Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Оценка опухоли инфильтрирующие лейкоцитов подмножеств в подкожной опухоли модели

20K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/52657

⸱

13 апреля 2015 г.

 ,  ,  ,  , 
1Division of Oncology, Department of Medicine, Washington University School of Medicine, 2Palo Alto Institute for Research and Education, Veterans Affairs Palo Alto Health Care System, 3Laboratory of Immunology and Vascular Biology, Department of Pathology, Stanford University School of Medicine

В этой статье

Краткое содержание

Этот протокол описывает метод детальной оценки подмножеств лейкоцитов в микроокружении опухоли мыши в модели. Хемерин-экспрессирующие клетки меланомы B16 были имплантированы подкожно сингенным мышам. Затем клетки из опухолевого микроокружения окрашивали и анализировали с помощью проточной цитометрии, что позволило провести детальный анализ подпопуляций лейкоцитов.

Аннотация

Специализированный иммунные клетки, которые проникают в микроокружение опухоли регулировать рост и выживание неоплазии. Злокачественные клетки должны ускользать или подорвать противоопухолевые иммунные ответы, чтобы выжить и процветать. Опухоли воспользоваться рядом различных механизмов иммунной "побега", включая вербовку толерогенную округ Колумбия, иммунодепрессанты регуляторные Т-клетки (регуляторные Т-клетки), и миелоидного происхождения супрессоров (MDSC), которые ингибируют цитотоксические реакции противоопухолевые. С другой стороны, противоопухолевый эффекторные иммунные клетки могут замедлить рост и расширение злокачественных новообразований: иммуностимулирующих дендритных клеток, естественных клеток-киллеров, которые несут врожденный иммунитет против опухоли, и цитотоксических Т-клеток все могут участвовать в подавлении опухоли. Баланс между про- и анти-опухолевых лейкоцитов в конечном счете определяет поведение и судьбу трансформированных клеток; Множество клинических исследованиях у человека уже это подтвердили. Таким образом, детальный анализ лейкоцитов подмножеств вмикросреда опухоль становится все более важным. Здесь мы опишем метод для анализа Проникнув лейкоцитов подмножеств, присутствующие в опухоли микроокружения в опухолевой модели мыши. Мышь В16 опухолевые клетки меланомы инокулировали подкожно в мышей C57BL / 6. В указанное время, опухоли и окружающую кожу иссекают единым блоком и обрабатываются в отдельных клеточных суспензий, которые затем окрашивали в течение многоцветной проточной цитометрии. Используя различные лейкоцитов подмножества маркеров, мы смогли сравнить относительные проценты проникновения лейкоцитов подмножеств между контролем и chemerin-выражения опухоли. Исследователи могут использовать такой инструмент для изучения иммунной присутствие в опухоли микроокружения и в сочетании с традиционными измерения размеров суппорт опухолевого роста потенциально позволит им выяснить влияние изменений в иммунной композиции на рост опухоли. Такой метод может быть применен к любой модели опухоли, в котором опухоль и его микроокружение Cбыть резекции и обрабатывается.

Введение

Баланс между ростом опухоли и поощрения и регрессии, в частности, зависит от баланса про- и анти-опухолевых проникновения лейкоцитов, присутствующих в микросреде 1,2. С целью изучения микросреды опухоли (TME) и, в частности выявления Проникновение субпопуляций лейкоцитов, мы разработали метод для оценки подкожных опухолей на мышиной модели опухоли. Важность изучения микроокружение опухоли хорошо известна и поддерживается в литературе. Многочисленные исследования показали, что баланс про- и анти-опухолевых проникновения иммунных клеток может повлиять на результаты роста опухоли, а не только в мыши, но и человеческие исследования (обзор в 3,4). Например, Curiel и др. Показали, что ухудшило клинические результаты в больных раком яичников коррелировали с присутствием увеличение процентного содержания опухолевых-проникновения регулирующих CD4 + Т-клеток (Tregs) 5. Наша собственная работа также показал эффективность НетVel лейкоцитов хемоаттрактант от соотношения лейкоцитов подмножеств в модели меланомы мыши 6, в котором также коррелирует со снижением роста опухоли. Таким образом, подробный анализ лейкоцитов подмножеств в опухоли в настоящее время более широко признается и большее значение.

Есть много способов, чтобы оценить микросреду опухоли для проникновения лейкоцитов; например группы разработаны трансгенных мышей, чтобы выразить различные флуоресцентные белки для того, чтобы изображение TME 7, классическая иммуногистохимии и иммунофлуоресценции сохранившихся участков 8, в том числе различных методов визуализации, таких как МРТ, ПЭТ, конфокальной микроскопии 9-11 - некоторые со способностью следить прижизненно 10,12. Они могут быть использованы с различными молекулярными агентов визуализации, таких как наночастицы или 13 новых контрастных веществ 14, что метка иммунные клетки. Наш подход метод проточной цитометрии основе и имеет ряд преимуществ.Во-первых, вся микросреда опухоль можно попробовать; во время анализа, весь подкожной опухоли и окружающие периферии хирургическим резекции для обработки. Это исключает какой-либо потенциально дискретизации уклон в пределах одного опухоли и дает более «глобальный» анализ опухоли в целом. Во-вторых, с помощью многоцветной проточной цитометрии, чтобы проанализировать лейкоцитов подмножеств позволяет более конкретно оценить фенотип проникают лейкоцитов. В зависимости от количества используемых цветов, очень специфические подмножества могут быть определены. Это важно, поскольку есть несколько лейкоцитов подмножеств в конкретном типе клеток - или даже в генеральной классификации подтипа - которые имеют разнородные функции, которые являются потенциально значимым в определении судьбы опухоли. Например, плазмоцитов дендритные клетки (PDC) были вовлечены в противоопухолевого иммунитета 15. Тем не менее, CCR9 + подмножество PDCs было показано, что толерогенную 16, и смещение бакопье такого подмножества могут иметь влияние на рост опухоли.

Наш способ подходит для подкожного или других опухолей, которые могут быть резекции единым блоком. В наших руках, опухоли были равномерно резекции во время эвтаназии. Тем не менее, можно предположить, как это было сделано в некоторых исследованиях, которые подкожной опухоли может быть полностью резекции с закрытием окружающей кожи в хирургии выживания 17, таким образом позволяя дополнительную оценку животного. Анализ затем выполняется на удаленной опухоли. Таким образом, результаты представляют собой единый временной точке в развитии опухоли. Хотя это позволяет детально рассмотреть в микросреде, это также статическая картинка того, что, несомненно, динамичный процесс. Тем не менее, отдельные лейкоциты (например, с помощью магнитной сепарации или градиент плотности) может быть проанализирован отдельно от эпителия опухоли и стромы, или использоваться в других, функциональных анализов для дальнейшего определения их фенотип, как это было previменно описано 18. Этот метод, то было бы полезно для всех исследователей, заинтересованных в понимании состава лейкоцитов в пределах опухолевого микроокружения в данный момент времени, независимо от того в условиях естественного течения заболевания, или после определенного терапевтического возмущения. Хотя это и не сделано нами, вариации этой процедуры могут также потенциально быть использованы для анализа конкретных участков опухоли в изоляции. Например, если размер опухоли, периферийной зоной (ы) может быть отсечен от центральной, возможно, некротических ядро ​​опухоли, чтобы дать исследователю более пространственно отделены вид на микроокружение опухоли.

В растущей области иммунологии опухолей, не будет, без сомнения, растет в геометрической прогрессии количество исследований, оценивающих новейших иммуномодулирующих агентов в мышиных моделях опухолей. Несколько отчетов выделяются различия в конкретных функциональных лейкоцитов в опухоли по сравнению с периферической ENсреды. Например, Шафер-Weaver и др. Показали на мышиной модели, что антиген-специфических Т-эффекторы CD8 + клеток, в то время как активность в периферии, были преобразованы в CD8 + Т-супрессорных клеток, когда они продают в опухоли микроокружения 19. Это было отчасти из-за TGF-beta, но и другие факторы, вероятно, участвует также. Таким образом, оценивая лейкоцитов подмножеств - числа и коэффициенты, а также функциональное состояние - в самой опухоли даст более точное представление о влиянии конкретной иммуномодуляцию на судьбе опухоли.

Наша методика позволяет детальный анализ опухоли и обеспечивает исследователю возможность более тесно определить изменения в лейкоцитарной населения по сравнению с предыдущими подходами.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

ПРИМЕЧАНИЕ: Все эксперименты на животных были проведены в соответствии с утвержденным Стэнфорд, Пало-Альто А. ЖКХ, а также Национальные институты здравоохранения Институциональная AnimalCare и использования Комитетом руководящих принципов.

1. Подготовка для образца сбора и обработки (Необходимое время: ~ 10-15 мин)

  1. Посев мышиных клеток меланомы B16F0 (0,5-1 × 10 6) подкожно на или вблизи средней линии живота в женских C57BL / 6 мышей, как описано ранее 6. Кроме того, инокуляции опухолевых клеток на дополнительных анатомических участков (например, боковая, жировой ткани молочной железы и т.д.).
    Примечание: Любое количество опухолей (имплантированные или спонтанное) могут быть использованы и оценены с использованием этого протокола. Например, другие обычно используется сингенные опухоли у мышей C57BL / 6, включают толстой кишки линии МС38, карцинома легких Льюис (LLC), а простаты TRAMP-C2 линию. В то время как человека ксенотрансплантатов инокулировали в иммунодефицитных мышей также может быть оценена, таким образом, следует отметить, что рrofiles опухоли-проникновение лейкоцитов обязательно быть изменены в соответствии с иммунодефицитом состояния хост-мыши.
    1. Используйте полный средства массовой информации (например, RPMI, содержащей 10% FBS и добавки) или другого соответствующего белка, содержащего буфер (например, HBSS или PBS + 1% FBS или 1% BCS). Холод носитель или буфер до 4 ° С до euthanization.
  2. Настроить собрание трубы и фильтры для резекции опухоли; разместить их на льду.
    1. Используйте один 50 мл коническую трубку в опухоли, подлежащей резекции. Вставьте суспензии клеток фильтр 40-70 мкм в каждом из них. Кроме того, использование 15 мл конические пробирки с металлическим фильтром сетки. Использование 5 мл шприца или толстую ручку, чтобы создать чашеобразную фильтр в верхней части 15 мл пробирку.
  3. Подготовка документов для резекции и опухолевой обработки; использовать хирургические щипцы и тонких ножниц резекцию и опухоли процесса. Используйте 70% этанола, чтобы очистить инструменты между образцами резекции / опухолей. Для большего количества OОбразцы F (например,> 10), мы рекомендуем одновременную обработку образцов при нескольких исследователей, чтобы избежать существенных различий во времени обработки между образцов опухоли.

2. Резекция опухоли (Необходимое время: ~ 5 мин / опухоль)

  1. Эвтаназии В16 опухоли мышей по отдельности, используя диоксид углерода или другой утвержденный метод.
  2. Безопасный мыши на хирургическом этапе. Спрей области опухоли с 70% этанола и протрите излишки офф; это помогает предотвратить распространение любых современных волос. Для не-ню мышей, бриться участок кожи вокруг опухоли до резекции по мере необходимости.
  3. Использование щипцов и ножниц, резекцию подкожной опухоли единым блоком, в том числе наружным и кожу вокруг. Количество «Маржа» кожи мер может быть разнообразным, но обычно резекцию 2-3 мм кожи вокруг опухоли.
    1. Взвесьте резекции опухоли (+/- окружающей кожи) в этой точке. Поместите Резецированная раздел кожа / опухоли в фильтре крепится внутри PLASTIC коническую трубку.

3. Подготовка Single Cell опухоли подвеска (Необходимое время: ~ 5-7 мин / опухоль)

  1. Используйте пинцет и ножницы, чтобы пропустить через мясорубку опухоли и облегающего / окружающей кожи. Фарш образец с помощью ножниц, пока все большие участки ткани не будут обработаны в 1-2 мм разделах.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Как правило, целые опухоли обрабатываются; С другой стороны, для более крупных опухолей, репрезентативные участки опухоли могут быть измельчают и обрабатывают.
  2. Использование поршень из шприца одноразового 5 или 10 мл, механически разбить фарш опухолевой ткани от обеспеченного фильтра.
  3. Использование пипетки, вымыть обработанную ткань опухоли с 5-10 мл холодной массовой информации или буфера. Это флеш единичные клетки через фильтр.
  4. Повторите описанные выше действия несколько раз, убедившись, что общее количество и объемы промывок примерно то же самое для аналогичного размера опухоли.
    1. После промывки обработанного опухолевой ткани, наблюдаетсянебольшие фрагменты кожи и / или другой соединительной ткани должны быть оставлены в фильтре.
    2. Кроме того, для опухолей, где одна механическая разбивка может быть недостаточно, пищеварения коллагеназы и / или других ферментов могут быть выполнены перед процедурой мясорубки. Это позволит более тщательного суспензии отдельных клеток. Тем не менее, следует отметить, что такие протоколы пищеварения может влиять поверхностного антигена выражение 20, так что следует соблюдать осторожность при интерпретации этих результатов.
  5. Вымойте и осаждения клеток путем добавления СМИ / буфера и центрифугирования при 4 ° C 500 мкг в течение 5 мин.

4. FACS окрашивание отдельных клеток подвеска (Необходимое время: ~ 30-60 мин)

  1. Ресуспендируют клеток в ледяной FACS буфера (PBS + 1% FBS).
  2. Граф жизнеспособных клеток с использованием трипанового синего и гемацитометра, или автоматизированного счетчика клеток.
  3. Определите суммарную жизнеспособного выхода клеток на единицу объема. Эти данные могут быть использованы для экстраполяцииАбсолютное число опухолевых проникновения лейкоцитов в сочетании с данными FACS.
  4. Определить количество клеток, которые будут окрашивали и анализировали с помощью FACS. Это будет зависеть от нескольких факторов (например, опухоли Гистологический тип, возраст и размера опухоли, средний процент Лейкоциты проникают, и т.д.).
    Примечание: В меланомы В16, мы обнаружили, низкий процент опухолевых проникновения лейкоцитов (TIL; как правило, <5%) по сравнению с опухолевыми клетками. Таким образом, по крайней мере, 1 × 10 6 Общий опухоли (опухоль + Лейкоциты проникают) клетки, как правило, собирают с помощью FACS анализа.
    1. Используя данные Трипановый окрашенных подсчета, рассчитывается объем ячейки, которые будут окрашены для FACS. Например, если TIL как правило, составляют 5% от общего количества опухолевых клеток (многие из опухолевых клеток будет мертвым на трипанового пятна), фактор это в общем количестве опухоли суспензии одной клетки должны быть окрашены.
    2. Для менее распространённых лейкоцитов подмножеств, например, CCR9 + PDC) использовать больший общее количество опухолевых клеток (например 2-3 × 10 6) для окрашивания FACS, с учетом относительной низкой частоты этих клеток в суспензии отдельных клеток.
  5. Пятно опухоли одного суспензии клеток для FACS.
    1. Для живого / мертвого дискриминации, используйте поправимо пятно или без поправимо пятно (например, пропидийиодидом) могут быть использованы. Если в ячейке окрашивают без живой / мертвый дискриминации, следует проявлять осторожность посоветовали, учитывая потенциал для неспецифического связывания антител.
    2. Пятно клеточной суспензии для конкретных лейкоцитов подмножеств с использованием стандартного протокола окрашивания FACS. Блок для уменьшения клетки неспецифического связывания антитела с PBS / FBS, содержащей 1% сыворотки крыс и Fc Block (анти-CD16 / 32) в течение 10 мин до окрашивания антиген-специфических антител. Включить правильные антитела контрольного изотипа для обеспечения окрашивание является специфическим.
    3. В этот момент, после того, как окрашивание FACS завершена, исправить образцы с 4% формальдегидом или другого подобного закрепляющего агента. Магазин образцы при 4 ° С в ДПгк (как, чтобы избежать тушения флуорофоров) до момента сбора и анализа.
      Примечание: Хранение фиксированные образцы в течение длительных периодов времени может привести к изменению в сигнале и интенсивности флуорофоров 21.
    4. Сбор образцов на цитометра потока. Оптимальное проточный цитометр настройки будут изменяться в зависимости от типа инструмента и установки лазерного / детектор.
      Примечание: Кроме того, могут быть изменчивости между экспериментами, даже при использовании той же машине. Таким образом, выполняют соответствующие настройки устройства (например, с использованием калибровочных бусы), чтобы обеспечить соответствующую настройку компенсации до сбора и анализа каждого эксперимента FACS.
  6. Анализ leukoctye подмножеств
    1. Использование программного обеспечения для анализа данных FACS, анализировать данные. Для Live / Dead пятна, начните с Память мертвые клетки. Использование антитела против лейкоцитов специфического маркера (например, анти-CD45), чтобы определить лейкоцитов в живых клетках.
      1. После этого, используют различные гатинг схемы, чтобы определить конкретные подмножества, в зависимости от протокола окрашивания. Например, чтобы определить CD4 + Т-клеток, выберите регион, SSC ло от населения CD45 + и выберите + клеток CD19-CD3; из этого CD4 + Т-клеток могут быть идентифицированы 22.
    2. Анализ данных и представить его в ряде различных способов обеспечения согласованности и выявления закономерностей или тенденций (т.е. использовать общие цифры, проценты, или отношения количественно подмножества).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Например, мы смотрели на в живом CD45 + клеток в процентах от общего числа опухолевых клеток, собранных (рисунок 1). Кроме того, мы затем рассчитывается процент от каждой лейкоцитов подмножества (например, CD4 + Т-клеток) в опухоли и сравнили их как отношения между контрольной и опытных групп (рисунок 3).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Наши результаты показали, что вынуждены сверхэкспрессии chemerin в мышиных опухолей В16 увеличивало процент опухолевых проникновения лейкоцитов (Tīls). Кроме того, были выявлены изменения в относительной пропорции лейкоцитов подмножеств, представленных в опухоли микроокружения, связанного с выражением chemerin. Повторная печать с разрешением от Pachynski и др. 6.

Рисунок 1 показывает, что существует значительное увеличение в общем объеме CD45 + клеток (TILS...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Выполнение подробный анализ микросреды опухоли имеет решающее значение в определении механизмов и последствий иммуномодуляцию. С увеличением присутствия иммунотерапевтических в клинической сфере человека, понимания воздействия этих препаратов на опухолевые проникновения лейкоцитов становится реквизит в определении механизма их действия. У человека часто существуют клинические и / или логистических трудностей в получении и анализе опухолевой ткани для анализа лейкоцитов подмножества, и, таким образом, анализ периферическ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Эта работа была поддержана грантами R01-CA169354   и R01-047822   из Национального института здоровья и поощрительных выплат от Департамента по делам ветеранов (ЕЦБ). РКП была поддержана NIH T32 CA009287-30A1, в ASCO для молодых исследователей Award, Калифорния груди Cancer Research Project стипендий и Американского общества рака наставником ученый-исследователь гранта; БАЗ была поддержана NIH грант AI079320. Миссия была поддержана стипендий от НИЗ T-32 субсидия на обучение T32-AI07290- 25, T32-AI07290-24 и Американского онкологического общества после защиты докторской диссертации общение PF-12-052-01-CSM.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
RPMICellgro10-040http://cellgro.com; держать на льду
FBSCellgro35-011-CVhttp://cellgro.com
50 мл конические тубыFalcon14-432-22fischersci.com
40 μ м фильтрFalcon08-771-1fischersci.com
шприц 5 млBD14-823-35fischersci.com
хирургические ножницы/щипцыRobozRS-5910roboz.com
PBSCellgroMT-21-030-CMhttp://cellgro.com; держать на льду
трипан синийCellgroMT-25-900-CIfischersci.com
гемацитометрHausser Scientifice 02-671-54 fischersci.com
Живые/мертвые пятнаLife TechnologiesL34957lieftechnologies.com
программное обеспечение FlowJo TreeStar, Incflowjo.com

Ссылки

  1. Mantovani, A., et al. Chemokines in the recruitment and shaping of the leukocyte infiltrate of tumors. Semin Cancer Biol. 14 (3), 155-160 (2004).
  2. Zitvogel, L., Tesniere, A., Kroemer, G. Cancer despite immunosurveillance: immunoselection and immunosubversion. Nat Rev Immunol. 6 (10), 715-727 (2006).
  3. Gajewski, T. F., Schreiber, H., Fu, Y. X. Innate and adaptive immune cells in the tumor microenvironment. Nat Immunol. 14 (10), 1014-1022 (2013).
  4. Fridman, W. H., Pages, F., Sautes-Fridman, C., Galon, J. The immune contexture in human tumours: impact on clinical outcome. Nat Rev Cancer. 12 (4), 298-306 (2012).
  5. Curiel, T. J., et al. Specific recruitment of regulatory T cells in ovarian carcinoma fosters immune privilege and predicts reduced survival. Nat Med. 10 (9), 942-949 (2004).
  6. Pachynski, R. K., et al. The chemoattractant chemerin suppresses melanoma by recruiting natural killer cell antitumor defenses. J Exp Med. 209 (8), 1427-1435 (2012).
  7. Hoffman, R. M. Transgenic nude mice ubiquitously expressing fluorescent proteins for color-coded imaging of the tumor microenvironment. Methods Mol Biol. 1194, 353-365 (2014).
  8. Mansfield, J. R. Imaging in cancer immunology:phenotyping immune cell subsets in situ in FFPE tissue sections. MLO Med Lab Obs. 46 (6), 12-13 (2014).
  9. Serres, S., O'Brien, E. R., Sibson, N. R. Imaging angiogenesis, inflammation, and metastasis in the tumor microenvironment with magnetic resonance imaging. Adv Exp Med Biol. 772, 263-283 (2014).
  10. Schietinger, A., et al. Longitudinal confocal microscopy imaging of solid tumor destruction following adoptive T cell transfer. Oncoimmunology. 2 (11), e26677(2013).
  11. Singh, A. S., Radu, C. G., Ribas, A. P. E. T. imaging of the immune system: immune monitoring at the whole body level. Q J Nucl Med Mol Imaging. 54 (3), 281-290 (2010).
  12. Kilarski, W. W., et al. Intravital immunofluorescence for visualizing the microcirculatory and immune microenvironments in the mouse ear dermis. PLoS One. 8 (2), e57135(2013).
  13. Habibollahi, P., et al. Fluorescent nanoparticle imaging allows noninvasive evaluation of immune cell modulation in esophageal dysplasia. Mol Imaging. 13 (3), 1-11 (2014).
  14. Balducci, A., et al. A novel probe for the non-invasive detection of tumor-associated inflammation. Oncoimmunology. 2 (2), e23034(2013).
  15. Liu, C., et al. Plasmacytoid dendritic cells induce NK cell-dependent, tumor antigen-specific T cell cross-priming and tumor regression in mice. J Clin Invest. 118 (3), 1165-1175 (2008).
  16. Hadeiba, H., et al. CCR9 expression defines tolerogenic plasmacytoid dendritic cells able to suppress acute graft-versus-host disease. Nat Immunol. 9 (11), 1253-1260 (2008).
  17. McLean, M., et al. A BALB/c murine lung alveolar carcinoma used to establish a surgical spontaneous metastasis model. Clin Exp Metastasis. 21 (4), 363-369 (2004).
  18. Watkins, S. K., Zhu, Z., Watkins, K. E., Hurwitz, A. A. Isolation of immune cells from primary tumors. J Vis Exp. (64), e3952(2012).
  19. Shafer-Weaver, K. A., et al. Cutting Edge: Tumor-specific CD8+ T cells infiltrating prostatic tumors are induced to become suppressor cells. J Immunol. 183 (8), 4848-4852 (2009).
  20. Goodyear, A. W., Kumar, A., Dow, S., Ryan, E. P. Optimization of murine small intestine leukocyte isolation for global immune phenotype analysis. J Immunol Methods. 405, 97-108 (2014).
  21. Stewart, J. C., Villasmil, M. L., Frampton, M. W. Changes in fluorescence intensity of selected leukocyte surface markers following fixation. Cytometry A. 71 (6), 379-385 (2007).
  22. Hackstein, H., et al. Heterogeneity of respiratory dendritic cell subsets and lymphocyte populations in inbred mouse strains. Respir Res. 13, 94(2012).
  23. Ostrand-Rosenberg, S. Myeloid-derived suppressor cells: more mechanisms for inhibiting antitumor immunity. Cancer Immunol Immunother. 59 (10), 1593-1600 (2010).
  24. Curran, M. A., Montalvo, W., Yagita, H., Allison, J. P. PD-1 and CTLA-4 combination blockade expands infiltrating T cells and reduces regulatory T and myeloid cells within B16 melanoma tumors. Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (9), 4275-4280 (2010).
  25. Schreiber, R. D., Old, L. J., Smyth, M. J. Cancer immunoediting: integrating immunity's roles in cancer suppression and promotion. Science. 331 (6024), 1565-1570 (2011).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

B16
Оценка опухоли инфильтрирующие лейкоцитов подмножеств в подкожной опухоли модели
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.