Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Хлорного железа, вызванной Тромбоз мышь Модель на сонной артерии и брыжейки судна

18.6K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/52838

⸱

29 июня 2015 г.

 , 
1Vascular Biotechnology Laboratory, Baker IDI Heart and Diabetes Institute

В этой статье

Краткое содержание

Здесь описана модель индуцированного FeCl3 тромбоза у мышей. Представлен метод мониторинга роста тромба с помощью прижизненной микроскопии на брыжеечном сосуде и измерения кровотока в сонной артерии.

Аннотация

Тяжелый тромбоз и его ишемические последствия, такие как инфаркт миокарда, тромбоэмболия легочной артерии и инсульт, являются основными проблемами здравоохранения во всем мире. Повреждение хлоридом железа в настоящее время является хорошо зарекомендовавшим себя методом, позволяющим быстро и точно вызвать образование тромбов в открытых венах или артериях малого и большого диаметра. Эта модель сыграла ключевую роль в изучении патофизиологии тромбоза, в открытии и валидации новых антитромботических препаратов и в понимании механизма действия этих новых агентов. Здесь представлена реализация данной методики на брыжеечном сосуде и сонной артерии у мышей. Метод описывает, как мечить циркулирующие лейкоциты и тромбоциты флуоресцентным красителем и наблюдать с помощью прижизненной микроскопии на подвергшейся брыжейке их накопление на поврежденной стенке сосуда, что приводит к образованию тромба. На сонной артерии окклюзия, вызванная образованием тромба, измеряется путем мониторинга кровотока с помощью допплеровского зонда.

Введение

Изучение механизмов, участвующих в развитии тромбоза и оценки эффективности антитромботических лекарств требует хорошо известны экспериментальные животные модели. Большие модели на животных были первыми, чтобы быть использованы, поскольку они обеспечивают большие сосуды больше похож на человека, чем грызунов 1. Тем не менее, высокая стоимость, большие объекты, необходимые и трудность в манипулировании их генетически являются основными недостатками в их использовании и крупные животные в настоящее время ограничивается конце доклинических исследований сразу предварительные испытания на грызунах дали убедительных результатов 2. С широкой доступности трансгенных и нокаут штаммов и их небольшого размера, что минимизирует количество антитромбоцитарных препаратов, необходимых для тестирования в естественных условиях, мыши используются в основном для тромбоза исследований. Таким образом, несколько моделей тромботических заболеваний были разработаны в мышей 3.

Многие установленные модели тромбоза нарушить интимслой стенки сосуда, с последующим воздействием на суб эндотелиальной внеклеточного матрикса в кровоток индуцировать образование тромбов 4. Тромбы могут возникнуть в результате воздействия коллагена, который вызывает активацию тромбоцитов и / или от воздействия тканевого фактора, который активирует каскад коагуляции 5. Некоторые методы которые затем используют для достижения первоначальной травмы сосудов. Pierangeli др. Разработали механическую модель с разрывом микрохирургии инструмента на бедренную вену 6. Kikushi др. Описал модель, которая состоит в управлении фотографией реактивной соединения (бенгалроза), который накапливается в липидный бислой эндотелиальных клеток с последующим конкретной возбуждения стенки сосуда интересов с зеленым светом (540 нм) 7. Травма может также быть вызвано короткого высокоинтенсивного импульса лазерного излучения 8. Другой метод, во-первых создана на сонной артерии крыссостоит в местном применении хлорида железа (FeCl 3) 9. В этом случае результаты судно денудационные от свободных радикалов, генерируемых FeCl 3, который вызывает перекисное окисление липидов и разрушение эндотелиальных клеток 10. Травма индуцирует экспрессию нескольких молекул адгезии, вызывающих адгезию тромбоцитов и агрегацию, а также лейкоцитов набора. Было показано, что лейкоциты, в частности, нейтрофилы, играют решающую роль в активации каскада свертывания крови, ведущего к тромбозу 11. Этот метод хорошо подходит для воспроизведения каскад коагуляции; Следователи должны иметь в виду, что в этой модели мыши, тромбоз обычно возникает у здоровых сосудов, тогда как тромбоз у человека в основном происходит в больном например. атеросклеротические сосуды.

В этой модели очень прост в реализации и также эффективен у мышей, то теперь в основном используется режим тромбозл для маленького животного в естественных условиях исследования. Кроме того, этот метод дает возможность индуцировать образование тромбов в различных сосудах. Целевые суда могут быть артерий или вен большого диаметра (сонной, бедренной, кава) или малого диаметра (брыжейки, кремастер) 12-14. Совсем недавно, он был также использован на проксимальной средней мозговой артерии разработать модель инсульта 15. Формирование тромбоза может быть непосредственно наблюдается прижизненной микроскопии после флуоресцентного мечения тромбоцитов и лейкоцитов или контролируется путем измерения уменьшение кровотока с датчиком температуры или доплеровского зонда 12,16,17. Некоторые параметры, такие как время окклюзии, время образования тромба или размера тромба может быть исследована. Физиологические различия между судами исследованы привести к значительным изменениям в тромбов, полученного. Таким образом, исследователи, как правило, выбор целевого сосуда в соответствии с параметрами, которые они хотят measuвновь и / или болезнь установки они хотят, чтобы исследовать. Как правило, модели на сонной артерии является более актуальным для исследования атеротромбоза, связанного с инфарктом миокарда или инсульта в то время как исследования по полой вены являются более актуальными для исследования глубокого венозного тромбоза. Доступность различных сосудов также определяет метод, используемый для измерения роста тромба. Например, мезентериальные сосуды легко получить доступ делает эта модель хорошо подходит для прижизненной микроскопом и исследования динамики формирования тромба. Сонной артерии менее доступен, но больше, позволяющие измерения кровотока и обеспечивают отличную модель для изучения окклюзионной тромбоз.

Хлорид железа индуцированных тромбоза модель обеспечила огромный прогресс в понимании этой патологии. Он был использован во многих исследованиях, посвященных роли фактора Виллебранда в формировании тромбоза 18,19. В сочетании с генетической модусовметоды фикации, это позволило выявить многие специфического гена, участвующего в тромботических нарушений. Ламрани др. Например, показали, что стук в гена JAK2 V617F связано с ускоряющим образование неустойчивых сгустка 20. Чжан и др. Исследовали физиологические последствия рецептора тромбоцитов P2Y12 и показали, что трансгенные мыши, избыточно специально этот рецептор тромбоцитов только отображается более быстрое и стабильное образование тромбов в брыжеечной артерии травмированного с FeCl 3 21. Решающая роль тканевого типа активатор плазминогена (ТАП) и урокиназы типа активатора плазминогена (УАП) в процессе деградации фибрина также были исследованы в этом методе 22. Кроме того эта модель также обеспечивает простой и точный способ проверки фибринолитической потенциала многих новых препаратов в естественных условиях. Например, Ван и др. Использовали эту модель для гое доклинические проверка нового рекомбинантного активатора плазминогена, направленные против активированных тромбоцитов 23. Этот метод также включен проверку терапевтических белков, выделенных из слюнных клещей, летучих мышей-вампиров, и комаров или из яда змей с конкретной идентификации цели 24-27. Эти примеры показывают универсальность железа хлорида модели. В этой статье мы сосредоточимся на двух методов и изучения железа хлорида индуцированного тромбоза в двух различных типов судов; брыжеечных сосудов и сонная артерия.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все эксперименты с участием животных были утверждены Альфреда медицинских исследований и образования участковой комитета по этике животных (E / 1534/2015 / B). Все хирургические манипуляции проводились под общим наркозом, и животные не испытывали боли на любом этапе. Все эксперименты, описанные не являются восстановление.

1. Подготовка

  1. Вырезать тонкие полосы фильтровальной бумаги (1 х 2 мм).
  2. Свежий подготовить 2 растворы хлорида железа, 4% (вес / объем) и 6% (вес / объем) разводили в деионизированной воде. Подготовьте родамин 6G Solution 0,3% в PBS, фильтруют через 0,22 мкм.
  3. Вырезать небольшой кусок (5 мм х 1 см) от белого пластика шприца обертку.

2. Брыжейка артериол Тромб Формирование наблюдали Прижизненное микроскопии

  1. Весить 10-12 недель самцов C57BL / 6 дикого типа мышь и анестезию, соответственно смесью кетамина (100 мг / кг) и ксилазина (10 мг / кг), хотя внутрибрюшинной инъекции, Монитор глубины анестезии ответ на носок, хвост и / или щепоткой кожи, реактивности от роговицы и глазных крайнем случае, и отсутствие движения усов. При необходимости ввести вторую дозу кетамина (50 мг / кг), чтобы поддерживать анестезию животного. Применить ветеринар мазь на глаз, чтобы предотвратить сухость под наркозом. Место мыши в небольшую чашку Петри помещают на грелку доводили до 37 ° С.
    Примечание: Хотя инъекцией может привести к боли для животных, длительность этого дискомфорта будет минимальным (менее 3 сек). Боль и дискомфорт, связанные с инъекций будут сведены к минимуму за счет использования опытных и компетентных работников и соответствующего размера иглы (25 г). После всех процедур, усыпить всех животных с помощью передозировки кетамина и ксилазина затем путем смещения шейных позвонков.
  2. Выполните брюшной срединный разрез около 3 см в коже и аккуратно вырезать брюшины.
  3. Расположите курсор на стороне домашним животнымри блюдо, осторожно экстериоризоваться свои кишечник и осторожно раскрывайте брыжейки с 2 ватные палочки, чтобы принести подходящее судно на поверхность чашки Петри. Высушите правильно с нежным стеклоочистителя.
    Примечание: Чтобы ограничить движение сосудов брыжейки, Папаверин может быть использовано, чтобы ингибировать кишки перистальтику.
  4. Замочите хвост мыши в теплой воде, чтобы расширить сосуды и ввести 30 мкл родамина 6G (0,3%) в хвостовую вену мыши с 29 G шприца для обозначения лейкоциты и тромбоциты.
  5. Поместите чашку Петри под инвертированным микроскопом и сосредоточиться на выбранной артериол, используя яркий канал поле.
  6. Замачивание полосу фильтровальной бумаги с 6% (вес / объем) хлорида железа (III) и применять фильтровальную бумагу на артериол с двумя щипцами; Первая провести фильтровальную бумагу, вторая осторожно прижмите его к сфере интересов. Заметим, образование тромба в первые 10 сек после осаждения из фильтровальной бумаги.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Это довольно коммна травмировать окруженный микроциркуляторного русла и точность осаждения фильтровальной бумаги и аккуратно давлением Поэтому важно, чтобы ограничить эту проблему.
  7. Заметим, образование тромба с помощью флуоресцентной микроскопии (TRITC канала: пикового возбуждения 557 нм, пик излучения 576 нм), через фильтровальную бумагу. Соблюдайте циркулирующих лейкоцитов и тромбоцитов, что взяли на себя родамина 6G и их агрегацию в тромба, поэтому легко идентифицировать.
  8. Возьмите фильтровальную бумагу после 1 мин воздействия хлорида железа (III) и продолжать следить за формирование тромба. Вымойте судно с PBS.
  9. Наблюдайте и запишите динамическое образование тромба выделенного с маркировки тромбоцитов и лейкоцитов с родамина 6G. Захват изображения и измерить размер тромба. В данном документе представлены изображения были получены с перевернутым микроскопом прижизненной, хотя объективно 4X, в флуоресценции канала TRITC.
  10. Following все процедуры, усыпить животное, используя дозу кетамина и ксилазина затем путем смещения шейных позвонков.

3. сонной артерии Тромб Формирование оценивается крови измерения скорости потока

  1. Взвешивание 10-12 недель самцов C57BL / 6 мыши и обезболивания, соответственно смесью кетамина (100 мг / кг) и ксилазина (10 мг / кг), хотя внутрибрюшинной инъекции. Применить ветеринар мазь на глаз, чтобы предотвратить сухость под наркозом.
  2. Закрепить мышь под операционного микроскопа с использованием липкой ленты на ногах, на грелку доводили до 37 ° С.
  3. Сделайте небольшую подушку из одного стеклоочистителя и прикрепить ее под голову мыши, чтобы немного поднять голову. Используйте нить петлю щипцами тянуть морду вниз (используйте верхние зубы). Это будет подвергать область сонной артерии для легкого доступа.
  4. Выполните небольшой 5 мм глубиной разрез кожи прямо под челюстью, до грудины.
  5. Проанализируйте ФаScia и изолировать фрагмент левой или правой общей сонной артерии выше бифуркации.
  6. Осторожно ввести пинцетом в период между артерией и нерва, чтобы отделить их. Не беспокоить нерв работает близко к артерии, не касаясь слишком много сонной артерии, как это может стать причиной повреждения судна. Изолировать сечение не менее 5 мм от артерии.
  7. Сушат площадь артерии должным образом с стеклоочистителей, чтобы избежать какой-либо жидкости, что мешает FeCl 3.
  8. Положите маленький белый пластиковый кусок под изолированной части общей сонной артерии, так что FeCl 3 не замочить в окружающих тканях. Для этой цели использовать второй щипцов, чтобы принести часть к первой затем медленно скользить пластиковую бумагу под артерии.
  9. Кусок фильтровальной бумаги с 4% (вес / объем) или 6% (вес / объем) хлорида железа и поместить все вокруг артерии.
  10. Через 3 мин воздействия, снять бумагу фильтра, промыть PBS и высушите область WIth дворники.
  11. Поместите зонд доплеровского потока вокруг судна в травмированной области и начать запись изменений в потоке. В здоровой общей сонной артерии у взрослых мышей, поток, как правило, около 1 мл / мин. Внимание! контакт зонда с хлоридом железа может повредить зонд так что любой контакт следует избегать. В данном документе представлены данные были получены с помощью измерителя Трансзвуковой System Inc. потока, TS420 периваскулярного модуля, снабженный датчиком потока Доплера Нано 0,5 PBS.
    Примечание: концентрация хлорида железа может изменить кинетику образования тромбов в результате в разное время окклюзии. Таким образом, воздействие на 6% (вес / объем) хлорида железа дает более быстрый, чем окклюзии воздействия до 4% (вес / объем) хлорида железа.
  12. После всех процедур, усыпить всех животных с помощью передозировки кетамина и ксилазина затем путем смещения шейных позвонков и тщательно очистите Доплера зонд.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Люминесцентные прижизненной микроскопии наблюдения брыжейки покажет накопление родамина 6G помечены тромбоциты и лейкоциты вдоль стенки сосуда потерпевшей по FeCl 3. Прогрессивная формирование тромба частичной контролируется в брыжейки судна 200 мкм (рис 1). Тромб постепенно появляется и однозначно определяется после первой минуты воздействия FeCl 3 (рис 1, т = 60 сек). 40 сек после удаления фильтровальной бумаги, пропитанной FeCl 3, тромбоз быстро прогр...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Железа хлорид индуцированных тромбоза модель отлично инструмент исследования. Как показано в этом исследовании, это очень легко реализовать, и при использовании в сочетании с прижизненной микроскопии или доплеровского расходомера, что обеспечивает хорошую мониторинг в реальном времени образования тромбов. Регулировка времени экспозиции и концентрации FeCl 3, он также предлагает возможность производить либо не окклюзионные или окклюзионные тромбы.

Тем не менее, этот способ также им...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить техническую поддержку от Joy Яо и доктора Карен Alt, а также финансирование из NHMRC и НФЗ.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Ватман хроматографическая бумагаGE Healthcare3030917
Хлорид железа (III) 40% (w/v)VWR24212.298
Родамин 6GSigmaR4127
Инвертированный микроскоп OlympusIX81
Цифровая черно-белая камера OlympusXM10
TransonicTS420
Нано-доплеровский зонд расходаTransonic0,5 PBS
КетаминHospira 0409-2051-05
Ксилазин (Рампун)Bayer75313 
Чашка ПетриSarstedt82.1472
Инсулиновый шприц (29 G)BD Ultra-Fine326103
Ватные аппликаторыBSN медицинский211827A
Dynek dysilk шовные материалыDynek Pty LtdCS30100
фосфатный буфер Dulbecco (PBS)Gibco life technologies21600-069
ГрелкаKirchnerT60
Доплеровский расходомер

Ссылки

  1. Leadley, R. J., Chi, L., Rebello, S. S., Gagnon, A. Contribution of in vivo models of thrombosis to the discovery and development of novel antithrombotic agents. J Pharmacol Toxicol Methods. 43 (2), 101-116 (2000).
  2. Johnson, G. J., Griggs, T. R., Badimon, L. The utility of animal models in the preclinical study of interventions to prevent human coronary artery restenosis: analysis and recommendations. On behalf of the Subcommittee on Animal, Cellular and Molecular Models of Thrombosis and Haemostasis of the Scientific and Standardization Committee of the International Society on Thrombosis and Haemostasis. Thromb Haemost. 81 (5), 835-843 (1999).
  3. Day, S. M., Reeve, J. L., Myers, D. D., Fay, W. P. Murine thrombosis models. Thromb Haemost. 92 (3), 486-494 (2004).
  4. Sachs, U. J. H., Nieswandt, B. In vivo thrombus formation in murine models. Circ Res. 100 (7), 979-991 (2007).
  5. Furie, B., Furie, B. C. Mechanisms of thrombus formation. N Engl J Med. 359 (9), 938-949 (2008).
  6. Pierangeli, S. S., Liu, X. W., Barker, J. H., Anderson, G., Harris, E. N. Induction of thrombosis in a mouse model by IgG, IgM and IgA immunoglobulins from patients with the antiphospholipid syndrome. Thromb Haemost. 74 (5), 1361-1367 (1995).
  7. Kikuchi, S., Umemura, K., Kondo, K., Saniabadi, A. R., Nakashima, M. Photochemically induced endothelial injury in the mouse as a screening model for inhibitors of vascular intimal thickening. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 18 (7), 1069-1078 (1998).
  8. Rosen, E. D., Raymond, S., et al. Laser-induced noninvasive vascular injury models in mice generate platelet- and coagulation-dependent thrombi. Am J Pathol. 158, 1613-1622 (2001).
  9. Kurz, K. D., Main, B. W., Sandusky, G. E. Rat model of arterial thrombosis induced by ferric chloride. Thromb Res. 60 (4), 269-280 (1990).
  10. Eckly, A., Hechler, B., et al. Mechanisms underlying FeCl3-induced arterial thrombosis. J Thromb Haemost. 9 (4), 779-789 (2011).
  11. Darbousset, R., et al. Involvement of neutrophils in thrombus formation in living mice. Pathol Biol (Paris). 62 (1), 1-9 (2014).
  12. Denis, C., Methia, N., et al. A mouse model of severe von Willebrand disease: defects in hemostasis and thrombosis). Proc Natl Acad Sci U S A. 95 (16), 9524-9529 (1998).
  13. Wang, X., Hagemeyer, C. E., et al. Novel single-chain antibody-targeted microbubbles for molecular ultrasound imaging of thrombosis: validation of a unique noninvasive method for rapid and sensitive detection of thrombi and monitoring of success or failure of thrombolysis in mice. Circulation. 125 (25), 3117-3126 (2012).
  14. Wang, X., Smith, P. L., Hsu, M. -Y., Ogletree, M. L., Schumacher, W. A. Murine model of ferric chloride-induced vena cava thrombosis: evidence for effect of potato carboxypeptidase inhibitor. J Thromb Haemost. 4 (2), 403-410 (2006).
  15. Karatas, H., Erdener, S. E., et al. Thrombotic distal middle cerebral artery occlusion produced by topical FeCl(3) application: a novel model suitable for intravital microscopy and thrombolysis studies. J Cereb Blood Flow Metab. 31 (6), 1452-1460 (2011).
  16. Jirousková, M., Chereshnev, I., Väänänen, H., Degen, J. L., Coller, B. S. Antibody blockade or mutation of the fibrinogen gamma-chain C-terminus is more effective in inhibiting murine arterial thrombus formation than complete absence of fibrinogen. Blood. 103 (6), 1995-2002 (2004).
  17. Dubois, C., Panicot-Dubois, L., Merrill-Skoloff, G., Furie, B., Furie, B. C. Glycoprotein VI-dependent and -independent pathways of thrombus formation in vivo. Blood. 107 (10), 3902-3906 (2006).
  18. Navarrete, A. -M., Casari, C., et al. A murine model to characterize the antithrombotic effect of molecules targeting human von Willebrand factor. Blood. 120 (13), 2723-2732 (2012).
  19. Rayes, J., Hollestelle, M. J., et al. Mutation and ADAMTS13-dependent modulation of disease severity in a mouse model for von Willebrand disease type 2B. Blood. 115 (23), 4870-4877 (2010).
  20. Lamrani, L., Lacout, C., et al. Hemostatic disorders in a JAK2V617F-driven mouse model of myeloproliferative neoplasm. Blood. 124 (7), 1136-1145 (2014).
  21. Zhang, Y., Ye, J., et al. Increased platelet activation and thrombosis in transgenic mice expressing constitutively active P2Y12. J Thromb Haemost. 10 (10), 2149-2157 (2012).
  22. Schäfer, K., Konstantinides, S., et al. Different mechanisms of increased luminal stenosis after arterial injury in mice deficient for urokinase- or tissue-type plasminogen activator. Circulation. 106 (14), 1847-1852 (2002).
  23. Wang, X., Palasubramaniam, J., et al. Towards effective and safe thrombolysis and thromboprophylaxis: preclinical testing of a novel antibody-targeted recombinant plasminogen activator directed against activated platelets. Circ Res. 114 (7), 1083-1093 (2014).
  24. Decrem, Y., et al. Ir-CPI, a coagulation contact phase inhibitor from the tick Ixodes ricinus, inhibits thrombus formation without impairing hemostasis. J Exp Med. 206 (11), 2381-2395 (2009).
  25. Ma, D., et al. Desmolaris, a novel factor XIa anticoagulant from the salivary gland of the vampire bat (Desmodus rotundus) inhibits inflammation and thrombosis in vivo. Blood. 122 (25), 4094-4106 (2013).
  26. Lei, X., et al. Anfibatide, a novel GPIb complex antagonist, inhibits platelet adhesion and thrombus formation in vitro and in vivo in murine models of thrombosis. Thromb Haemost. 111 (2), 279-289 (2014).
  27. Waisberg, M., et al. Plasmodium falciparum infection induces expression of a mosquito salivary protein (Agaphelin) that targets neutrophil function and inhibits thrombosis without impairing hemostasis. PLoS Pathog. 10 (9), e1004338(2014).
  28. Owens, A. P., Lu, Y., Whinna, H. C., Gachet, C., Fay, W. P., Mackman, N. Towards a standardization of the murine ferric chloride-induced carotid arterial thrombosis model. J Thromb Haemost. 9 (9), 1862-1863 (2011).
  29. Wang, X., Xu, L. An optimized murine model of ferric chloride-induced arterial thrombosis for thrombosis research. Thromb Res. 115 (1-2), 95-100 (2005).
  30. Tseng, M. T., Dozier, A., Haribabu, B., Graham, U. M. Transendothelial migration of ferric ion in FeCl3 injured murine common carotid artery. Thromb Res. 118 (2), 275-280 (2006).
  31. Bonnard, T., et al. Leukocyte mimetic polysaccharide microparticles tracked in vivo on activated endothelium and in abdominal aortic aneurysm. Acta Biomater. 10 (8), 3535-3545 (2014).
  32. Boulaftali, Y., Lamrani, L., et al. The mouse dorsal skinfold chamber as a model for the study of thrombolysis by intravital microscopy. Thromb Haemost. 107 (5), 962-971 (2012).
  33. Konstantinides, S., Schäfer, K., Thinnes, T., Loskutoff, D. J. Plasminogen activator inhibitor-1 and its cofactor vitronectin stabilize arterial thrombi after vascular injury in mice. Circulation. 103 (4), 576-583 (2001).
  34. Li, W., McIntyre, T. M., Silverstein, R. L. Ferric chloride-induced murine carotid arterial injury: A model of redox pathology. Redox Biol. 1 (1), 50-55 (2013).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Тромбозвызванный хлоридом железа (III)интравитальная микроскопиядоплеровский расходомерфлуоресцентное мечениеформирование тромбаизмерение кровотокаокклюзия сосуда
Хлорного железа, вызванной Тромбоз мышь Модель на сонной артерии и брыжейки судна
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.