Методическая статья

Одноканальный анализ и Кальций изображений в подоцитов в Свежевыделенные клубочков

10.8K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/52850

⸱

27 июня 2015 г.

 ,  ,  , 
1Department of Physiology, Medical College of Wisconsin

В этой статье

Краткое содержание

Изменения внутриклеточного уровня кальция в подоцитах являются одним из наиболее важных средств контроля фильтрационной функции клубочков. В этой статье мы объясним высокопроизводительный подход, который позволяет в режиме реального времени обнаруживать обработку кальция и активность отдельных ионных каналов в подоцитах недавно выделенных клубочков.

Аннотация

Известно, что подоциты (эпителиальные клетки почечных клубочков) регулируют проницаемость клубочков и поддерживают структуру клубочков; ключевая роль этих клеток в патогенезе различных заболеваний почек установлена, поскольку повреждение подоцитов приводит к протеинурии и исчезновению отростков стопы. Ранее сообщалось, что различные эндогенные агенты могут вызывать резкую перегрузку внутриклеточной концентрацииCa2+ в подоцитах, предположительно приводя к альбуминурии, и это, вероятно, происходит через кальций-проводящие ионные каналы. В связи с этим возникла необходимость изучения обработки кальция в подоцитах как в норме, так и при различных патологических состояниях. Тем не менее, доступные экспериментальные подходы остаются в некоторой степени ограниченными культивируемыми и трансфицированными клетками. Хотя они представляют собой хорошую базовую модель для таких исследований, в основном они извлекаются из естественной среды клубочка. Здесь мы описываем методологию изучения подоцитов как части только что выделенного целого клубочка. Этот препарат сохраняет функциональный потенциал подоцитов, которые еще прикреплены к капиллярам; Таким образом, подоциты остаются в среде, которая сохраняет основные части фильтрационного аппарата клубочков. В настоящей рукописи развиваются два экспериментальных подхода, которые позволяют: 1) обнаруживать изменения концентрации кальция в реальном времени с помощью ратиометрической конфокальной флуоресцентной микроскопии и 2) регистрировать активность одиночных ионных каналов в подоцитах вновь выделенных клубочков. Эти методологии используют преимущества естественной среды клубочка, что позволяет исследователям устранять острые изменения во внутриклеточном обращении с кальцием в ответ на применение различных агентов, измерять базальную концентрацию кальция в клетках (например, для оценки прогрессирования заболевания), а также оценивать и манипулировать кальциевой проводимостью на уровне одиночных ионных каналов.

Введение

Почки поддержания гомеостаза баланс для различных веществ и регулируют объем крови таким образом, что определяет общую кровяное давление. Нарушения в почечной фильтрации, реабсорбции или секреции приводят к или сопровождают патологические состояния, начиная от гипер- или гипотензии, чтобы терминальной стадией почечной недостаточности, что в конечном итоге требует трансплантации почки. Почечная блок фильтрации (клубочек) состоит из трех слоев - капиллярный эндотелий, базальной мембраны и одного слоя клеток эпителиальных клеток - подоцитов, которые играют важную роль в поддержании щелевой диафрагмой целостности и функции 1. Дисфункция в полупроницаемую клубочковой фильтра вызывает недержание потери макромолекул, таких как протеинурия. Различные агенты могут повлиять на структуру подоцитов и их процессов стопы, которые определяют целостность клубочки фильтрационного барьера.

Подоцитов участвуют в поддержании гломеeruli функция фильтрации. Было установлено, что неправильное обращение кальция в подоцита приводит к повреждения клеток и играет важную роль в прогрессировании различных форм нефропатии 2,3. Таким образом, разработка модели, которая позволяет для прямого измерения внутриклеточных изменений концентрации кальция будет способствовать для изучения функции подоцитов. Изолированные клубочки ранее использовались в течение многих исследований, включая измерения альбумина коэффициента отражения изменения 4 и оценку интегральных клеточных токов в электрофизиологических измерений 5,6 патч-зажим цельноклеточных. В настоящей работе мы описываем протокол, который позволяет исследователю измерять внутриклеточные изменения концентрации кальция в ответ на применения фармакологических агентов, оценить уровень базальной кальция внутри клеток, а также оценить деятельность индивидуального кальциевых каналов. Ratometric измерения концентрации кальция и патч-зажим electrophysiology были использованы для определения изменения внутриклеточной концентрации кальция внутри подоцита и канала активности, соответственно.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Использование и благосостояния животных следует придерживаться в Руководстве NIH по уходу и использованию лабораторных животных после протоколов, рассмотренных и утвержденных по уходу и использованию комитета Институциональная животных (IACUC) по.

1. Почки Флеш

  1. Использование 8 до 12 недельных самцов крыс (предложенный является штамм Sprague Dawley, однако другие штаммы разного возраста и пола можно использовать с соответствующими изменениями).
  2. Обезболить животное в соответствии с процедурой, разрешенной протоколом IACUC; контролировать глубину анестезии и осмотрите животное. Подробное описание операции должны быть выполнены в 1,3 - 1,8, можно найти в Ilatovskaya др 7.
  3. После надлежащего анестезии, поместите животное на контролируемой температурой хирургическом столе, сделать срединный разрез брюшной полости (до 3 дюймов в длину), и раскрыть полую вену и аорту.
  4. Вставьте лигатуры вокруг целиакией и верхней брыжеечной артерий и брюшнойаорты выше тех,; не перевязывать.
  5. Блант рассекать брюшной аорты ниже почечных артерий, и поместите две лигатуры вокруг него, но не перевязывать, то зажать выше лигатур аорты и связать нижнюю нить.
  6. Катетер в аорту с трубки из полиэтилена PE50 (прилагается к шприцевой насос, заполненный PBS) ниже зажима и закрепить катетер со второй лигатуры; снять хомут, включить насос и перевязывать аорты и мезентериальные с целиакией артерии. Быстро сделать разрез в почечной вене, чтобы облегчить давление.
  7. Настаивать аорты с заранее охлажденным PBS в течение 2 или 3 мин со скоростью 6 мл / мин.
  8. Стоп перфузии, акциз и decapsulate 7 почки, и положить их на льду в решении PBS. Эвтаназии животное в соответствии с протоколом, утвержденным IACUC.

2. Выделение Крыса клубочков

  1. Подготовка 30 мл свежего раствора 5% BSA в среде RPMI 1640.
  2. Использование лезвие бритвы и ножницы,изолировать кору обеих почек, а затем пропустить через мясорубку не до однородной консистенции. Эта процедура была описана ранее 7.
  3. Нажмите ткани фарш на предыдущем этапе через 100 меш из нержавеющей стали (предварительно вымоченные в 5% БСА / раствор RPMI) с помощью шпателя. Соберите проточный и силы тяжести позволяет проточный, чтобы пройти через 140 меш.
  4. Фильтр проточные полученная от 140 меш, используя предварительно пропитанной 200 меш, отбросить фильтрата, и мыть верхнюю часть сито с 10 - 15 мл приготовленного раствора БСА / RPMI для сбора клубочков, что осадка на сито.
  5. Поместите раствор БСА / RPMI, содержащей клубочков на льду в 15 мл пробирку и пусть клубочков осадок на дне пробирки в течение 20 мин. Клубочки концентрат на дне пробирки будет хорошо видно. Удалить избыток раствора, оставляя приблизительно 2 мл в трубке.

3. Одноканальный патч-зажим Эльectrophysiology

  1. Подготовьте 5 х 5 мм покрытие стеклянных осколков путем нанесения их с МВт 70,000 - 150,000 поли-ʟ-лизина, и дайте высохнуть. Используйте примерно 30 мкл 0,01% стерильной отфильтрованной раствор в воде за покровного стекла.
  2. Разминка экспериментальные решения РТ и заполнить патч-зажим камеру и пипетки. Для мониторинга TRPC каналов, использовать раствор ванны, мм: 126 NaCl, CaCl 2 1, 10 HEPES, 2 MgCl 2, 10 глюкозы, рН 7,4; Пипетка: 126 NaCl, CaCl 2, 1,5, 10 HEPES, 10 глюкозы; рН 7,4.
    1. Добавить ингибиторы пипетки раствор, чтобы блокировать активность эндогенных каналов, которые не имеют отношение к исследований (рекомендуются: 100 мкМ нифлумовую кислоты или DIDS (блокировать Са 2+ -активированную Cl - каналов), 10 мМ TEA (ингибировать большой проводимостью Са 2 + - зависимой К + каналов), 10 нМ iberiotoxin (блокировать Са 2+ -активированную К + каналы), 10 мкМ никардипин (блокировать N-типа Ca2+ каналы)) непосредственно перед экспериментом патч-зажим.
  3. Аккуратно перемешайте клубочков раствор, содержащий, а затем применить примерно 50 мкл этом поли-ʟ-лизин покрытием крышки стеклянных осколков. Пусть клубочки приложить примерно 5 мин.
  4. Перемещение стеклянных осколков с клубочков к патч-зажим камеры предварительно заполнены раствор бани; заливать в камеру со скоростью 3 мл / мин в течение 1 мин, чтобы обеспечить удаление неприкрепленной клубочков.
  5. Провести эксперимент обычный патч-зажим в режиме клеточной прилагается 7. Со стеклянной пипетки (7 - 10 МОм сопротивления пипетки) образуют с высоким сопротивлением уплотнение между пипеткой и подоцитов мембраны путем легкого всасывания (пипетки, прикрепленный к подоцита на поверхности изолированного клубочка показано на рисунке 2, на слева).
  6. Для измерений клеточных-присоединены, нижних частот токов на частоте 300 Гц с помощью фильтра восемь полюсов Бесселя.
  7. USE изолированы клубочки в патч-зажим для экспериментов до 4 - 6 часов. Держите фондового клубочков фракции на льду.

4. Логометрический конфокальной флуоресцентной Измерения внутриклеточной концентрации кальция в подоцитов

  1. Поместите 500 мкл клубочков фракции (описано в 2.5) в 0,5 мл коническую трубку и добавить кальция красители Фура красный, AM и Fluo-4, AM. Использование 1 мМ исходный концентрации Fura Red, AM и Fluo-4, AM, соответственно (хранить при -20 ° C, растворенного в ДМСО) 2 мм и и использовать 2,5 мкл каждого красителя в течение 500 мкл фракции клубочков. Сразу же после добавления красителей охватывает трубу с алюминиевой фольгой.
  2. Место труб на вращающемся шейкере в течение по крайней мере 20 мин до 1 ч при комнатной температуре.
    Примечание: Фармакологические агенты могут быть добавлены на этой стадии.
  3. Подготовьте покровные стекла, покрывают их поли-ʟ-лизина и дать высохнуть при помощи нагретой пластины набор до 70 ° С.
  4. После того, как загрузка красителей кальция завершенае, применять 100 мкл клубочков, содержащих решение покровные покрытием поли-ʟ-лизин и пусть прилипает к поверхности примерно на 5 мин. Установите клубочков-прикреплен покровные в камере формирования изображения, и заливать раствором ванны (содержащий (в мМ): 145 NaCl, 4,5 KCl, 2 MgCl 2, 10 HEPES, рН 7,35) со скоростью 3 мл / мин для удаления незакрепленные клубочки и остальные красители.
  5. Установка конфокальной лазерной сканирующей микроскопии на длине волны возбуждения 488 нм и эмиссии фильтров (525/25 и 650/25 нм для Fluo-4 и Fura Red, соответственно). Установите программное обеспечение визуализации на нужную частоту и разрешение.
  6. Найти клубочков в светлое, а затем включите обнаружения сигнала флуоресценции. Регулировка интенсивности лазера для каждого красителя, чтобы избежать насыщения сигнала. Выбрать фокальной плоскости с подоцитах которые непосредственно присоединенными к стеклу. Это сводит к минимуму эффект, вызванный сжатием клубочка в ответ на лекарстваприменение. Дважды проверьте, что клубочек выбора правильно приложен к стеклу;
  7. Начните визуализации фокальной плоскости выбора (принимать 512 х 512 изображений с частотой, установленной на 4 сек для визуализации быстрый Ca 2+ переходные изменения. Используйте 60X / NA 1.4 или аналогичный объектив для изображения высокого разрешения), применяются препараты, представляющие интерес, и записать ответ.
    1. Выбирают желаемую фокальной плоскости (как можно ближе к поверхности стекла, как это возможно, чтобы обеспечить визуализацию подоцитах на поверхности клубочка). Проверьте интенсивность флуоресценции на Fluo4 и FuraRed каналов, и убедитесь, что клубочек четко видно в светлое.
    2. Начните изображений. Перед применением любых лекарственных средств, запись по крайней мере, 1 мин базовой флуоресценции, чтобы убедиться, что сигнал является стабильным (нет резких пиков или угасание сигнала).
    3. Применение желаемых препаратов с помощью микропипетки; будьте осторожны и убедитесь, препарат был в состоянии диффузного хорошо и достичь glomerулус. Смешайте раствор ванны осторожно, при необходимости, контролировать выбранный фокальной плоскости и убедитесь, что он не двигался в фокусе из-за применения препарата.
    4. Запишите изменения в интенсивности флуоресценции для сигналов Fluo4 и FuraRed. Убедитесь, что записи достаточно долго, по дожидаясь сигнала не достигнет уровня плато или достигает пика, а затем возвращается к исходному. Выполнение изменения решение или добавление каких-либо других лекарственных средств, если это необходимо.
    5. Остановить запись и сохранить файл в родном формате программного обеспечения.

5. Анализ изображения для измерения кальция

  1. Выполнить анализ изображения с ImageJ программного обеспечения с открытым оснащенный технический модуль Н.Д., что позволяет импортировать изображения в родном формате ND2.
  2. Импорт последовательность изображений; убедитесь, что разделить каналы и использовать режим HyperStack в оттенках серого.
  3. Следуйте Analyze → Инструменты → ROI менеджер путь в программном обеспечении ImageJ к оручка окно менеджера ROI. Выберите несколько регионов интереса (подоцитов), используя овальную инструмент отбора и "Добавить (T)" функцию в диспетчере ROI. В качестве последнего ROI, выберите область в фоновом режиме; сохранить выбранные трансформирования (Подробнее → Сохранить).
  4. Выделите окно, содержащее выбранный канал для анализов. Используйте Подробнее → Многофункциональный Мера в диспетчере ROI, отметьте "одна строка за кусочком" окно в диалоге, который появляется, а затем нажмите кнопку ОК. Результаты будут показаны в формате, который может быть установлен в окне результатов: войти в меню опций результатов измерений → Установить, выберите "Mean серый значение" и вычислить значения интенсивности пикселей для каждого ROI, который будет отображаться в Окно результатов в отдельных столбцах для каждого ROI.
  5. Скопируйте измеренные значения интенсивности ROI для каждого канала (Fluo-4 и Фура красный) в предпочтительном программного обеспечения для анализа данных; вычитать значения интенсивности фона от каждой DATточка.
  6. Для каждого момента времени рассчитать отношение интенсивностей Fluo-4 Фура Red каналов. Участок разброс / линии точка времени изменения Са 2+ переходного для каждого ROI. Рассчитать значения Среднее / SE для выбранных клубочков.
    Примечание: колонка Время должно быть установлено в соответствии с частотой изображения, выбранного в 4,5.

6. Концентрация внутриклеточного кальция Расчеты Использование Fluo-4 флуоресценции сигнал

  1. Возьмите образец клубочков и выполнять экспериментальный протокол до шага 4.7. После записи фоновой флуоресценции добавить Ionomycin (конечная концентрация в ванне камеры должен быть не менее 10 мкМ) в растворе ванны, и увеличение интенсивности флуоресценции записи. После того, как интенсивность достигает своего максимума и спада начинается, добавить MnCl 2 (конечная концентрация должна быть 5 мм), чтобы погасить флуоресценции 8.
  2. Анализ полученных в 6.1 данные. Скопируйте значения интенсивности ROI Fluo-4 сигнал, полученный попротоколу, описанному в 5.1 - 5.5 от предпочтительного программного обеспечения для анализа.
  3. Рассчитать внутриклеточной концентрации кальция (в нМ) в подоцита соответствующей ROI, используя формулу:
    figure-protocol-1
    где К д является предварительно определяется константа диссоциации Fluo-4 (345 нМ), F является интенсивность в временной точки, что вы расчета концентрации кальция для (базового) и F мин и макс F являются значения интенсивности на точка максимальной нагрузки кальция (после Ionomycin приложения) и после тушения флуоресценции (с MnCl 2), соответственно (рисунок 3).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Здесь мы обращались к проблеме измерения острых изменений в уровнях кальция в подоцитов. Рисунок 1 показывает схематическое представление экспериментальной протокол, предназначенный для того, чтобы выполнить высокое разрешение жить конфокальной микроскопии флуоресценции и отдельные записи активности ионных каналов в подоцитов в недавно изолированные клубочки грызунов. Вкратце, после анестезии крысы, почки следует промыть PBS, чтобы очистить их от крови. Затем почки вырезали и decapsulated и клубочки изо...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Описанный здесь подход позволяет проводить анализ обработки кальция подоцитов грызуна клубочков. Этот метод позволяет применение патч-зажим электрофизиологии одного канала и флуоресценции пропорциональный конфокальной микроскопии. Тем не менее, оба подхода могут быть использованы отдельно, самостоятельно. Предложенный протокол имеет несколько относительно простых шагов, в том числе 1) почек флеша; 2) выделение клубочков по дифференциальной просеивания; 3) осуществление патч-зажим электрофизиологические эксперименты, или...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не имеют ничего раскрывать.

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить Глена Slocum (Медицинский колледж штата Висконсин) и Колин А. Lavin (Nikon Instruments, Inc.) за отличную техническую помощь с микроскопии экспериментов. Григорий Бласс признается критического корректуры рукописи. Это исследование было поддержано Национальными Институтами Здоровья грантов HL108880 и Американской Диабетической Ассоциации предоставить 1-15-BS-172 (как), и Бен J. Липс исследовательский грант от Американского общества нефрологии (для DVI).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Fluo4 AMLife TechnologiesF14217500 µl в ДМСО
FuraRed AMLife TechnologiesF-3020
Поли-ʟ-лизинSigma-AldrichP4707
Плюроновая кислотаSigma-AldrichF-68раствор
ИономицинSigma-AldrichI3909-1ML
Ротатор для пробирокMiltenyi Biotec GmbH130-090-753Германия
Конфокальный микроскоп Nikon (инвертированный)NikonNikon A1RЛазерное возбуждение 488 нм. Эмиссионные фильтры 500–550 нм и 570–620 нм
ЦельNikonPlan Apo 60x/NA 1.4 Oil
Предметное стекло (покровное стекло)Thermo Scientific6661B52
Высоковакуумная смазкаDow CorningСиликоновый компаунд
Программное обеспечениеNikonNikon NIS-Elements
Регистрационная/перфузионная камераWarner InstrumentsRC-26
Усилитель для метода локальной фиксации потенциала (patch-clamp amplifier)Molecular DevicesMultiClamp 700B
Система сбора данныхMolecular DevicesDigidata 1440AAxon Digidata® Система
Фильтр низких частотWarner InstrumentsLPF-88-полюсный фильтр Бесселя
Боросиликатные стеклянные капиллярыWorld Precision Instruments1B150F-4
Вытягиватель микропипетокSutter Instrument CoP-97Микропипетковый вытягиватель пламенного/коричневого типа
МикрокузницаNarishigeMF-830Япония
Моторизованный микроманипуляторSutter Instrument CoMP-225
Инвертированный микроскопNikonEclipse Ti
Стол с микровиброизоляциейТМС (транскраниальная магнитная стимуляция)оснащенный клеткой Фарадея
Многоканальная клапанная система перфузииAutoMake ScientificБлок клапанов II
Регистрирующая/перфузионная камераWarner InstrumentsRC-26
Программное обеспечениеMolecular DevicespClamp 10.2
НикардипинSigma-AldrichN7510
ИбериотоксинSigmaI5904-5UG
Нифлумовая кислотаSigma-AldrichN0630
DIDSSigma-AldrichD3514-25MG
хлорид ТЭАTocrisT2265
RPMI 1640Life Technologies11835030без антибиотиков
БСА (бычий сывороточный альбумин)Sigma-AldrichA832730% раствор альбумина
Хирургический стол с регулируемой температуройядро MCWдля грызунов
Стальные сита:#100 (150 μm), 140 (106 μm)
Gilson, Inc SIEVE 3 SS FH NO200Fisher Sci50-871-316
Gilson, Inc SIEVE 3 SS FH NO270Fisher Sci50-871-318
Gilson, Inc SIEVE 3 SS FH NO400Fisher Sci50-871-320
сетка 200 мешSigma-Aldrichs4145скрининг CD-1
Бинокулярный микроскопNikonEclipse TS100
Бинокулярный микроскопNikonSMZ745
Система перфузии на базе шприцевого насосаHarvard Apparatus
Полиэтиленовые трубкиSigma-AldrichPE50
Изофлуранная анестезияfigure-materials-1 VetEquip, Inc.911103
Другие основные реагентыSigma-Aldrich

Ссылки

  1. Machuca, E., Benoit, G., Antignac, C. Genetics of nephrotic syndrome: connecting molecular genetics to podocyte physiology. Hum. Mol. Genet. 18, R185-R194 (2009).
  2. Haraldsson, B., Nystrom, J., Deen, W. M. Properties of the glomerular barrier and mechanisms of proteinuria. Physiol. Rev. 88, 451-487 (2008).
  3. Patrakka, J., Tryggvason, K. New insights into the role of podocytes in proteinuria. Nat. Rev. Nephrol. 5, 463-468 (2009).
  4. Savin, V. J., Sharma, R., Lovell, H. B., Welling, D. J. Measurement of albumin reflection coefficient with isolated rat glomeruli. J. Am. Soc. Nephrol. 3, 1260-1269 (1992).
  5. Gloy, J., et al. Angiotensin II depolarizes podocytes in the intact glomerulus of the Rat. J. Clin. Invest. 99, 2772-2781 (1997).
  6. Nitschke, R., et al. Angiotensin II increases the intracellular calcium activity in podocytes of the intact glomerulus. Kidney Int. 57, 41-49 (2000).
  7. Ilatovskaya, D., Staruschenko, A. Single-channel analysis of TRPC channels in the podocytes of freshly isolated glomeruli. Methods Mol Biol. 998, 355-369 (2013).
  8. Snitsarev, V. A., McNulty, T. J., Taylor, C. W. Endogenous heavy metal ions perturb fura-2 measurements of basal and hormone-evoked Ca2+ signals. Biophys. J. 71, 1048-1056 (1996).
  9. Fukuda, A., Fujimoto, S., Iwatsubo, S., Kawachi, H., Kitamura, K. Effects of mineralocorticoid and angiotensin II receptor blockers on proteinuria and glomerular podocyte protein expression in a model of minimal change nephrotic syndrome. Nephrology (Carlton). 15, 321-326 (2010).
  10. Abramowitz, J., Birnbaumer, L. Physiology and pathophysiology of canonical transient receptor potential channels). FASEB J. 23, 297-328 (2009).
  11. Heeringa, S. F., et al. A novel TRPC6 mutation that causes childhood FSGS. PLoS ONE. 4, e7771(2009).
  12. Zhang, X., Song, Z., Guo, Y., Zhou, M. The novel role of TRPC6 in vitamin D ameliorating podocyte injury in STZ-induced diabetic rats. Mol. Cell. Biochem. 399, 155-165 (2015).
  13. Bohrer, M. P., et al. Mechanisms of the puromycin-induced defects in the transglomerular passage of water and macromolecules. J. Clin. Invest. 60, 152-161 (1977).
  14. Olson, J. L., Rennke, H. G., Venkatachalam, M. A. Alterations in the charge and size selectivity barrier of the glomerular filter in aminonucleoside nephrosis in rats. Lab. Invest. 44, 271-279 (1981).
  15. Schiessl, I. M., Castrop, H. Angiotensin II AT2 receptor activation attenuates AT1 receptor-induced increases in the glomerular filtration of albumin: a multiphoton microscopy study. Am J Physiol Renal Physiol. 305, F1189-F1200 (2013).
  16. Ilatovskaya, D. V., Levchenko, V., Ryan, R. P., Cowley, A. W., Staruschenko, A. NSAIDs acutely inhibit TRPC channels in freshly isolated rat glomeruli. Biochem. Biophys. Res. Commun. 408, 242-247 (2011).
  17. Peti-Peterdi, J. Calcium wave of tubuloglomerular feedback. Am. J. Physiol. Renal Physiol. 291, F473-F480 (2006).
  18. Peti-Peterdi, J., Warnock, D. G., Bell, P. D. Angiotensin II directly stimulates ENaC activity in the cortical collecting duct via AT(1) receptors. J. Am. Soc. Nephrol. 13, 1131-1135 (2002).
  19. Ilatovskaya, D. V., Palygin, O., Levchenko, V., Staruschenko, A. Pharmacological characterization of the P2 receptors profile in the podocytes of the freshly isolated rat glomeruli. Am. J. Physiol. Cell Physiol. 305, C1050-C1059 (2013).
  20. Ilatovskaya, D. V., et al. Angiotensin II has acute effects on TRPC6 channels in podocytes of freshly isolated glomeruli. Kidney Int. 305, C1050-C1059 (2014).
  21. Schaldecker, T., et al. Inhibition of the TRPC5 ion channel protects the kidney filter. J. Clin. Invest. 123, 5298-5309 (2013).
  22. Roshanravan, H., Dryer, S. E. ATP acting through P2Y receptors causes activation of podocyte TRPC6 channels: role of podocin and reactive oxygen species. Am. J. Physiol. Renal Physiol. 306, F1088-F1097 (2014).
  23. Anderson, M., Roshanravan, H., Khine, J., Dryer, S. E. Angiotensin II activation of TRPC6 channels in rat podocytes requires generation of reactive oxygen species. J. Cell. Physiol. 229, 434-442 (2014).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи