Шарик на основе мультиплекс пробирного анализа слезоточивый цитокинового профиля

Praveen Kumar Balne; Veonice Bijin AU; Louis Tong; Arkasubhra Ghosh; Mukesh Agrawal; John Connolly; Rupesh Agrawal

doi:10.3791/55993

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Шарик на основе мультиплекс пробирного анализа слезоточивый цитокинового профиля

11.3K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/55993

⸱

13 октября 2017 г.

Praveen Kumar Balne¹^,² , Veonice Bijin AU³ , Louis Tong² , Arkasubhra Ghosh⁴ , Mukesh Agrawal⁵ , John Connolly³ , Rupesh Agrawal¹

¹National Healthcare Group Eye Institute, Tan Tock Seng Hospital, ²Singapore Eye Research Institute (SERI), ³Institute of Molecular and Cell Biology, A*STAR, ⁴GROW Research Laboratory, Narayana Nethralaya Foundation, ⁵Vimta Labs Limited

В этой статье

Краткое содержание

Анализ слезоточивый фильм цитокинов помогает в изучении различных глазных заболеваний. Мультиплекс шарик на основе простых и чувствительной и включить тестирование нескольких целей в образцах с небольшими объемами. Здесь мы описываем протокол для слезоточивый фильм цитокина профилирования с использованием бисера на основе мультиплекс пробирного.

Аннотация

Слезной пленки представляет собой сложную смесь липидов, белков и минералов, которая охватывает внешней поверхности глаза, тем самым обеспечивая смазки, питания и защиты в базовой ячейки. Анализ слез является новой областью для идентификации биомаркеров для прогнозирования, диагностики и прогноз различных глазных заболеваний. Слезы легко доступны и их коллекции является неинвазивным. Таким образом продвижение технологии приобретают известность для идентификации нескольких аналитов в слезах для изучения изменений в составе белка или метаболита и его связь с патологических состояний. Слезоточивый цитокины являются идеальным биомаркеров для изучения здоровья глазной поверхности, а также помочь в понимании механизмов различных глазной поверхности расстройств, таких как сухой глаз болезни и весеннем конъюнктивите. Шарик на основе мультиплекс анализов имеют возможность обнаружения нескольких аналитов в небольшое количество образцов с высокой чувствительностью. Здесь мы описываем стандартизированный протокол взятия образца, извлечения и анализа цитокина профилирования с использованием бисера мультиплекс пробирного.

Введение

Слезы производятся слезных желез и аксессуаров желез и пальто внешней поверхности глаза. Слезной пленки состоит из наружной липидного слоя и внутренний водный слой, который включает в себя растворимые белки, муцин и мембраной связаны муцин. Слезы предотвращения вторжения микробов, поставки питательных веществ и обеспечивают смазку поверхности глаза. Слезы действовать как интерфейс между воздухом и ткани для транспорта кислорода к роговице. ¹ слезной пленки состоит из белков, углеводов, липидов и электролитов. Ассоциация между слезоточивый белки с глазной и соматических заболеваний, как глаукома, заболевания сухой глаз, весеннем конъюнктивите, сахарный диабет, офтальмопатии связанных с щитовидной железы и рака была обнаружена в нескольких исследованиях. ² ^, ³ ^, ⁴ слезоточивый образцы могут быть собраны, микрокапиллярной трубы или разрыв потока полосы (Ширмер полоски). Кроме того Ширмер испытаний является стандартной процедурой в роговице и рефракционной хирургии клиники, результаты которого могут использоваться для анализа анализов цитокина. Неинвазивная проб, доступность био-образца и Ассоциация слезоточивый композиции с различных физиологических и патологических условиях сделать слезной пленки потенциальным источником биомаркеров для нескольких глазных и соматических заболеваний. ⁴ ^, ⁵ ^, ⁶

Слеза цитокинов играет важную роль в изучении глазной поверхности здоровья и воспалительных процессов различных глазных заболеваний. ⁷ аномальные концентрации ряда цитокинов в образцах слезоточивый сообщалось ассоциироваться с сухой глаз болезни, весенний кератоконъюнктивит (VKC), атопический кератоконъюнктивит (АКС), сезонный аллергический конъюнктивит и увеита. ⁸ ^, ⁹ ^, ¹⁰ ^, ¹¹ ^, ¹² ^, ¹³ слезоточивый белки могут быть проанализированы традиционными методами как масс-спектрометрии, Западный blotting и энзим соединенный иммуноферментного анализа (ИФА). ¹⁴ ^, ¹⁵ однако ограничения этих методов являются бедные чувствительность и больший объем выборки, необходимых для анализа нескольких слезоточивый цитокинов у каждого пациента. ¹⁶ ^, ¹⁷ мультиплекс анализов шарик на основе разработаны для анализа нескольких аналитов в сложной смеси образцов и успешно применяется на слезоточивый образцы для анализа нескольких цитокинов в различных заболеваний. ⁶ ^, ¹⁸ A сочетание сэндвич ELISA и потока цитометрии методы позволяют эти анализы стать более чувствительными, чем ELISA для количественного определения нескольких аналитов в одном образце. ¹⁹ этот метод может применяться на различных клинических образцов и supernatants культуры клеток и помогает в изучении иммунных реакций в некоторых патофизиологических условий. ²⁰ ^, ²¹ ^, ²² ^, ²³ ^, ²⁴

Есть несколько исследований, сравнение шарик на основе мультиплекс assays ELISA и сообщили о корреляции между методами. Лоо et al. по сравнению шарик на основе мультиплекс пробирного с обычными ELISA для обнаружения адипонектина, resistin, лептина и Грелин в образцах сыворотки или плазмы и сообщил сильная корреляция (r > 0,9) между анализов. ²⁵ Dupont et al. сообщили сильная корреляция между мультиплекс шарик на основе анализов и ELISA для обнаружения ИЛ 1β, Ил-4, Ил-5, IL-6, Ил-10, ИФН ϒ и ФНО α в фитогемагглютинина и липополисахарида стимулировали цельной крови собранные из беременных женщин. ²⁶ Пикеринг et al. сообщили еще сильная корреляция между шарик на основе мультиплекс пробирного и ELISA для обнаружения сыворотке антител к гемофилического гриппа типа b полисахарид (r = 0,96), анатоксинов Столбнячная палочка (r = 0,96) и Corynebacterium diphtheriae (r = 0,91). ²⁷ Бьяджини et al. сообщили высокая положительная корреляция (r = 0.852) между шарик на основе мультиплекс пробирного и ELISA для обнаружения Bacillus anthracis анти PA IgG в образцах сыворотки. ²⁸ Wang et al. сообщили корреляцию между шарик на основе мультиплекс пробирного и ELISA для обнаружения болезни Альцгеймера биомаркеров амилоид β 42 (r = 0,77), Общая Тау (r = 0,94) и Тау фосфорилированных на аминокислоты 181 (r = 0,82) в образцов спинномозговой жидкости. ²⁹ эти исследования продемонстрировали, что применимость шарик мультиплекс анализов на основе различных клинических образцов, меньшего объема требований образца и корреляция с стандартным ELISA, которые делают мультиплекс анализов шарик на основе перспективных альтернативой для традиционных методов ELISA для обнаружения нескольких аналитов в различных типов образцов в различных заболеваний фенотипов. Здесь мы описываем стандартизированный протокол для бисера на основе мультиплекс assay для цитокина профилирования для 41 аналитов в пробах слезоточивый из здоровых испытуемых с помощью Ширмер полоски.