Утилизация внутриклеточного кальция играет важную роль в регуляции систолической и диастолической функции в кардиомиоцитов. Здесь мы описываем протокол для оценки саркоплазматический ретикулум Ca2 + резерв и функция удаления диастолического кальция в кардиомиоцитов, кальция, визуализации системы.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Оценка саркоплазматический ретикулум кальция резерва и внутриклеточного кальция диастолического удаления в изолированных кардиомиоцитов желудочков
* These authors contributed equally
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Утилизация внутриклеточного кальция играет важную роль в регуляции систолической и диастолической функции в кардиомиоцитов. Сердца саркоплазматический ретикулум (SR) служит как Ca2 + резервуар для сжатия, который reuptakes внутриклеточный Ca2 + во время отдыха. Для ударов SR Ca2 + резерв Детерминантный для сердца стягиваемости, и устранению внутриклеточного Ca2 + имеет решающее значение для сердца диастолической функции. В некоторых патофизиологических условиях, например сахарного диабета и сердечной недостаточности Распродажа нарушениями кальция и SR Ca2 + магазин в cardiomyocytes могут быть вовлечены в процессе работы сердца дисфункции. Здесь мы описываем протокол для оценки SRCa2 + резерв и диастолического Ca2 + удаления. Кратко один cardiomyocyte был ферментативно изолирован, и внутриклеточных Ca2 + флуоресценции обозначается фура-2 был записан кальция съемочной системы. Применять кофеин для стимулирования общей SR Ca2 + релиз, мы предварительно программу переключатель Автоматическое перфузии взаимосвязанных перфузии системы и системы стимулирования. Затем моно экспоненциальной кривой был использован для анализа константы времени распада транзиентов кальция и кальция, кофеин индуцированной импульсов. Таким образом, вклад SR Ca2 +-АТФазы (SERCA) и Na+-Ca2 + теплообменник (NCX) для удаления диастолического кальция оценивалась.
Введение
Внутриклеточного кальция ([Ca2 +]я) переработка играет важную роль в регуляции систолической и диастолической функции в cardiomyocytes1. Как мы знаем, кальций индуцированной Ca2 + релиз инициирует возбуждения сокращение муфты, который переводить электрического сигнала, чтобы сокращение. Деполяризации мембраны активирует sarcolemmal L-типа Ca2 + каналы, которые вызывают Ca2 + освобождение от SR в цитоплазму через рианодиновыми рецепторов 2 (RyR2). Переходных повышенных цитоплазматических Ca2 + инициирует сокращением миофибрилл. Во время фазы, цитоплазматических Ca2 + яв....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
всех животных эксперименты были проведены в соответствии с протоколами, утвержденных Комитетом институциональный уход животных и использования на экспериментальный научно-исследовательский центр, Китай Академии медицинских наук и Чжэцзянский университет.
1. приготовления раствора
- подготовить все решения, как описано в таблице 1.
2. изоляция из левого желудочка (LV) кардиомиоцитов
Примечание: LV кардиомиоцитов изолированы ферментативно с помощью системы перфузии Langendroff как описано 7 , 8....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Здесь, мы иллюстрируем Стрептозотоцин (СТЗ) - индуцированной диабетической крысы (DM) и возраст соответствует Sprague - Dawley (SD) к примеру крысы. 8-недельных самцов крыс SD (200 ± 20 г) получил однократной внутрибрюшной инъекции СТЗ (70 мг/кг, ip) для буфера цитрата или группы DM для контрольной группы. Через одну неделю после администрации СТЗ, крысы с глюкозы крови > 16.7 ммоль/Л, были рассмотрены диабетической. После 8 недель LV миоцитов были ферментативно изолированы. После воз.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Кальция поток освобожден от SR является основным Ca2 + источником для систолы в сердце. До некоторой степени, амплитуда SR Ca2 + контента и дробные Ca2 + освобожден от SR отражают SR Ca2 + резерв для сердечного сокращения. С другой стороны Ca2 + резерв SR зависит от способности SR Ca2 + reuptake, Ca2 + утечка SR и их баланс через SR во время диастола12,,1314<.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют ничего сообщать.
Благодарности
Эта работа была поддержана субсидий из национального фонда естественных наук Китая (№ 81100159, Dongwu Лай; 81401147, Чжан Juhong), медицинских и здравоохранения наук программа из провинции Чжэцзян (№ 201646246, Dongwu Лай) и медицинских наук и Технология план города Ханчжоу (№ 2013A28, Дин Лин).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| NaCl | Alfa Aesar | 012314 | |
| MgCl2 | Alfa Aesar | 012315 | |
| KCl | Alfa Aesar | 11595 | |
| HEPEs | Sigma | H3375 | |
| D-глюкоза | Alfa Aesar A16828 | ||
| NaOH | Alfa Aesar Aesar A18395 | ||
| KOH | Alfa Aesar A18854 | ||
| KH2PO4 | Альфа Аесар | 011594 | |
| MgSO4 | Альфа Аезар | 3337 | |
| L-глутаминовая | Альфа Аесар А15031 | ||
| Таурин | Альфа Аесар А12403 | ||
| EGTA | Сигма | Е3889 | |
| Коллагеназа А | Рош | 10103586001 | |
| Коллагеназа II | типаWorthington | LS004177 | |
| BSA | Roche | 735094 | |
| кофеин | Sigma | C0750 | |
| Fura-2 AM | Invitrogen | F1201 | |
| Микроскоп | Olympus | Olympus IX 71 | |
| Система Лангендорфа | Beijing Syutime Technology Co | PlexiThermo-S-LANGC | |
| Микроманипулятор | Marchauser | MM33 звенья | |
| Перфузионная камера | IonOptix | FHD | |
| Управляемая гравитационная перфузионная система | ALA | VC 3-8 | |
| Программное обеспечение для управления клапанами | ALA | VC 3 1.0.1.2 | |
| Прецизионный регулятор расхода | Delta Med | 3204315 | |
| Многоствольный коллектор Перфузионный карандаш | AutoMate Scientific | 04-08-[360] | |
| Микронный съемный наконечник | AutoMate Scientific | 360 мкм | |
| Системы измерения флуоресценции и определения размеров клеток | IonOptix | Hyperswitch | |
| Программное обеспечение | для записи IonOptix | IonWizard 6.2.59 | |
| Стимулятор | IonOptix | MyoPacer EP | |
| Sprague-dawley rats | Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co. | СКХК 2016-01-007436 |
Ссылки
- Capel, R. A., Terrar, D. A. The importance of Ca (2+)-dependent mechanisms for the initiation of the heartbeat. Front Physiol. 6, 80(2015).
- Bers, D. M. Calcium cycling and signaling in cardiac myocytes. Annu Rev Physiol. 70, 23-49 (2008). <....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
