Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Стереотаксическая Настой олигомерных бета-амилоида в гиппокампе мыши

18.7K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/52805

⸱

17 июня 2015 г.

 ,  ,  ,  , 
1Department of Pathology and Cell Biology, Columbia University Medical Center, 2The Taub Institute for Research on Alzheimer's Disease and the Aging Brain, Columbia University Medical Center, 3Department of Neurology, Columbia University Medical Center

В этой статье

Краткое содержание

Здесь мы представляем протокол для прямого стереотаксического вливания бета-амилоида в мозг. Эта методология представляет собой альтернативную мышиную модель in vivo для рассмотрения краткосрочных эффектов бета-амилоида на нейроны мозга.

Аннотация

Болезнь Альцгеймера является нейродегенеративных заболевание, поражающее старения населения. Ключ невропатологических признаком болезни является чрезмерно производство бета-амилоида и отложение бета-амилоида бляшек в мозге регионах пострадавших лиц. На протяжении многих лет ученые генерируется многочисленные модели болезни Альцгеймера мыши заболевание, которые пытаются повторить бета-амилоида патологии. К сожалению, мышиные модели только выборочно имитировать функции болезни. Гибель нейронов, выраженный эффект в мозге пациентов с болезнью Альцгеймера, заметно не хватает в этих мышей. Следовательно, мы и другие использовали метод непосредственно вливая растворимые олигомерные видов бета-амилоида - формы бета-амилоида, которые были доказаны, чтобы быть наиболее токсичным для нейронов - стереотаксически в мозг. В этом докладе мы используем мужчин C57BL / 6J к документу это хирургическая методика увеличения бета-амилоида уровней в избранной области мозга.Вливание цель зубчатой ​​извилине гиппокампа, поскольку эта структура мозга, а также в базальных отделах переднего мозга, который соединен с холинергической цепи, представляет собой одну из областей дегенерации в болезни. Результаты повышения амилоида-бета в зубчатой ​​извилине через стереотаксической инфузии выявить увеличение потерь нейронов в зубчатой ​​извилине в течение 1 недели, в то время как есть сопутствующее увеличение гибели клеток и потере нейронов холинергической в ​​вертикальном конечности диагональной полосы Брока в базальных отделах переднего мозга. Эти эффекты наблюдаются до 2 недель. Наши данные показывают, что нынешний настой модель амилоида-бета обеспечивает альтернативную модель мыши для решения конкретной региона гибель нейронов в краткосрочной перспективе. Преимущество этой модели является то, что амилоид-бета может быть повышен в пространственной и временной основе.

Введение

Амилоида бляшек депозиты, которые состоят из бета-амилоида (Ар 1-42), являются ключевой особенностью патологии болезни Альцгеймера (AD). Многочисленные исследования показали, что высокие уровни токсичных или рекомбинантных олигомерные Ар 1-42 вызывают гибель нейронов, синаптическую дистрофия, потеря и дисфункции; а также обучения и памяти дефицита 1-4. Мозговые регионы, пострадавшие включают гиппокамп, кору, подкорковые структуры и такие, как базальных отделах переднего мозга и миндалины 5,6. На сегодняшний день существует несколько трансгенных моделей мыши, которые пытаются имитировать Ар 1-42 патологии эры. В зависимости от штамма эти животные оказаться полезным при рассмотрении выберите патологические особенности AD. К сожалению, за исключением 2 трансгенных линий, APP23 и 5XFAD, эти мыши не полностью повторить потерю нейронов, ключевой аспект нашей эры. Даже с потерей нервных наблюдается в APP23 и 5XFAD, гибель нейронов obserВЭД был тонкий, возраст зависит и изолированные на несколько отдельных регионах 7,8.

Прямое впрыскивание олигомерного Ар 1-42 в дикого типа мозга мыши обеспечивает превосходное в естественных условиях модели, которая повторяет гибель нейронов аспект amyloidopathy 1,9,10. В отличие от обычно используемых трансгенных мышах олигомерные Ар 1-42 настой модель идеально подходит для остро повышения Ар 1-42 уровней в пространственном и временном порядке. Преимущество использования мышей дикого типа для этой модели устраняет потенциальные компенсационные или побочные эффекты от мутаций, введенных в трансгенных линий мышей. Проведенные исследования показали, что вливание токсические уровни Ар 1-42 в гиппокампе вызывает гибель нейронов в непосредственной близости от места инъекции в течение 1 недели 1. Кроме того, в соответствии с наблюдением, что Ар 1-42 является токсичным для холинергических нейронов базального 11 переднего мозгахолинергические нейроны (BFCN) населения, который выступает в гиппокампе уменьшается на 20-50% в течение 7-14 дней после бета-амилоида инфузии 1,10 у мышей, позволяющий эффективно для экзаменов изолированной нейронной цепи в мозге. Так проекта BFCN ипсилатерально к зубчатой ​​извилине гиппокампа 12, по большей части управления / автомобиля и олигомерных Ар 1-42 решения могут быть введены по обе стороны мозга, позволяющей проводить сравнения между левым и правым полушариями 1.

В этом докладе мы будем предоставлять подробную хирургического и инъекции методологии взрослых дикого типа C57BL / 6J. Этот штамм мыши выбрана потому, что его широкого использования в научных исследованиях. Технически, любая область мозга могут быть направлены для инфузий, однако здесь мы будем использовать зубчатой ​​извилине гиппокампа в качестве цели для иллюстрации технику.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Примечание: Для всех экспериментов на животных, последовали институциональные и национальные руководящие принципы по уходу и использованию лабораторных животных.

1. Подготовьте Хирургические инструменты и решения для хирургии

  1. Автоклав из нержавеющей стали хирургических инструментов.
  2. Подготовка 70% этанола путем разбавления 200 доказательство абсолютного этанола стерильной молекулярная класса деионизированной дистиллированной воды.
  3. Прикрепите 29 G иглу шприца Гамильтона. Очистите внутреннюю Гамильтон шприца и иглы путем составления и извлечение наночистой воды неоднократно в течение 1 мин. Повторите эту процедуру с 70% этанола.
    1. Извлекают поршень и иглу от шприца Гамильтона. Воздух сухой части в капюшоне O / N ламинарного потока.
    2. Облучать иглу и шприц с ультрафиолетовым светом в течение 30 мин перед использованием.
  4. Приготовьте солевой раствор путем растворения NaCl в воде молекулярной класса до конечного веса с объемной концентрацией 0,9%. СтерилизационныеZE решение по фильтрации через 0,2 мкм поры фильтра.

2. Подготовьте олигомерных A & beta 1-42

  1. Monomerize и ресуспендируйте рекомбинантный человеческий Ар 1-42 в ДМСО до 5 мМ в точности, как описано в публикации Фа »и другие 13.
  2. Развести 5 мМ Ар 1-42 стерильной (1x) PBS до 100 мкм в день до операции.
  3. Смешайте раствор хорошо растиранием.
  4. Выдержите Ар 1-42 решение в течение 12 ч при 4 °.
    Примечание: Контрольные растворы, такие как разбавление ДМСО в PBS или омлет / назад Ар 1-42 пептида должны быть подготовлены так же, как Ар 1-42.

3. Определить инъекций Координаты

  1. Используйте мышь для взрослых атлас мозга, чтобы определить точное передне-задней (AP), медиальная-боковой (ML), и спинной-вентральной (DV), координаты области мозга интерес 14.
    НетTe: Чтобы проиллюстрировать технику мы выбрали зубчатой ​​извилине гиппокампа в качестве цели с координатами от темени: AP, -2.00 мм; Л., ± 1,3 мм; Д.В., -2,2 мм. Отрицательный знак перед значение AP указывает, что это 2,00 мм кзади от темени. ± знак перед значение ML указывает левую и правую направление от центра. Наконец, отрицательный знак, предшествующий DV указывает на то, вентрально движется от поверхности мозга.

4. стереотаксическая рамка установки

  1. Носите хирургическую маску, чистый халат и стерильные хирургические перчатки.
  2. Протрите стереотаксической инструмент и адаптер мыши с 70% этанола.
  3. Лягте стерильную хирургическую драпировка на прилавке.
  4. Поместите стереотаксической инструмент с адаптером мыши на верхней части стерильной хирургической простыне.
  5. Протрите мыши грелку с 70% этанола. Расположите грелку над стереотаксической рамы кровати. Используйте LABORA общего назначенияТори маркировочной лентой на ленту вниз грелку над адаптера мыши постели.
    1. Прикрепите грелку теплой воды рециркулятора насоса в соответствии с инструкциями изготовителя.
    2. Включите теплой воды рециркулятора насоса и установите температуру до 37 ° С, а затем ждать, пока он не достигнет температуры.
  6. Прикрепите 50 мкл Hamilton шприца с иглой 29 G на стереотаксической рамы путем завинчивания ее на моторизованной вертикальной инъекционного вала в соответствии с инструкциями изготовителя.
  7. Включите борта стерилизатора и подождите, пока он не достигнет заданной температуры производителя.
    Примечание: Эта функция используется для стерилизации инструментов из нержавеющей стали между животными. Это займет аппаратур 20 сек контакта с бисером для стерилизации.
  8. Включите горячей плите и установить его на 42 ° C и поместите чистый пустой клетке на вершине.
  9. В то время как шприц Гамильтона закреплен на стереотаксической рамы использовать моторизованный стереотаксической Injector составить 1-42 решение Ар.
    Примечание: рисовать более 4 мкл раствора в шприц, а затем использовать стереотаксической инжектор, чтобы установить громкость инъекционным. Используйте инжектор в соответствии с инструкциями изготовителя.

5. Подготовка животных

  1. Определите вес мыши с помощью шкалы взвесить.
  2. Обезболить мышь с кетамином / ксилазина коктейль в дозе 100 мг / кг кетамина и 10 мг / кг ксилазина путем инъекции внутрибрюшинно (IP). Монитор глубины наркоза потерей пальца щепоткой рефлекса.
  3. После мышь седативные взять машинку для стрижки волос и бритья ее голову подвергать кожу над черепом.
  4. Место мыши на верхней части грелку на верхней части стереотаксической кровати.
  5. Используйте лопаточку, чтобы открыть рот и поместите резцов внутри зубов охраны. Закрепите насадку для носа на лице мыши. Зажмите ее мягко и не слишком туго.
  6. Позитивция двусторонних ригели уха в слуховой проход, чтобы обеспечить голову. Перемещение каждого перекладину, пока она не достигнет череп, а затем поверните винт, чтобы зафиксировать ее.
    1. Чтобы убедиться, что головка закреплена использовать свой указательный палец, чтобы мягко надавите на голову. Если голова надежно закреплены не будет выдавать или переместить при нажатии.
  7. Нанесите каплю крема для глаз или глазные капли для глаз, чтобы держать их влажными. Убедитесь, что глаза влажные всей операции.
  8. Для дезинфекции хирургического сайта используйте стерильные ватные тампоны, чтобы применить бетадин решение кожи над черепом, с последующим 70% этанола. Выполните переменного бетадин и 70% этанола очистки еще 2 раза.

6. Настой хирургии и

  1. Используйте скальпель, чтобы сделать 2-3 мм разрез в средней линии головы, а затем использовать прямые тонкие ножницы, чтобы продлить разрез линии 1,0-1,5 см, чтобы разоблачить сагиттального шва, брегмы и лямбда черепа, ориентирс которым стереотаксической координаты на основе. Используйте микро зажимы, чтобы сохранить кожу друг от друга.
    Примечание: брегмы и лямбда позиции объясняется в мозг мыши атласа "мозг мыши в стереотаксической Координаты" 14.
  2. Возьмите ватный тампон, смочите его в стерильном физиологическом растворе, и использовать его для очистки череп. Затем, используя чистую сухую ватный тампон, чтобы высушить череп.
  3. Используйте стерильную порядке ручкой, чтобы отметить точку на темени. Использование стереотаксической микроманипулятора в положение шприца Гамильтона, так что кончик иглы не коснется точку на темени.
    1. Запишите Д.В. координат.
    2. Чтобы проверить, если ось AP черепа уровень перемещения шприца Hamilton кзади так, чтобы кончик иглы прикасается точку лямбда.
    3. Запишите положение DV. Убедитесь, что Д. координаты брегмы и лямбда находятся в 0,5 мм.
      Примечание: цель свести к минимуму разницу между DV брегмы и лямбда.
  4. Используй ихicromanipulator вернуть кончик иглы шприца Hamilton обратно в темя точкой.
  5. Запишите исходное положение AP.
  6. Рассчитать конечное положение AP путем вычитания 2,00 мм от исходного AP координат.
  7. Используйте микроманипулятор, чтобы переместить иглу шприца Hamilton в конечном AP координат.
  8. Запишите текущий ML координат.
  9. Рассчитать левый и правый конец ML координат путем сложения или вычитания 1,3 мм от начала ML координат.
  10. Используйте микроманипулятор переместить иглу шприца Hamilton либо координации заканчивая мл.
    1. Сенсорный кончике иглы к поверхности черепа по обе заканчивающиеся координат ОД и записывать координаты DV и убедитесь, что значения находятся в пределах 0,5 мм.
      Примечание: Цель состоит в том, чтобы свести к минимуму разницу в DV между ними, заканчивающийся ML координат.
    2. В то время как в концовке координации вытащить иглу 0,5-1 см по черепу. Возьмите стерильную порядке ручкой, чтобы отметить точку на гое поверхность черепа. Повторите этот шаг для противоположной стороны черепа.
  11. Качели Гамильтона шприц ясный из пути.
  12. Прикрепите 0,8 мм бурильную головку к тренировкам. Возьмите сверло с обеими руками, установите локти на поверхность стола для стабильности, и положение буровой головки немного выше шулер точка на Ваш влево или вправо ML координат. Активируйте дрель, снизить кончик сверла на поверхности черепа ввести отверстие в черепе. Повторите этот шаг для противоположной стороны.
    Примечание: Некоторые кровотечение может возникнуть из вновь введенных дырок. Если есть кровотечение, то используйте чистую сухим ватным тампоном, чтобы приложить кровь.
  13. Перемещение шприц Hamilton назад в положение над любой из вновь введенных отверстия мл. Опустите иглу Гамильтона просто мимо черепа. В этот момент будьте осторожны, чтобы не проколоть мозг. Чтобы убедиться, что игла прошла череп принять ваш указательный палец и аккуратно толкать иглу против черепа, чтобы сюре игла не выйти из отверстия.
  14. Запишите начиная Д.В. координат.
  15. Рассчитать заканчивая Д.В. координат путем вычитания 2,2 мм от исходного DV координат.
  16. Опустите иглу вниз в финале DV координат.
  17. Активация стереотаксической насос-форсунка к насосу 4 мкл Ар 1-42 в зубчатой ​​извилине в размере 0,5 мкл / мин.
  18. При инфузии завершения позволить иглы остаются на месте в течение дополнительного 1 мин, чтобы свести к минимуму обратного потока раствора из места инъекции.
  19. Перемещение иглы на другую сторону мозга и повторите шаги 6.13-6.18.

7. Животное Снятие и Послеоперационный

  1. Отвинтите уха баров и лицом / нос охранник. Отключив мышь от аппарата.
  2. Используйте студенческие стандартная схема щипцы, чтобы вытащить закрыть головы, а затем запечатать рану швом.
  3. Вводите 1 мл стерильного физиологического раствора в мыши через IP для гидратации.
  4. ВJect бупренорфин (0,1 мг / кг) подкожно, чтобы облегчить боль.
  5. Поддерживать мыши в пустую клетку чистой установленной на вершине 42 ° C плитке до тех пор, пока проснется, то вернуть его в клетку жилья с достаточным пищи и воды.
  6. Администрирование бупренорфин помощью подкожной инъекции каждые 12 ч в течение 3 дней для облегчения боли.

8. Шовный удаления

  1. Обезболить мышь с кетамином / ксилазина коктейль в 100 мг / кг кетамина и 10 мг / кг xlyazine по IP. Примечание: Это делается через 7-10 дней после операции.
  2. Используйте студенческие стандартная схема щипцы и прямо тонких ножниц для удаления шва.
  3. Вводите 1 мл стерильного физиологического раствора в мыши через IP для гидратации.
  4. Поддерживать мыши в чистом пустую клетку установленной на вершине 42 ° C плитке до тех пор, пока проснется, а затем вернуть его в клетку жилья с достаточным пищи и воды.

9. жертвоприношение животных и тканей Обработка

  1. Обезболить мыши и рerfuse его 4% параформальдегида 15, извлечь мозг, и обрабатывать его для cryosectioning 16.
    Примечание: сроки жертвоприношения животных зависит от экспериментатора. Тем не менее, для наших исследований мы выбрали 7 и 14 дней после операции.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Настоящий способ получения рекомбинантного человеческого олигомерные Ар 1-42 дает растворимые олигомерных частиц, состоящих из мономеров, димеров, тримеров и тетрамеров (фиг.1А). Эти низким молекулярным весом Ар 1-42 видов, но не фибриллы и бляшки, были показаны в многочисленных настройках, наиболее токсичным для нейронов 1,4,9,17-19. Для определения Ар 1-42 индуцирует ли не олигомерные гибель нейронов в мозге мыши Ар 1-42 (4 мкл 100 мкМ раствора) в...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Для достижения успешного Ар 1-42 инъекции экспериментатор или хирург обязан: 1) использовать асептики; 2) правильно определить область мозга, интерес с точными координатами; 3) уметь правильно закрепить мышь в стереотаксической рамы с мозгом сравняли в АР оси и ML; 4) иметь возможность работать микроманипулятора с точностью; 5) обеспечить надлежащее послеоперационный уход. Если эти ключевые шаги будут Мышь должна пережить операцию без видимых инфекции.

В соответствии с в проби...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

Эта работа была поддержана Национальным институтом неврологических расстройств и инсульта предоставить NS081333 (для CMT), Альцгеймера грант Ассоциация NIRG-10-171721 и Национальный институт психического здоровья грантов MH096702 (для UH) и Национальный институт по проблемам старения, финансируемых исследований болезни Альцгеймера Центр Колумбийского университета пилот гранта AG008702 (в YYJ и JB).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Кетамин гидрохлорид (100 мг/мл)Генри Шейн Медикал1049007100 мг кетамина на 1 кг животного
Ксилазин (20 мг/мл)Генри Шейн Медикалнедоступен10 мг ксилазин на 1 кг животного
Бупренекс (0,3 мг/мл)Генри Шейн Медикал12177930,1 мг бупренекса на 1 кг животного
А и бета; 1-42David Teplow/UCLAнедоступен100 μ M; Этот амилоид был использован в статье
Aβ 1-42BachemH-1368Может быть использован вместо амилоида из лаборатории Teplow
Aβ 1-42American Peptide62-0-80BМожет использоваться вместо амилоида из лаборатории Teplow
Scrambled Aβ 1-42American Peptide62-0-46BМожет быть использован в качестве контрольного пептида для сравнения Aβ 1-42
NU4 Антитело (олигомерное амилоидное антитело)Подарок от Уильяма Кляйна/Северо-Западный университетнедоступно1:2,000 разведение
Антиамилоидное олигомерное антитело  (Поликлональный кролик)EMD MilliporeAB9234может быть использован вместо Nu4; должен быть протестирован конечным пользователем
Антитело 6E10 (Моноклональная мышь) (Антитело к амилоидуBiolegendsig-39320в разведении 1:1,000
(Поликлональный козий)MilliporeAB144PРазведение в соотношении 1:100
Тупиковая флуориметрическая система TUNEL PromegaG3250Следуйте инструкциям производителя для
использовать реагент Prolong Gold Antifade с DAPIInvitrogenP36935Использовать при скольжении слайдов
FluorogoldFluorochrome, LLCнедоступен2% раствор
Абсолютный этанол (200 пруф)Fisher ScientificBP2818-4Для изготовления 70% этанола для санитарной обработки и дезинфекции
Novex 10-20% гель TricineLife TechnologiesEC6625BOXДля разделения Aβ 1-42
Novex Tricine SDS Running Buffer (10X)Life TechnologiesLC1675Для 10-20% трициновых гелей
Novex Tris-Glycine Transfer Buffer (25X)Life TechnologiesLC3675Для переноса 10-20% трициновых гелей
SuperSignal Western Blot EnhancerThermo Scientific46640Для усиления Aβ сигнал 1-42; следуйте протоколу производителя
Protran BA79 Nitrocellulose Blotting Membrane, 0,1 μ mGE Healthcare LifeSciences 10402088Для переноса 10-20% трициновых гелей
Xcell SureLock Mini-CellLife TechnologiesEI0001Электрофорез аппаратус для запуска 10-20% трициновых гелей
GenTeal Lubricant Eye GelNovartisнедоступенДля поддержания влажности глаз мыши во время операции; можно найти в местных аптеках
 
[header]
Refresh Optive Lubricant Eye DropsAllerganнедоступноДля поддержания влажности глаз мыши во время операции; можно найти в местных аптеках; Может использоваться вместо GenTeal
BetadineStoelting50998Для дезинфекции и дезинфекции
круглых/конических шпателей VWR82027-490Для открывания пасти животного
Bulldog Serrefines Clamps (Div Dims. 9X1,6 мм; Длина 28 мм)Инструменты для тонкой науки18050-28Опционально; Для разведения кожи головы во время инъекций
Прямые тонкие ножницы (режущая кромка 25 мм; Длина 11,5 см)Инструменты Fine Science14060-11Для разрезания кожи головы
#3 Ручка скальпеляFine Science Tools10003-12
#11 Хирургическое лезвиеFine Science Tools10011-00Для разреза кожи головы
Студенческий щипцы стандартного образца (Tip Dims. 2,5x1,5 мм; Длина 11,5 см)Fine Science Tools91100-12Для удержания кожи головы закрытой во время наложения швов
Триммер Combo KitKent ScientificCL9990-1201Для бритья волос
T/Pump Рециркулятор теплой воды Кент Научный TP-700Для согревания животного во время операции
Resusable Warmining Pad (5" x 10")Kent Scientific TPZ-0510FEAДля крепления его к рециркулятору теплой воды T/Pump для обогрева животного во время операции
Аккумуляторная микродрельStoelting58610Используйте стальные жерновы 0,8 мм для сверления отверстий в черепе
Лабораторный стандартный стереотаксический инструмент с мышью и Неонатальный адаптер для крысStoelting51615
Только для мыши Стереотаксический инструментStoelting51730Можно использовать это вместо Stoelting Cat. #51615
Квинтэссенция стереотаксического инъектораStoelting53311
Стерилизатор сухих стеклянных шариковStoelting50287Для стерилизации инструментов из нержавеющей стали
Стерильная хирургическая простыня (18" x 26")Stoelting50981
Шприц Hamilton 50 мл, модель 705 RN SYR, NDLHamilton Company7637-01Для инъекций в мозг; используйте разные шприцы для разных растворов
29 G Игла, Small Hub RN NDLHamilton Company7803-06Для крепления к шприцу Hamilton для инъекции в мозг
1 мл BD Tuberculin ШприцыVWRBD309659Для введения анестезии и физиологического раствора
30 G Игла (0,5 дюйма)VWRBD305106Для введения анестезии и физраствора
Портативные электронные весы серии CS (Ohaus)VWR65500-202Для взвешивания животных для определения дозы анестезии
Горячая пластина (Верхняя пластина Dims. 7,25x7,25 дюйма)VWR47751-148Для согревания животных после операции
Sofsilk Silk Шовный материал C-1 Резка 3/8, 12 ммCovidienS1173Для закрытия раны
Vetbond Tissue Adhesive (3M)Santa Cruz Biotechnologysc-361931Опционально: для помощи в закрытии раны; Используйте со швом.
Стерильные аппликаторы с хлопчатобумажным наконечникомFisher scientific22-029-488Для очистки и сушки хирургических ран
Fisherbrand Superfrost Plus Микроскопические слайдыFisher Scientific 12-550-15Для сбора срезов мозга
VWR Micro Cover Glass 24 X 50 ммVWR48393241Для монтажа микроскопических стекол
Thermo Scientific Nalgene Шприц Filter 0,2 μ mFisher Scientific194-2520Для стерилизации физиологического раствора
Стерильные маркеры кожи с двойным наконечником от Viscot MedicalMedlineVIS1422SRL91Для маркировки координат на черепе
) Антитело к ChAT

Ссылки

  1. Baleriola, J., et al. Axonally Synthesized ATF4 Transmits a Neurodegenerative Signal across Brain Regions. Cell. 158 (5), 1159-1172 (2014).
  2. Haass, C., Selkoe, D. J. Soluble protein oligomers in neurodegeneration: lessons from the Alzheimer's amyloid beta-peptide. Nature reviews. Molecular cell biology. 8 (2), 101-112 (2007).
  3. Knowles, J. K., et al. The p75 neurotrophin receptor promotes amyloid-beta(1-42)-induced neuritic dystrophy in vitro and in vivo. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 29 (34), 10627-10637 (2009).
  4. Troy, C. M., et al. beta-Amyloid-induced neuronal apoptosis requires c-Jun N-terminal kinase activation. Journal of neurochemistry. 77 (1), 157-164 (2001).
  5. Crews, L., Rockenstein, E., Masliah, E. APP transgenic modeling of Alzheimer's disease: mechanisms of neurodegeneration and aberrant neurogenesis. Brain structure & function. 214 (2-3), 111-126 (2010).
  6. Gotz, J., Ittner, L. M. Animal models of Alzheimer's disease and frontotemporal dementia. Nature reviews. Neuroscience. 9 (7), 532-544 (2008).
  7. Calhoun, M. E., et al. Neuron loss in APP transgenic mice. Nature. 395 (6704), 755-756 (1998).
  8. Oakley, H., et al. Intraneuronal beta-amyloid aggregates, neurodegeneration, and neuron loss in transgenic mice with five familial Alzheimer's disease mutations: potential factors in amyloid plaque formation. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 26 (40), 10129-10140 (2006).
  9. Jean, Y. Y., et al. Caspase-2 is essential for c-Jun transcriptional activation and Bim induction in neuron death. The Biochemical journal. 455 (1), 15-25 (2013).
  10. Sotthibundhu, A., et al. Beta-amyloid(1-42) induces neuronal death through the p75 neurotrophin receptor. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 28 (15), 3941-3946 (2008).
  11. Kar, S., Quirion, R. Amyloid beta peptides and central cholinergic neurons: functional interrelationship and relevance to Alzheimer's disease pathology. Progress in brain research. 145, 261-274 (2004).
  12. Leranth, C., Frotscher, M. Organization of the septal region in the rat brain: cholinergic-GABAergic interconnections and the termination of hippocampo-septal fibers. The Journal of comparative neurology. 289 (2), 304-314 (1989).
  13. Fa, M., et al. Preparation of oligomeric beta-amyloid 1-42 and induction of synaptic plasticity impairment on hippocampal slices. Journal of visualized experiments : JoVE. (41), (2010).
  14. Paxinos, G., Franklin, K. B. J. The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , Second edn, Academic Press. (2001).
  15. Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. Whole animal perfusion fixation for rodents. Journal of visualized experiments : JoVE. (65), (2012).
  16. Currle, D. S., Monuki, E. S. Flash freezing and cryosectioning E12.5 mouse brain. Journal of visualized experiments : JoVE. (4), (2007).
  17. Jin, M., et al. Soluble amyloid beta-protein dimers isolated from Alzheimer cortex directly induce Tau hyperphosphorylation and neuritic degeneration. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (14), 5819-5824 (2011).
  18. Lambert, M. P., et al. Diffusible, nonfibrillar ligands derived from Abeta1-42 are potent central nervous system neurotoxins. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 95 (11), 6448-6453 (1998).
  19. Masters, C. L., Selkoe, D. J. Biochemistry of amyloid beta-protein and amyloid deposits in Alzheimer disease. Cold Spring Harbor perspectives in medicine. 2 (6), a006262(2012).
  20. Chakrabarti, M., et al. Estrogen receptor agonists for attenuation of neuroinflammation and neurodegeneration. Brain research bulletin. 109C, 22-31 (2014).
  21. Cirrito, J. R., et al. In vivo assessment of brain interstitial fluid with microdialysis reveals plaque-associated changes in amyloid-beta metabolism and half-life. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 23 (26), 8844-8853 (2003).
  22. Puzzo, D., et al. Picomolar amyloid-beta positively modulates synaptic plasticity and memory in hippocampus. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 28 (53), 14537-14545 (2008).
  23. Puzzo, D., et al. Endogenous amyloid-beta is necessary for hippocampal synaptic plasticity and memory. Annals of. 69 (5), 819-830 (2011).
  24. Akpan, N., et al. Intranasal delivery of caspase-9 inhibitor reduces caspase-6-dependent axon/neuron loss and improves neurological function after stroke. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 31 (24), 8894-8904 (2011).
  25. Fulmer, C. G., et al. Astrocyte-derived BDNF supports myelin protein synthesis after cuprizone-induced demyelination. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 34 (24), 8186-8196 (2014).
  26. Thakker-Varia, S., et al. The neuropeptide VGF is reduced in human bipolar postmortem brain and contributes to some of the behavioral and molecular effects of lithium. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 30 (28), 9368-9380 (2010).
  27. Greferath, U., et al. Enlarged cholinergic forebrain neurons and improved spatial learning in p75 knockout mice. The European journal of neuroscience. 12 (3), 885-893 (2000).
  28. Brashear, H. R., Zaborszky, L., Heimer, L. Distribution of GABAergic and cholinergic neurons in the rat diagonal band. Neuroscience. 17 (2), 439-451 (1986).
  29. Clarke, D. J. Cholinergic innervation of the rat dentate gyrus: an immunocytochemical and electron microscopical study. Brain research. 360 (1-2), 349-354 (1985).
  30. Garcia-Osta, A., Alberini, C. M. Amyloid beta mediates memory formation. Learning & memory. 16 (4), 267-272 (2009).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Стереотаксическая Настой олигомерных бета-амилоида в гиппокампе мыши
Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.