2011).
  8. Ewald, A. J., Werb, Z., Egeblad, M. Monitoring of vital signs for long-term survival of mice under anesthesia. Cold Spring Harb Protoc. 2011 (2), pdb prot5563 (2011).
  9. Ewald, A. J., Werb, Z., Egeblad, M. Preparation of mice for long-term intravital imaging of the mammary gland. Cold Spring Harb Protoc. 2011 (2), pdb prot5562 (2011).
  10. Nakasone, E. S., Askautrud, H. A., Egeblad, M. Live imaging of drug responses in the tumor microenvironment in mouse models of breast cancer. J Vis Exp. (73), e50088(2013).
  11. Nakasone, E. S., et al. Imaging tumor-stroma interactions during chemotherapy reveals contributions of the microenvironment to resistance. Cancer Cell. 21 (4), 488-503 (2012).
  12. Walther, A., et al. Genetic prognostic and predictive markers in colorectal cancer. Nat Rev Cancer. 9 (7), 489-499 (2009).
  13. Fearon, E. R. Molecular genetics of colorectal cancer. Annu Rev Pathol. 6, 479-507 (2011).
  14. Moser, A. R., Pitot, H. C., Dove, W. F. A dominant mutation that predisposes to multiple intestinal neoplasia in the mouse. Science. 247 (4940), 322-324 (1990).
  15. Su, L. K., et al. Multiple intestinal neoplasia caused by a mutation in the murine homolog of the APC gene. Science. 256 (5057), 668-670 (1992).
  16. Watson, A. J., et al. Epithelial barrier function in vivo is sustained despite gaps in epithelial layers. Gastroenterology. 129 (3), 902-912 (2005).
  17. McDole, J. R., et al. Goblet cells deliver luminal antigen to CD103+ dendritic cells in the small intestine. Nature. 483 (7389), 345-349 (2012).
  18. Xu, C., Shen, Y., Littman, D. R., Dustin, M. L., Velazquez, P. Visualization of mucosal homeostasis via single- and multiphoton intravital fluorescence microscopy. J Leukoc Biol. 92 (3), 413-419 (2012).
  19. Haigis, K. M., et al. Differential effects of oncogenic K-Ras and N-Ras on proliferation, differentiation and tumor progression in the colon. Nat Genet. 40 (5), 600-608 (2008).
  20. Sansom, O. J., et al. Loss of Apc allows phenotypic manifestation of the transforming properties of an endogenous K-ras oncogene in vivo. Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (38), 14122-14127 (2006).
  21. Janssen, K. P., et al. APC and oncogenic KRAS are synergistic in enhancing Wnt signaling in intestinal tumor formation and progression. Gastroenterology. 131 (4), 1096-1109 (2006).
  22. Takaku, K., et al. Intestinal tumorigenesis in compound mutant mice of both Dpc4 (Smad4) and Apc genes. Cell. 92 (5), 645-656 (1998).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Мыши Apc Min/+визуализация кишечных опухолейфлуоресцентные репортерные мышиприжизненная визуализацияанализ микроокружения опухолимаркировка кровеносных сосудовдетекция нейтрофиловтайм-лапс микроскопия
В режиме реального времени изображений миелоидных клеток Dynamics в Арс Мин / + Кишечная Опухоли на вращающемся диске конфокальной микроскопии
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.