Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Моделирование ранних стадиях рака яичников распространение в качестве Органотипической культуры человека брюшную полость

26.7K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/53541

⸱

31 декабря 2015 г.

 ,  ,  , 
1Department of Obstetrics and Gynecology, Section of Gynecologic Oncology, University of Chicago

В этой статье

Краткое содержание

Здесь мы представляем протокол для построения трехмерной модели in vitro слизистой оболочки брюшинной полости, состоящей из первичных мезотелиальных клеток человека и фибробластов, покрытых внеклеточным матриксом, в качестве инструмента для исследования адгезии, инвазии и пролиферации клеток рака яичников.

Аннотация

Характер метастазирования рака яичников заметно отличается от большинства других эпителиальных опухолей, потому что он редко распространяется гематогенным путем. Вместо этого раковые клетки яичников, отслоившиеся от первичной опухоли, переносятся перитонеальной жидкостью к метастатическим участкам в брюшной полости. Эти участки, в первую очередь брюшная брюшина и сальник, являются органами, покрытыми поверхностью, выстланной мезотелием. Для исследования процессов диссеминации рака яичников мы собрали сложную трехмерную культуральную систему, которая реконструирует слизистую оболочку брюшинной полости in vitro. Первичные фибробласты и мезотелиальные клетки человека были выделены из сальника человека. Затем фибробласты смешивали с внеклеточным матриксом и покрывали слоем первичных мезотелиальных клеток человека, чтобы имитировать перитонеальные и сальниковые поверхности, с которыми сталкиваются метастазирующие клетки рака яичников. Полученная органотипическая модель, как показано, используется для изучения ранних этапов диссеминации рака яичников, включая адгезию, инвазию и пролиферацию раковых клеток. Эта модель была использована в ряде исследований для изучения роли микроокружения (клеточного и аклелюлярного) в ранней диссеминации рака яичников. Он также был успешно адаптирован для высокопроизводительного скрининга и используется для выявления и тестирования ингибиторов метастазирования рака яичников.

Введение

Рак яичников является самым смертоносным гинекологическим злокачественным новообразованием1. У большинства пациентов диагноз ставится после того, как рак распространился по всей брюшной полости. После того, как рак распространился по всей брюшной полости, циторедуктивная хирургия и химиотерапия часто не являются достаточным лечением для предотвращения рецидива рака и химиорезистентности, что приводит к менее чем 30% 5-летней выживаемости. Метастазирование рака яичников преимущественно ограничено брюшной полостью, а некоторые другие типы рака, включая рак желудка, поджелудочной железы и толстой кишки, метастазируют в те же анатомические участки брюшинной полости. Как правило, клетки рака яичников отделяются от карциномы in situ в фаллопиевой трубе или первичной опухоли яичников, перемещаются в перитонеальной жидкости в виде одиночных клеток или сфероидов и прикрепляются к выстланным мезотелием поверхностям сальника, кишечника и брюшной стенки2.

Микроокружение опухоли играет важную роль в прогрессировании заболевания и химиорезистентности при многих видах рака3-6. Брюшная полость представляет собой уникальное микроокружение, в котором большинство поверхностей покрыто монослоем мезотелиальных клеток (рис. 1A)7. Мезотелиальная выстилка действует как барьер, создающий поверхность с низким коэффициентом трения, которая, как правило, защищает от адгезии раковых клеток8. Непосредственно под этой мезотелиальной поверхностью находится слой, состоящий преимущественно из фибробластов и внеклеточного матрикса (ВКМ), которые способствуют адгезии и инвазии раковыхклеток. Клетки рака яичников секретируют факторы, которые вызывают изменения в слизистой оболочке мезотелиальных клеток, которые усиливают адгезию, инвазию и метастазирование клеток рака яичников9,10. Клетки рака яичников прикрепляются к мезотелиальной поверхности с помощью интегрина и CD44-опосредованных механизмов (Рисунок 1B)11-16.

Исторически сложилось так, что было разработано несколько 3D-моделей для исследования взаимодействия рака яичников с микроокружением. Некоторые из первых моделей изучали интерфейс рак яичников и ВКМ17-21, связь рака яичников с мезотелиальными клетками13,14,21-24 или и то, и другое25 (рассмотрено нами 26). Niedbala et al. Было обнаружено, что клетки рака яичников демонстрируют более быструю и прочную адгезию к ВКМ, чем к мезотелиальным клеткам или только к пластику25. Однако эти модели гистологически не напоминали перитонеальное микроокружение. Поэтому мы создали 3D-органотипическую модель, чтобы более точно воспроизвести микроокружение рака яичников. Чтобы лучше понять роль микроокружения и взаимодействие между раком и клетками брюшины в перитонеальной диссеминации рака яичников, мы разработали 3D-органотипическую культуральную модель in vitro слизистой оболочки брюшинной полости (схема на рисунке 1C). Предложенная модель состоит из первичных фибробластов человека и ВКМ, покрытых слоем первичных мезотелиальных клеток человека – каждый тип клеток выделен из сальника человека. Гистологически эта модель напоминает нормальную перитонеальную или оперированную оболочку сальника и обеспечивает поверхность, на которой мы можем изучать микроокружение опухоли, взаимодействие между раковыми клетками и нормальной тканью, а также процессы адгезии, инвазии и пролиферации раковых клеток.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все протоколы исследований, описанные были рассмотрены в Чикагском университете Institutional Review Board (IRB). Информированное согласие было получено от каждого пациента до операции и исследования был одобрен в Чикагском университете IRB. Биологическая безопасность типов корпус 2 и перчатки должны быть использованы при обращении человеческую ткань для защиты и снижения риска контаминации клеток.

1. Выделение и культуры первичных стромальных клеток нетрансформированных

  1. Коллекция тканей человека и подготовка.
    1. Получение образцов человеческого сальника, 2 см 3, удалены во время операции на брюшной полости, и сразу же погружают ткань в РТ фосфатно-солевом буфере (PBS) (фиг.2А). Кусок сальника 3 см х 2 см, как правило, дает 1 млн первичных человеческих мезотелиальной клетки (ГПМЦ) и 200000 первичных фибробластов человека или нормальные фибробласты сальника (Ноф).
    2. Спин вниз PBS ткань погружают в 0,5 мкг на 3 длямин как можно скорее после сбора (<2 ч в PBS) и передать ткань на свежий 20 мл PBS в 50 мл коническую трубку. Нарежьте ткань в 5 мм 3 куски фарша с скальпелей в 15 см в диаметре, стерильные культуры блюдо (рис 2B).
  2. Первичная изоляция человека мезотелиальной клетки 8
    1. Для выделения НРМС, передать фарш ткани в 50 мл конические пробирки и подождите 1 мин для твердых части, чтобы плавать к вершине (рис 2С & D). ГПМЦ и эритроциты (RBC) будет присутствовать в жидкости на дне. Использование пипетки, чтобы удалить жидкость из нижней части трубы и в новую коническую трубку. Спин жидкость вниз на 0,5 мкг в течение 3 мин и аспирата супернатант от осадка ГПМЦ / RBC.
      1. Повторите процедуру три раза: добавить 20 мл PBS, чтобы фарш ткани, позволяют ткани, чтобы расти, удалить жидкость из нижней части с помощью пипетки и в ГПМЦ / РБК трубки, спин вниз, и снимитесупернатант. После того как все спины будут завершены, и супернатант отсасывали, а осадок содержит НРМС и RBC.
    2. Пластина все клетки из осадка в 75 см 2 колбу в 15 мл полной питательной среды (DMEM с 10% фетальной бычьей сыворотки [FBS], 1% MEM витаминов [93 мг / л], 1% MEM заменимых аминокислот [81,4 мг / л], 1% пенициллина стрептомицина [Pen-Strep, 100 ед / мл пенициллина и 100 мкг / мл стрептомицина]).
    3. Выполните вторичную PBS мыть, чтобы изолировать дополнительные НРМС.
      1. Для вторичной PBS мыть, встряхнуть оставшееся твердое вещество ткани при 200 оборотах в минуту, 37 ° С в течение 10 мин в 20 мл PBS, а затем ждать 1 мин для ткани, чтобы плавать на поверхности. Удалить жидкость из нижней части трубы в новую пробирку, центрифугирование со скоростью 0,5 мкг в течение 3 мин, и аспирата супернатант.
      2. Пластинчатый все ГПМЦ / RBC из вторичного PBS мыть в отдельном 75 см 2 колбу в 15 мл полной питательной среды.
    4. Для выделения любого гemaining НРМС, встряхнуть измельченной ткани при 200 оборотах в минуту, 37 ° С градусов в течение 10 мин в 20 мл 1: 1 0,25% трипсина 25 мМ ЭДТА: Раствор PBS по объему. Дайте ткани расти, сбора жидкости на дне пробирки в новую пробирку 50 мл, и спин вниз на 0,5 GX 3 мин.
      1. Аспирируйте супернатант и пластины все ГПМЦ / RBC в отдельном 75 см 2 колбу в 15 мл полной питательной среды.
    5. Культура клеток высевали при 37 ° С и 5% СО 2 в увлажненной среде. Кормовые покрытием клетки, добавив 15 мл полной питательной среды на 3 и 5 без удаления истощенных средах. ГПМЦ может быть культивировали в течение 5-7 дней до расщепления.
      1. Используйте низкой проход НРМС (до прохождения 2) во всех экспериментах, чтобы минимизировать дедифференцировку и модификацию оригинальной фенотипа. Используйте широкий поля микроскопа желательно с 20-кратным объективом с пластиковой дифференциальных возможностей вмешательство контрастных или 4-20x цели с фазового контраста capabilitieS (фазового контраста фильтры на микроскопом) для принятия всех изображений клеток, и 10x объектив () в светлом поле, чтобы проанализировать иммуногистохимическое 3,3-диаминобензидина окрашивание (DAB).
    6. Убедитесь, что ГПМЦ являются кубический и выразить цитокератин 8 и виментин выполняя иммуногистохимии 8 (рис 3А, C, E).
  3. Изоляция Ноф 8
    1. Подготовка 10 мл исходного типа раствора коллагеназы III (10x) путем объединения 1: 1: 1 смесь 100x Pen-Strep: активность 1500 единиц / мл коллагеназы типа III: Активность 714 единиц / мл гиалуронидазы в PBS.
    2. Встряхнуть фарш сальника ткани, которая остается после выделения НРМС при 200 оборотах в минуту, 37 ° C в течение 6 ч в 10 мл 10x коллагеназы типа решения III, разведенного в бессывороточной СМИ (DMEM с 1% MEM витаминов [93 мг / л], 1% MEM заменимых аминокислот [81,4 мг / л], 1% пенициллина стрептомицина [Pen-Strep, 100 ед / мл пенициллина и 100 мкг / мл стрептомицина]), Расщепленную ткани будет выглядеть непрозрачным и может иметь некоторую волокнистую мусора (Рисунок 2E).
    3. Центрифуга раствор, содержащий клетки Ноф в виде суспензии в 0,5 мкг в течение 3 минут при комнатной температуре, аспирата супернатант и осадок пластины в 75 см 2 колбу на 13 мл полной питательной среды.
    4. Удалить старые средства массовой информации и заменить 15 мл свежего полной питательной среды после 24 часов. Ноф можно культивировать в течение 1-3 дней до расщепления. Примечание распространение Ноф прекратится, когда клетки достигают слияния.
    5. Убедитесь, что первичные фибробласты человека плоские удлиненные клетки, и выражают виментин, но не Цитокератин 8, выполнив иммуногистохимии 8 (3В, D, F). Используйте низкой проход Ноф для экспериментов (в идеале до прохождения 3), чтобы минимизировать дедифференцировку и модификация оригинального фенотипа. Используйте широкий поля микроскоп с 20-кратным объективом с пластиковых ОПК возможностей для принятия всех фазовых изображений клеток,и 10x цель в светлом поле, чтобы проанализировать окрашивание иммуногистохимическое DAB.

2. обшивки Органотипической Культура 8

  1. NOF Освобождение от 75 см культуральной колбы промывкой 10 мл PBS, затем 3 мл 0,25% трипсина / EDTA 25 мМ не более чем за 5 мин. Нейтрализовать трипсина, по крайней мере в 3 раза объема полной питательной среды.
  2. Перевести трипсином клетки в 50 мл коническую трубку и спином вниз на 0,5 GX 3 мин. Удалить супернатант и принести клетки обратно в 5 мл полной ростовой среде. Использование клеток счетчик для подсчета клеток выделяют из культуры колбы.
  3. Развести клетки в соответствующем объеме полной питательной среды к пластине 2000-4000 NOF на 100 мкл на черную, ясно, дном, 96-луночные планшеты. Добавить 0,5 мкг / 100 мкл крысы хвост коллагена-I в смеси клеток, прежде чем покрытие. Пусть клетки сидеть при 37 ° С в 5% СО 2 в увлажненной среде, по крайней мере 4 ч, или до тех пор, пока клеткипридерживаться поверхности пластины.
  4. Отпустите НРМС из колбы культуры, используя те же методы, описанные в шагах 2.1 и 2.2. Развести клетки в соответствующем количестве полной питательной среды к пластине 10000-20000 НРМС за 50 мкл на верхней части NOF уже покрытой коллагеном I в 96-луночных планшетах. Пусть клетки сидеть при 37 ° С в 5% СО 2 в увлажненной среде, по крайней мере 18 ч перед началом экспериментов.
  5. Культура зеленый флуоресцентный белок (GFP), -expressing HeyA8 клеток рака яичников в полном СМИ роста. HeyA8 яичников раковые клетки флуоресцентно меченных путем экспрессии лентивирусов вектора, экспрессирующего Копепод cGFP (PCDH-CMV-MCS-EF1). HeyA8 клеток рака яичников должно быть 80-90% сплошности в день использования (логарифмической фазе роста). Отпустите клетки из культуральной пластины и рассчитывать, используя те же методы, описанные в шагах 2.1-2.2 для первичных клеток.
  6. Разрешить клеток рака яичников, чтобы восстановить в полном ростовой среде в течение 15-20 мин при температуре 37 ° С вконическую трубку с крышкой неплотно закрыты.

3. Адгезия Анализ 8

  1. После выздоровления, осаждения клеток рака яичников на спиннинг в течение 3 мин при 0,5 мкг, а затем удалить супернатант и растворить клеток в соответствующем объеме сыворотки среды для достижения концентрации 50000 клеток / 100 мкл.
  2. Обратить 96-луночных с / Ноф органотипических культур ГПМЦ для удаления отработавших СМИ, и добавить 100 мкл клеточной суспензии рак в бессывороточных СМИ в каждую лунку. Инкубируйте планшет при 37 ° С в 5% СО 2 в увлажненной среде в течение 30 мин до 4 ч.
  3. Переверните планшет 96-а для удаления информации и неправительственных организаций прилипшие клетки. Использование многоканального пипетки на малой мощности тщательно и осторожно пипеткой 100 мкл PBS в каждую лунку, и инвертировать пластину снова. Повторите PBS мыть еще раз.
  4. Обратить удалить PBS и добавьте 100 мкл 4% параформальдегида в каждую лунку. Разрешить пластина сидеть в течение 20 мип чтобы зафиксировать клетки. Через 20 мин пластину перевернули и добавить 100 мкл PBS.
  5. Следует отметить, что общее флуоресценции лунки могут быть представлены или количество клеток может быть определена количественно. Для количественного, первая пластина стандартная кривая эксперимент дважды с использованием HeyA8 клеток в концентрации 1 млн клеток / мл.
    1. Сделайте стандартную кривую летел вниз 1 млн клеток, удаляя массовой информации, и позволяет им сидеть в 1 мл 4% параформальдегида в течение 20 мин.
    2. Побочные клетки снова и воспитывать в 1 мл PBS (пересчет клетки подтвердить 1 млн / мл концентрации). Пластина 50000, 40000, 30000, 20000, 10000, 5000, 1000, и 0-клетки в каждую лунку в двух экземплярах, а также добавить PBS для конечного общего объема 50 мкл в каждую лунку.
  6. Нижняя читать культура пластину на флуоресцентной ридере (возбуждения = 488 нм, эмиссия = 528 нм), масштабирование высокие скважин (50000 на стандартной кривой). Используйте стандартную кривую для расчета, сколько клеток рака яичников, прилипших к organotypIC культуры в каждую лунку (фиг.4А-С).

4. Анализ пролиферации 10

  1. После клеток рака яичников восстановления (см шаги 2.5 и 2.6 выше), осаждения клеток, вращая в течение 3 мин со скоростью 0,5 мкг, а затем разбавленной клеток в соответствующем объеме 1% FBS сред (DMEM с 1% FBS, 1% MEM витамины [93 мг / л], 1% MEM заменимых аминокислот [81,4 мг / л], 1% пенициллина стрептомицина [Pen-Strep, 100 ед / мл пенициллина и 100 мкг / мл стрептомицина]) до достижения концентрации 4000 клеток / 150 мкл.
  2. Обратить 96-луночного планшета с ГПМЦ / Ноф органотипических культур для удаления отработавших СМИ, и добавить 150 мкл клеточной суспензии рак в 1% FBS СМИ в каждую лунку. Инкубируйте планшет при 37 ° С в 5% СО 2 в увлажненной среде в течение 72 ч.
  3. Нижняя читать культура пластину на флуоресцентной ридере один раз в день (возбуждение = 488 нм, эмиссия = 528 нм), чтобы оценить относительную пролиферациюячеек. Продолжить анализ в течение 96 ч, меняя СМИ в 48 часов (5А-C). Будьте осторожны, чтобы не нарушить культуры при изменении СМИ (обращения пластина предпочтительно).

5. Вторжение Пробирной 8

  1. Перед покрытие 3D-культуру, добавить 7,5 мкг крыс-хвост коллагена I в 200 мкл PBS к культуре пластины вставки 24-а (размер пор 8 мкм). Пусть пластина инкубат O / N, затем тщательно удалить PBS с пипеткой непосредственно перед гальваническое покрытие органотипической культуры ГПМЦ / Ноф на коллагеновых покрытием вставками (шаг 2 выше).
  2. Подготовка клеток рака яичников, как в шаге 3.1. С планшетом клеток рака яичников на органотипических культур на вставках, тщательно использовать пипетку, чтобы удалить избыток носителя из верхней части вставки. Добавить 100 мкл суспензии яичников раковых клеток в сыворотке крови без средств массовой информации в каждую лунку.
  3. Добавить 750 мкл полной СМИ рост в колодец ниже вставки, чтобы вызвать раковые клетки внашествия в органотипических культур. Инкубируйте планшет при 37 ° С в 5% СО 2 в увлажненной среде в течение 24 ч.
    Примечание: клеток рака яичников, что проникают в органотипической культуре будет пересекать вставку и остаются на нижней стороне вставки.
  4. После 24 часов, понять вставку с щипцами и кратко промыть его в стакан PBS, затем переместите вставку в пустую лунку. Скраб вершины каждой вставки с обеих сторон ватным тампоном в общей сложности 1 мин. Быстро разместить вставку в планшет, содержащий 750 мкл 4% параформальдегида в каждую лунку. Разрешить каждая вставка сидеть в параформальдегиде в течение 10 мин перед передачей вставок в скважинах, заполненных 750 мкл PBS.
  5. Просмотр захваченных клеток (присоединение и крепится к нижней части вставки) с помощью микроскопа при увеличении в 2,5 раза. Когда вся хорошо в пределах поля зрения, регулировать увеличение до 10x и принять 5 фотографии, один недалеко от центра и 1 в каждом квадранте скважины, избегаяпринимать изображения, которые слишком близко к краям. Выполните ту же шаблон для каждой скважины.
  6. Используйте программу производителя, чтобы подсчитать количество ячеек в каждом изображении, чтобы получить среднее число клеток вторглись в поле каждую лунку (рис 6A-C) в соответствии с их протокола.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Органотипической культура была собрана, сначала смешивая первичные фибробласты человека с коллагеном I типа, а затем наложение эту культуру с 5-кратным количеством мезотелиальных клеток. Культуру инкубировали в течение не менее 18 ч, прежде чем клеток рака яичников были добавлены для изучения адгезии, инвазии или пролиферации. Каждый анализ был повторен с несколькими (N = 3-5) 3D культуры, полученные из разных пациентов и многочисленных скважин были протестированы в каждом условии для адгезии (N = 5), пролиферации (N = ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Органотипической модель перитонеального микросреды был создан для оценки индивидуальной и коллективной функции (ы) как через сотовые и врожденных компонентов микроокружения яичников распространения рака. Конкретные протоколы для гальванических и настройки органотипической культуру 3D исследовать яичников адгезии клеток рака, пролиферации и вторжение предоставляются. Первичные человеческие клетки сальника мезотелиальные и фибробласты были выделены от больных и использовать на ранних прохождения сохранить нормальную морфо...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Мы благодарим всех ординаторов и лечащих врачей, особенно доктора А.Ф. Хейни (Чикагский университет, факультет акушерства и гинекологии) за сбор биопсии сальника. Кроме того, мы благодарим Стейси Тобин и Гейл Айзенберг за тщательное редактирование этой рукописи. Эта работа была поддержана Bears Care, благотворительным бенефициаром футбольного клуба Chicago Bears, Национальным институтом неврологических расстройств и инсульта (NINDS) R21 NS075702 и грантом Национального института рака R01 CA111882 для E.L.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
<сильный>1. Выделение и культивирование первичных клеток
PBSFisher ScientificSH3001304
Лезвия бритвы однолезвийныеFisherScientific 12-640
15 см тарелки для культивированияBD Biosciences353025
Стеклянная колба??
Фетальная бычья сыворотка (FBS)Life Technologies16000044_3616914956
DMEM с L-глутаминомCorning10-013-CV
MEM VitaminsCorning25-020-Cl
MEM Заменимые аминокислотыCorning25-025-CI
Пенициллин-стрептомицинCorning30-002-CI
ШейкерThermo-FisherMaxQ 4450
ЦентрифугаEppendorf5702
ИнкубаторThermo-FisherForma Series II Инкубатор CO2 с водяной рубашкой Модель 3100
Трипсин ЭДТА, 1x (0.25%)Corning25-053-CI
ГиалуронидазаУортингтон БиохимическийLS002592
T-75 КолбыBD Biosciences
Колбы T-175 НаконечникиBD Biosciences353112
ПипеткиRaininP2, P10, P20, P200 и P1000
Наконечники для пипетокCorningФильтрованные наконечники P2, P10, P20, P200 и P1000
Наименование реагента/оборудованияCompany>Номер в каталогеКомментарии/Описание
2. Покрытие 3D culture
Cell CounterInvitrogenCountess
Countess Камера для подсчета клетокInvitrogenC10313
Трипановый синий краситель (0.4%)Gibco15250-061
Коллаген I типа I (крысиный хвост)BD Biosciences354236
96 луночный планшет, прозрачное дно, черныйBD Biosciences353219
Название реагента/оборудованияCompanyНомер в каталогеКомментарии/Описание
3. Анализ адгезии
Многоканальный пипеткаEppendorfXplorer 300
Раствор параформальдегида 4% в PBSSanta Cruz Biotechnologysc-281692
Планшетный считывательМолекулярные устройстваMinimax
Наименование реагента/оборудованияCompanyКаталожный номерКомментарии/Описание
>5. Инвазионный анализ
Вставки для клеточных культур (8 мкм, 24 лунки)BD Biosciences353097
ватные палочкиватные палочкипалочки
микроскопZeissAxiovert 200m
Cell Profilerобщественное достояние
24-луночный планшетBD Biosciences353047
Название реагента/ОборудованияCompanyНомер в каталогеКомментарии/Описание
6. Антитела
Анти-Интегрин &альфа; Vβ 3 Антитело, клон LM609EMD MilliporeMAB1976
Beta 1 OncosynergyOS2966
Alpha 5 [CD49e]ID Pharmingen555615
Beta 4 [CD104]EMD MilliporeMAB 2058
353136 ватные

Ссылки

  1. Siegel, R., Ma, J., Zou, Z., Jemal, A. Cancer statistics. CA Cancer J. Clin. 65 (1), 5-29 (2015).
  2. Lengyel, E. Ovarian cancer development and metastasis. Am. J. Pathol. 177, 1053-1064 (2010).
  3. Quail, D. F., Joyce, J. A. Microenvironmental regulation of tumor progression and metastasis. Nat. Med. 19, 1423-1437 (2013).
  4. Correia, A. L., Bissell, M. J. The tumor microenvironment is a dominant force in multidrug resistance. Drug Resist Updat. 15, 39-49 (2012).
  5. Hanahan, D., Coussens, L. M. Accessories to the crime: Functions of cells recruited to the tumor microenvironment. Cancer Cell. 21, 309-322 (2012).
  6. Nieman, K. M., et al. Adipocytes promote ovarian cancer metastasis and provide energy for rapid tumor growth. Nat. Med. 17, 1498-1503 (2011).
  7. Daya, D., McCaughy, W. T. Pathology of the peritoneum: A review of selected topics. Semin. Diagn. Pathol. 8, 277-289 (1991).
  8. Kenny, H. A., Krausz, T., Yamada, S. D., Lengyel, E. Use of a novel 3D culture model to elucidate the role of mesothelial cells, fibroblasts and extra-cellular matrices on adhesion and invasion of ovarian cancer cells. Int. J. Cancer. 121, 1463-1472 (2007).
  9. Kenny, H. A., Kaur, S., Coussens, L. M., Lengyel, E. The initial steps of ovarian cancer cell metastasis are mediated by MMP-2 cleavage of vitronectin and fibronectin. J. Clin. Invest. 118, 1367-1379 (2008).
  10. Kenny, H. A., et al. Mesothelial cells promote early ovarian cancer metastasis through fibronectin secretion. J. Clin. Invest. 124, 4614-4628 (2014).
  11. Strobel, T., Cannistra, S. A. β1-integrins partly mediate binding of ovarian cancer cells to peritoneal mesothelium in vitro. Gynecol. Oncol. 73, 362-367 (1999).
  12. Strobel, T., Swanson, L., Cannistra, S. A. In vivo inhibition of CD44 limits intra-abdominal spread of a human ovarian cancer xenograft in nude mice: A novel role for CD 44 in the process of peritoneal implantation. Cancer Res. 57, 1228-1232 (1997).
  13. Iwanicki, M., et al. Ovarian cancer spheroids use myosin-generated force to clear the mesothelium. Cancer Discov. 1, 144-157 (2011).
  14. Lessan, K., Aguiar, D., Oegema, T. R., Siebenson, L., Skubitz, A. P. CD44 and β1 integrin mediate ovarian carcinoma cell adhesion to peritoneal mesothelial cells. Am. J. Pathol. 154, 1525-1537 (1999).
  15. Ahmed, N., Riley, C., Rice, G., Quinn, M. Role of integrin receptors for fibronectin, collagen and laminin in the regulation of ovarian carcinoma functions in response to a matrix microenvironment. Clin. Exp. Metastasis. 22, 391-402 (2005).
  16. Kaur, S., et al. β3-integrin expression on tumor cells inhibits tumor progression, reduces metastasis, and is associated with a favorable prognosis in patients with ovarian cancer. Am. J. Pathol. 175, 2184-2196 (2009).
  17. Niedbala, M. J., Crickard, K., Bernacki, R. In vitro degradation of extracellular matrix by human ovarian carcinoma cells. Clin. Exp. Metastasis. 5, 181-197 (1987).
  18. Kanemoto, T., Martin, G. R., Hamilton, T. C., Fridman, R. Effects of synthetic peptides and protease inhibitors on the interaction of a human ovarian cancer cell line (NIH:OVCAR-3) with a reconstituted basement membrane (matrigel). Invasion Metastasis. 11, 84-92 (1991).
  19. Rieppi, M., et al. Mesothelial cells induce the motility of human ovarian carcinoma cells. Int. J. Cancer. 80, 303-307 (1999).
  20. Barbolina, M. V., Adley, B. P., Ariztia, E. V., Liu, Y., Stack, M. S. Microenvironmental regulation of membrane type 1 matrix metalloproteinase activity in ovarian carcinoma cells via collagen-induced EGR1 expression. J. Biol. Chem. 282, 4924-4931 (2007).
  21. Burleson, K. M., et al. Ovarian carcinoma ascites spheroids adhere to extracellular matrix components and mesothelial cell monolayers. Gynecol. Oncol. 93, 170-181 (2004).
  22. Suzuki, N., et al. HMOCC-1, a human monoclonal antibody that inhibits adhesion of ovarian cancer cells to human mesothelial cells. Gynecol. Oncol. 95, 290-298 (2004).
  23. Kishikawa, T., et al. Two distinct pattern of peritoneal involvement shown by in vitro and in vivo ovarian cancer dissemination models. Invas. Metast. 15, 11-21 (1995).
  24. Casey, R. C., et al. Establishment of an in vitro assay to measure the invasion of ovarian carcinoma cells through mesothelial cell monolayers. Clin. Exp. Metastasis. 20, 343-356 (2003).
  25. Niedbala, M. J., Crickard, K., Bernacki, R. Interactions of human ovarian tumor cells with human mesothelial cells grown on extracellular matrix. Exp. Cell Res. 160, 499-513 (1985).
  26. White, E. A., Kenny, H. A., Lengyel, E. Three-Dimensional modeling of ovarian cancer. Adv. Drug Deliv. Rev. 79-80, 184-192 (2014).
  27. Kenny, H. A., et al. Quantitative high throughput screening using a primary human three-dimensional organotypic culture predicts in vivo efficacy. Nature Comm. , (2015).
  28. Sawada, K., et al. c-Met overexpression is a prognostic factor in ovarian cancer and an effective target for inhibition of peritoneal dissemination and invasion. Cancer Res. 67, 1670-1680 (2007).
  29. Kenny, H. A., Lengyel, E. MMP-2 functions as an early response protein in ovarian cancer metastasis. Cell cycle. 8, 683-688 (2009).
  30. Sawada, K., et al. Loss of E-cadherin promotes ovarian cancer metastasis via alpha 5-integrin, which is a therapeutic target. Cancer Res. 68, 2329-2339 (2008).
  31. Mitra, A. K., et al. Ligand-independent activation of c-Met by fibronectin and α(5)β(1)-integrin regulates ovarian cancer invasion and metastasis. Oncogene. 30, 1566-1576 (2011).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Модель брюшной полостипервичные мезотелиальные клетки человекафибробласты нормального сальникаадгезия раковых клетокинвазия раковых клетокпролиферация раковых клетокингибирование RGD-пептидомблокирующие антитела к интегринам
Моделирование ранних стадиях рака яичников распространение в качестве Органотипической культуры человека брюшную полость
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.