Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Моделирование амилоид β42 токсичности и нейродегенеративные в мозге взрослого данио рерио

10.5K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/56014

⸱

25 октября 2017 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1German Centre for Neurodegenerative Diseases (DZNE) Dresden within Helmholtz Association, 2B CUBE, Center for Molecular Bioengineering, Technische Universität Dresden, 3Center for Regenerative Therapies Dresden (CRTD), TU Dresden

В этой статье

Краткое содержание

Этот протокол описывает синтеза, характеристика и инъекции мономерных амилоид β42 пептидов для генерации амилоида токсичности в взрослых рыбок данио создать модель болезни Альцгеймера, следуют гистологического анализа и обнаружения агрегатов.

Аннотация

Болезнь Альцгеймера (AD) — изнурительных нейродегенеративных заболеваний, в котором накопление токсичных амилоид β42 пептидов (Aβ42) приводит к синаптических дегенерации, воспаление, нейронов смерть и обучения дефицита. Люди не регенерировать потерянные нейронов в случае объявления в части из-за нарушения пролиферативной способности нервных стволовых/прогениторных клеток (NSPCs) и снижение нейрогенез. Таким образом эффективный регенеративной терапии следует также расширять распространение и нейрогенных емкость NSPCs. данио рерио (Danio рерио) регенеративный организм, и мы можем узнать основные молекулярные программы, с которыми мы могли бы дизайн терапевтические подходы к решению AD. По этой причине необходимо поколения модель AD-как в данио рерио. С помощью нашей методологии, мы можем ввести синтетические производные Aβ42 пептид с проникающей способностью ткани в мозге взрослого данио рерио и анализировать заболевания патология и восстановительной реакции. Преимуществом над существующими методами или Животные модели является то что у рыбок данио могут научить нас, как позвоночных мозг может естественно регенерации и тем самым помочь нам для лечения человека нейродегенеративные заболевания лучше по ориентации эндогенного NSPCs. Таким образом модель амилоид токсичность, в головном мозге взрослых рыбок данио могут открыть новые возможности для исследований в области нейробиологии и клинической медицины. Кроме того простое выполнение этого метода позволяет для затратоэффективной и действенной экспериментальной оценки. Эта рукопись описывает синтеза и инъекции Aβ42 пептидов в zebrafish мозга.

Введение

AD-это хроническое прогрессирующее заболевание, характеризующееся потерей нейронов и синапсы в коре1,2,3,4,5. Классическая патологического отличительными чертами AD являются отложением амилоида пептидов и формирования нейрофибриллярных связок (NFTs)6. Старческий таблички, также известный как амилоидных бляшек, состоят из пептидов амилоид β (значения), образующих β-плиссе структур в паренхиме мозга5. Накопление Aβ42 в больных ад имеет раннего и решающую роль в болезни. AD запускает каскад событий, приведших к синаптических дисфункции, нарушение пластичности и нейрональных потери7,8,9,10.

Взрослого мозга костистых данио рерио служит прекрасной моделью для изучения регуляции стволовых клеток пластичности11,12,13,14,15, 16,17,18,,1920 и различных заболеваний центральной нервной системы (ЦНС), включая объявление21,22,23 ,24. Из-за широкий спектр доступных экспериментальные методы19,20,25,26,27,28,29, 30 , 31, эти исследования являются информативными и осуществимым. Данио рерио может пополнить ЦНС13,15,,3233,34,35,36,37, 38, частично с помощью молекулярных программ активируется после нейрональных потери19,39,40,41,,4243, 44. Таким образом создание модели нейродегенеративные заболевания в zebrafish может помочь адрес Роман вопросы относительно регенеративной способности и стволовых клеток биологии позвоночных мозги.

Недавно мы разработали модель амилоида токсичности в мозге взрослого данио рерио путем инъекций синтетических Aβ42 пептидов (Таблица 1)39. Это инъекции вызвало нейродегенеративные фенотипов напоминает патологии мозга человека (например, смерть клетки, микроглии активации, синаптических дегенерация и дефицита памяти), указав, что у рыбок данио могут быть использованы для выявления нейродегенеративные в мозге данио рерио, Aβ42, пептиды могут быть обнаружены с stainings иммуногистохимии и молекулярные механизмы регенерации в взрослых рыбок данио, ЦНС могут быть определены39. В этом протоколе мы демонстрируем инъекции синтетических пептидов амилоида в мозг данио рерио, с помощью которых инъекции (CVMI) метод27,,3945,46 для имитации осаждения амилоида (рис. 1). CVMI предоставляет новый способ доставки пептиды, которые совокупности после инъекции как β-лист структур и оказывать токсическое воздействие. Пептиды распределяются равномерно по всему мозгу, ориентация желудочков район вдоль всей rostro хвостового оси45. Кроме того этот метод позволяет для анализа морфологических и молекулярной реакции NSPCs в мозге взрослого данио рерио, после амилоида включений. Такие исследования даст нам представление для ремонта успешной мозга млекопитающих. Наш метод может использоваться для понимания необходимости молекулярный механизм успешной регенерации ответ после AD-подобные симптомы побудить пополнения потеряли нейронов и функциональное восстановление.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

этот протокол является стандартной процедуры, предложенные руководящие принципы ЕС (2010/63) и Европейского общества для моделей рыбы в биологии и медицине (EuFishBioMed) в Карлсруэ институт технологии (комплект). Все методы, описанные после здесь были утверждены Комиссией по этике (Landesdirektion Дрезден; номер документа TVV-52/2015).

1. Подготовка Aβ42 пептид

  1. синтезируют пептидов (см. таблицу 1) с помощью химии стандартный 9-fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc) с 2-(1H-benzotriazol-1-yl)-1,1,3,3- tetramethyluronoiumhexafluorphosphate (HBTU) как муфта реагента на автоматизированных твердофазный пептид синтезатор 52. Масштаб синтеза был 100 мкмоль.
  2. Загрузить автоматизированных пептид синтезатор с 500 мг Fmoc защитой смолы как твердой фазы (грузоподъемность 0,2 ммоль/г). Загрузить растворенных Fmoc защищенный аминокислоты в концентрации 0,5 М в необходимого объема и рассчитывается для соответствующего синтезатор.
    Примечание: Расчеты выполнены для включения сцепления каждой аминокислоты Fmoc защищенный дважды с 5 раз избыток каждого строительного блока смолой 47.
  3. Распустить необходимые Реагенты синтеза пептида в dimethlyformamide (DMF). Например, подготовить активатор, HBTU, в концентрации 0,48 М, 45% v/v N-Methylmorpholine (НММ) (база) и 5% v/v ангидрида уксусной кислоты (укупорки смесь) крышка не отреагировал аминогруппами.
  4. Расщеплять все пептидов из смолы, постоянно смешивая твердой поддержки, с помощью мешалкой в свежеприготовленные расщепления смесь, состоящую из Trifluoroacetic кислоты (ТФК): Triisopropylsilane(TIS): вода: Дитиотреитол (DTT) 90 (v/v): 5 (v/v): 2.5 (v/v): 2.5 (m/v), за 4 ч. использовать 10 мл для синтеза масштаб 100 мкмоль.
  5. Осадок рассеченного продукт путем добавления расщепления смесь 100 мл ледяной диэтиловом эфире. Пройти через блок фильтрации, содержащие политетрафторэтилен (ПТФЭ) фильтр с размером пор 0,45 мкм и мыть с 20 мл ледяной диэтиловом эфире.
  6. Собирать отфильтрованных пептид из фильтр-бумаги и Растворите 100 мг осажденный пептида в 5 мл дистиллированной деионизированной воды: Ацетонитрил 1:1.
  7. Очистить через реверс фазы высокого давления жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на полу препаративные ВЭЖХ с пористой полистирола дивинилбензолом столбец шарик размером 10 мкм.
    1. Нагреть столбце и поддерживать при 50 ° C, с помощью столбца Отопление устройства. Собрать всех основных фракций, с использованием автоматизированных часть коллектора, применяя градиент от 5% до 100% растворителем B свыше 25 мин на 4 мл/мин
      Примечание: Растворителей является 0,1% TFA в воде и растворителях B составляет 0,1% TFA в ацетонитриле 52.
    2. Мониторинг Хроматограмма на 220 Нм, собирать соответствующие вершины и анализировать с помощью LC-г-жа
  8. Подтверждение чистоты путем аналитических обратной фазы сверхвысокого давления жидких хроматографии (UPLC) на 220 Нм путем мониторинга с УФ детектор проходя образца через столбец аналитической C18 (бисера Размер 1.7 мкм). Подтвердите продукт пептид, масс-спектрометрия.
    Примечание: UPLC сочетании электроспрей ионизационная масс-спектрометрия (ESI-МС) и детектор тандем квадрупольного.
  9. Lyophilize правильные дроби желаемого пептида в колбе круглым дном, применяя вакуум 0,052 мбар, пушистые порошок. Пара вакуумный насос к блоку замораживания, поддерживается в магазине-78 ° C. при температуре-80 ° C, бесконечно.
  10. Использовать лиофилизированные пептид подготовить раствор 1 мм в смеси Ацетонитрил: ДМФ: чда водой 1:1:1 для экспериментов. Этот раствор можно хранить по крайней мере 6 месяцев, как пептиды не объединить в этом растворе.

2. Подготовка смеси инъекций

  1. подготовить фосфат амортизированное saline (PBS) (137 мм NaCl, 2,7 мм KCl, 10 мм Na 2 HPO 4, 2 мм х 2 PO 4, рН 7,4) для разбавления лиофилизированный пептидов.
  2. Распустить пептида в конечной концентрации 20 мкм в PBS. Подготовьте этот свежий раствор. Хорошо перемешать и хранить на льду до инъекции. Не превышать 30 мин для предотвращения агрегации в растворе.

3. Анестезия

  1. подготовить раствор анестетиков, 0.1% этиловый m аминобензоат Метансульфонат (MESAB), в воде регулярных рыбы от циркулирующих системы. Приготовляют раствор обезболивания до конечной концентрации 0,0025% (v/v).
  2. Удалить необходимое количество рыбы из их танки в контейнер с 5 Л воды системы транспорта.
  3. Половину заполнить пластиковый Петри (90 мм) с 40 мл анестетиков. Используйте это блюдо для инъекций.
  4. Инкубировать рыбы в обезболивающих средств, до тех пор, пока opercular движение прекратилось.

4. Микроинъекции которых

  1. Подготовка аппарата инъекций
    1. подготовить стекла инъекции капилляров с помощью иглы съемник со следующими параметрами: Отопление цикла, 537; потянув цикла, 250 скорость, 1.5 s; время, 80 г-жа
    2. принести давления на источнике давления до 25 psi.
    3. Microinjector параметры присвоено следующее: удерживать давление 20 psi; извлечь давление 10 psi; значение периода 2,5; стробирования значение 100 г-жа
    4. Загрузить стеклянный капилляр с инъекционного раствора. Вставьте держатель микроинъекции стеклянный капилляр. Отрегулируйте угол впрыска до 45°.
      Примечание: Более подробные протоколы можно найти как описано в ссылки 27 , 46.
  2. Место одной рыбы в новой Петри заполнены раствором обезболивания (как и шагу 3.3).
  3. Удержать рыбу с щипцами и ориентации для инъекций.
  4. Генерировать щели с помощью кончика иглой 30 G в череп через оптические tectum где встречаются две боковые пластины. Не вводите наконечник в ткани мозга, это приведет к кровотечение и повреждения. Просмотреть ссылки 27 , 45 , 46 для получения дополнительных сведений.
  5. Вставьте стеклянный капилляр в слите.
    1. Использовать только кончик иглы и не проникают более чем на 1 мм через череп. Продолжайте удерживать рыбу и вставить кончик стеклянный капилляр через сайт разрез.
    2. Ориент кончик стеклянный капилляр направлении конечного мозга под углом 45°. Придать 1 мкл раствора. Жидкости рассеивается сразу же после инъекции.

5. Восстановление

  1. место, рыбу обратно в транспортировочный контейнер до тех пор, пока она восстанавливается. Подключите контейнер к регулярно циркулирующей воды рыбы для обеспечения оптимального воды качества.
    Примечание: Восстановление обычно должен занять 1 мин. Если это занимает больше времени, рыба должна храниться в анестетиков за более короткое время (это должен быть оптимизирован экспериментатор).

6. Подготовка тканей и Sectioning

  1. ожидания за желаемый период времени перед жертвуя рыба.
    Примечание: Это зависит от экспериментальных вопрос. Амилоида осаждения может рассматриваться как 1 день после инъекций.
  2. Пожертвовать рыбы, с использованием соответствующего метода в зависимости от этических правил (например, лечить рыбу с 0,1 М MESAB).
  3. Разрезать черепа выше оптические tectum, используя острый forcep на спинной стороне и вскрыть голову позади грудных плавников, с помощью скальпеля.
  4. Исправить головы, с использованием 2% параформальдегида (PFA) на ночь при 4 ° C. Использование 3 мл PFA душу в пластиковую трубку с винтовой крышкой.
    Предупреждение: Носить надлежащие средства личной защиты, при обработке PFA.
  5. Для криозащиты и декальцинации, моют головы трижды в 0,1 М фосфатного буфера (рН 7,4), затем передать их в раствор 20% sucrose/20% этилендиаминтетрауксусная (ЭДТА) и инкубировать на ночь при 4 ° C.
  6. Для внедрения в ткани в резании смолы, заморозить головы в gelatin/20% 7,5% раствора сахарозы в пластиковых гистология плесени на сухой лед (примерно 3-5 мин до замораживания блок). Хранение образцов-80 ° C или продолжать к следующему шагу (cryosectioning).
  7. Раздел главы в 12 мкм толщиной cryosections с помощью криостата как описано 28 , 42. Передача cryosections непосредственно на стеклянных вставках и хранить при температуре-20 ° C для долгосрочного использования.

7. Иммуногистохимическое окрашивание и микроскопии

Примечание: выполнить все шаги инкубации в камере увлажненной. И, все шаги стиральных за 10 мин.

  1. Сухие разделы для 30 мин при комнатной температуре. После оттаивания, мыть разделы дважды в PBS и один раз в PBSTx (PBS с 0,03% Тритон X-100).
  2. Инкубировать с основного антитела (антитела анти Aβ42; 1: 500 разрежения в PBSTx) на 4 ° C ночь. следующий день, мыть раз в PBS и дважды в PBSTx.
  3. Инкубировать секции с вторичное антитело (сочетании флуоресценции обнаружения, разведение 1: 500) наряду с DAPI (1 мкг/мл) в PBSTx втечение 2 ч при комнатной температуре.
  4. Мыть три раза в PBSTx. После окончательной стирки, смонтировать слайды с coverslip, с использованием 100 мкл 70% глицерина.
  5. Приобретать флуоресцентного изображения с помощью конфокального микроскопа (например, с цель 20 X PL н.а. АПО 0,7 с 488 возбуждения спектра и стандартный зеленый фильтр; Рисунок 2) 39.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

ВЭЖХ была использована для того чтобы очистить синтезированных пептидов и масс-спектрометрии была использована для характеризовать очищенный амилоида β пептиды. Столбце ВЭЖХ нагревается до 50 ° C для улучшения разделения значения пептидов и были собраны все фракции. Чтобы определить правильно синтезированных пептидов, масс-спектроскопии анализ проводился для всех фракций. Хроматограмма UPLC показывает чистоту соединения. ВЭЖХ фракции, которые принесли один пик на UPLC (т.е., прав...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Амилоида пептиды могут быть изменены для включения изменения последовательности или различные теги. К примеру кинулись амилоида пептид может быть создан, и пептиды могут быть помечены флуоресцентные метки в N-terminus конца пептид или отмеченных перевозчик пептиды39. Аналогичным образом в настоящем Протоколе, пептида перевозчика является ячейка проникая пептида TR из-за его эффективности для перевозки грузов глубоко в ткани мозга39. Кроме того наш метод позволяет для инъекц...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не имеют ничего сообщать

Благодарности

Эта работа была поддержана DZNE и Гельмгольца (VH-NG-1021), КГПОГ, ту Дрезден (ФЗ-111, 043_261518) и DFG (KI1524/6) (C.K.); Лейбница (пила-2011-ОПЗ-2) и BMBF (BioLithoMorphie 03Z2E512) (ВМФ). Мы также хотели бы поблагодарить Ulrike Hofmann пептидного синтеза, а также Nandini Asokan, Праяг Murawala и Элли Танака за помощь во время съемок процедура.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Fmoc-защищенные аминокислотыIRIS Biotech GmbH (Марктредвиц, Германия)Аминокислоты на основе Fmoc для синтеза твердофазных пептидов (SPPS)
N,N,N′,N′-тетраметил-O-(1H-бензотриазол-1-ил)гексафторфосфат урония (HBTU)IRIS Biotech GmbH (Марктредвиц, Германия)RL-1030Активатор
OxymaIRIS Biotech GmbH (Марктредвиц, Германия)RL-1180Супрессор рацемизации
N,N-диизопропилэтиламинIRIS Biotech GmbH (Марктредвиц, Германия)SOL-003Основание
диметилформамидаIRIS Biotech GmbH (Марктредвиц, Германия)SOL-004Растворитель
N-метилморфолинThermo Fisher (Kandel) GmbH, ГерманияA12158Основание
1-гидроксибензотриазола гидрат (HOBT)Sigma-Aldrich Co. LLC. ( Сент-Луис, Миссури, США)157260ALDRICH Активатор
пиперидинMERCK KGaA (Дармштадт, Германия)822299Реагент для снятия защиты Fmoc
Дихлорметан (DCM)MERCK KGaA (Дармштадт, Германия)106050Сольвент
муравьиной кислоты (FA)MERCK KGaA (Дармштадт, Германия)100264Буферный компонент для ВЭЖХ
Трифторуксусная кислота (ТФ)MERCK KGaA ( Darmstadt, Германия)808260Реагент Clevage Mix
Триизопропилсилан (TIS)MERCK KGaA (Дармштадт, Германия)233781 ALDRICHClevage Mix реагент
ацетонитрил (для UPLC/LCMS)Sigma-Aldrich Laborchemikalien GmbH34967-1LРастворитель
ацетонитрил (для ВЭЖХ)VWR International Ltd, Англия83639.320Растворитель
DiethyletherVWR International Ltd, Англия23811.326Растворитель для осаждения пептидов
Dithiotritol (DTT)VWR International Ltd, Англия0281-25GClevage Mix реагент
TentaGel S RAM rink rink amide resinRapp Polymere GmbH (Tuebingen, Германия)S30023Твердофазный для SPPS
синтез пептидов 5 мл шприцы с включенными фильтрамиIntavis AG (Кёльн, Германия)34.274Реакционная трубка для СППС и для клевы из твердофазного
политетрафторэтиленового (ПТФЭ) фильтраSartorius Stedtim (Обань, Франция)11806-50-NФильтрация осажденных пептидов
поливинилиденфторида (ПВДФ) шприцевой фильтрCarl Roth GmbH + Co. KG KarlsruheKC78.1Предварительная фильтрация для
синтезатора пептидовIntavis, Кёльн, ГерманияResPep SLАвтоматизированный синтезатор твердофазных пептидов
Water Alliance HPLCWaters, Милфорд Массачусетс, СШАWaters 2998, Waters e2695Полупрепаративная обратная фазовая жидкостная хроматография высокого давления (ВЭЖХ)
PolymerX, размер гранул 10&мкм; m, 250x10 ммPhenomenex Ltd. Германия00G-4328-N0Колонка ВЭЖХ из пористого полистирола дивинилбензола
Milli-Q Advantage A10, с фильтром Milli-QEMD Millipore Corporation, Billerica, MA, США LCPAK0001Система очистки воды
Фильтрационная установкаSartorius Stedtim (Обань, Франция)16307Установка фильтрации для осаждения пептидов
UPLC Aquity с УФ-детекторомУотерс, Милфорд Массачусетс, СШАM09UPA 664MАналитический ультрафазовый ультра ВЭЖХ для ЖХ-МС
ACQUITY UPLC BEH C18, размер валика 1,7 μ m, 50x2,1 ммWaters, Милфорд Массачусетс, США186002350 Аналитическая колонка C18
Детектор ACQUITY TQWaters, Милфорд Массачусетс, СШАQBB908Электрораспылительная ионизационная масс-спектрометрия (ESI-MS)
CHRIST ALPHA 2-4 LD plus + vacuubrand RZ6Martin Christ Gefriertrocknungsanlagen GmbH, Германия16706, 101542Лиофилизатор с вакуумным насосом
Paradigm plate readerBeckman Coulter
MESAB (этил-м-аминобензоат метасульфонат)Sigma-AldrichA5040
Чашки ПетриSarstedt821.472
Фосфатно-солевой буферLife Technologies, GIBCO10010-056
ИглаBecton-Dickinson305178
Препарирующий микроскопOlympus, Leica, Zeissварьируется от производителя
Dumont TweezersWorld Precision Instruments501985
Gillies Dissecting ЩипцыWorld Precision Instruments501265
Glass injection капиллярыWorld Precision InstrumentsTWF10
PicoNozzleWorld Precision Instruments5430-12
Пневматический кольцевой осветитель PicoPumpWorld Precision InstrumentsSYS-PV820
; Кольцевой световодParkland ScientificILL-RLG
CryostatLeicaCM1950
ВЭЖХ

Ссылки

  1. LaFerla, F. M., Green, K. N. Animal models of Alzheimer disease. Cold Spring Harb Perspect Med. 2 (11), (2012).
  2. Selkoe, D. J. Alzheimer's disease: genes, proteins, and therapy. Physiol Rev. 81 (2), 741-766 (2001).
  3. Serpell, L. C. Alzheimer's amyloid fibrils: structure and assembly. Biochim Biophys Acta. 1502 (1), 16-30 (2000).
  4. Beyreuther, K., Masters, C. L. Alzheimer's disease. The ins and outs of amyloid-beta. Nature. 389 (6652), 677-678 (1997).
  5. Glenner, G. G., Wong, C. W. Alzheimer's disease: initial report of the purification and characterization of a novel cerebrovascular amyloid protein. Biochem Biophys Res Commun. 120 (3), 885-890 (1984).
  6. Blennow, K., de Leon, M. J., Zetterberg, H. Alzheimer's disease. Lancet. 368 (9533), 387-403 (2006).
  7. Hardy, J. The amyloid hypothesis for Alzheimer's disease: a critical reappraisal. J Neurochem. 110 (4), 1129-1134 (2009).
  8. McGowan, E., et al. Abeta42 is essential for parenchymal and vascular amyloid deposition in mice. Neuron. 47 (2), 191-199 (2005).
  9. Hardy, J., Selkoe, D. J. The amyloid hypothesis of Alzheimer's disease: progress and problems on the road to therapeutics. Science. 297 (5580), 353-356 (2002).
  10. Tincer, G., Mashkaryan, V., Bhattarai, P., Kizil, C. Neural stem/progenitor cells in Alzheimer's disease. Yale J Biol Med. 89 (1), 23-35 (2016).
  11. Diotel, N., et al. Effects of estradiol in adult neurogenesis and brain repair in zebrafish. Horm Behav. 63 (2), 193-207 (2013).
  12. Grandel, H., Brand, M. Comparative aspects of adult neural stem cell activity in vertebrates. Dev Genes Evol. 223 (1-2), 131-147 (2013).
  13. Kizil, C., Kaslin, J., Kroehne, V., Brand, M. Adult neurogenesis and brain regeneration in zebrafish. Dev Neurobiol. 72 (3), 429-461 (2012).
  14. Diotel, N., et al. Cxcr4 and Cxcl12 expression in radial glial cells of the brain of adult zebrafish. J Comp Neurol. 518 (24), 4855-4876 (2010).
  15. Zupanc, G. K. Adult neurogenesis and neuronal regeneration in the brain of teleost fish. J Physiol Paris. 102 (4-6), 357-373 (2008).
  16. Adolf, B., et al. Conserved and acquired features of adult neurogenesis in the zebrafish telencephalon. Dev Biol. 295 (1), 278-293 (2006).
  17. Grandel, H., Kaslin, J., Ganz, J., Wenzel, I., Brand, M. Neural stem cells and neurogenesis in the adult zebrafish brain: origin, proliferation dynamics, migration and cell fate. Dev Biol. 295 (1), 263-277 (2006).
  18. Kaslin, J., Ganz, J., Brand, M. Proliferation, neurogenesis and regeneration in the non-mammalian vertebrate brain. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 363 (1489), 101-122 (2008).
  19. Alunni, A., Bally-Cuif, L. A comparative view of regenerative neurogenesis in vertebrates. Development. 143 (5), 741-753 (2016).
  20. Than-Trong, E., Bally-Cuif, L. Radial glia and neural progenitors in the adult zebrafish central nervous system. Glia. 63 (8), 1406-1428 (2015).
  21. Santana, S., Rico, E. P., Burgos, J. S. Can zebrafish be used as animal model to study Alzheimer's disease? Am J Neurodegener Dis. 1 (1), 32-48 (2012).
  22. Newman, M., Verdile, G., Martins, R. N., Lardelli, M. Zebrafish as a tool in Alzheimer's disease research. Biochim Biophys Acta. 1812 (3), 346-352 (2010).
  23. Paquet, D., et al. A zebrafish model of tauopathy allows in vivo imaging of neuronal cell death and drug evaluation. J Clin Invest. 119 (5), 1382-1395 (2009).
  24. Xi, Y., Noble, S., Ekker, M. Modeling neurodegeneration in zebrafish. Curr Neurol Neurosci Rep. 11 (3), 274-282 (2011).
  25. Barbosa, J. S., et al. Live imaging of adult neural stem cell behavior in the intact and injured zebrafish brain. Science. 348 (6236), 789-793 (2015).
  26. Dray, N., et al. Large-scale live imaging of adult neural stem cells in their endogenous niche. Development. 142 (20), 3592-3600 (2015).
  27. Kizil, C., Brand, M. Cerebroventricular microinjection (CVMI) into adult zebrafish brain is an efficient misexpression method for forebrain ventricular cells. PLoS One. 6 (11), e27395(2011).
  28. Chapouton, P., Godinho, L. Neurogenesis. Methods Cell Biol. 100, 73-126 (2010).
  29. Chen, C. H., Durand, E., Wang, J., Zon, L. I., Poss, K. D. zebraflash transgenic lines for in vivo bioluminescence imaging of stem cells and regeneration in adult zebrafish. Development. 140 (24), 4988-4997 (2013).
  30. McKenna, A., et al. Whole-organism lineage tracing by combinatorial and cumulative genome editing. Science. 353 (6298), (2016).
  31. Mokalled, M. H., et al. Injury-induced ctgfa directs glial bridging and spinal cord regeneration in zebrafish. Science. 354 (6312), 630-634 (2016).
  32. Kishimoto, N., Shimizu, K., Sawamoto, K. Neuronal regeneration in a zebrafish model of adult brain injury. Dis Model Mech. 5 (2), 200-209 (2012).
  33. Fleisch, V. C., Fraser, B., Allison, W. T. Investigating regeneration and functional integration of CNS neurons: lessons from zebrafish genetics and other fish species. Biochim Biophys Acta. 1812 (3), 364-380 (2010).
  34. Chapouton, P., Jagasia, R., Bally-Cuif, L. Adult neurogenesis in non-mammalian vertebrates. Bioessays. 29 (8), 745-757 (2007).
  35. Becker, T., et al. Readiness of zebrafish brain neurons to regenerate a spinal axon correlates with differential expression of specific cell recognition molecules. J Neurosci. 18 (15), 5789-5803 (1998).
  36. Rothenaigner, I., et al. Clonal analysis by distinct viral vectors identifies bona fide neural stem cells in the adult zebrafish telencephalon and characterizes their division properties and fate. Development. 138 (8), 1459-1469 (2011).
  37. Marz, M., Schmidt, R., Rastegar, S., Strahle, U. Regenerative response following stab injury in the adult zebrafish telencephalon. Dev Dyn. 240 (9), 2221-2231 (2012).
  38. Kroehne, V., Freudenreich, D., Hans, S., Kaslin, J., Brand, M. Regeneration of the adult zebrafish brain from neurogenic radial glia-type progenitors. Development. 138 (22), 4831-4841 (2011).
  39. Bhattarai, P., et al. IL4/STAT6 signaling activates neural stem cell proliferation and neurogenesis upon Amyloid-β42 aggregation in adult zebrafish brain. Cell Reports. 17 (4), 941-948 (2016).
  40. Cosacak, M. I., Papadimitriou, C., Kizil, C. Regeneration, Plasticity, and Induced Molecular Programs in Adult Zebrafish Brain. Biomed Res Int. , (2015).
  41. Kizil, C., et al. The chemokine receptor cxcr5 regulates the regenerative neurogenesis response in the adult zebrafish brain. Neural Dev. 7, 27(2012).
  42. Kizil, C., et al. Regenerative neurogenesis from neural progenitor cells requires injury-induced expression of Gata3. Dev Cell. 23 (6), 1230-1237 (2012).
  43. Kyritsis, N., et al. Acute inflammation initiates the regenerative response in the adult zebrafish brain. Science. 338 (6112), 1353-1356 (2012).
  44. Katz, S., et al. A Nuclear Role for miR-9 and Argonaute Proteins in Balancing Quiescent and Activated Neural Stem Cell States. Cell Rep. 17 (5), 1383-1398 (2016).
  45. Kizil, C., et al. Efficient cargo delivery using a short cell-penetrating peptide in vertebrate brains. PLoS One. 10 (4), e0124073(2015).
  46. Kizil, C., Iltzsche, A., Kaslin, J., Brand, M. Micromanipulation of gene expression in the adult zebrafish brain using cerebroventricular microinjection of morpholino oligonucleotides. J Vis Exp. (75), e50415(2013).
  47. Sewald, N., Jakubke, H. Peptides: Chemistry and Biology. , Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA. (2009).
  48. Beyer, I., et al. Solid-Phase Synthesis and Characterization of N-Terminally Elongated Abeta-3-x -Peptides. Chemistry. 22 (25), 8685-8693 (2016).
  49. Zheng, Y., et al. Kinesin-1 inhibits the aggregation of amyloid-beta peptide as detected by fluorescence cross-correlation spectroscopy. FEBS Lett. 590 (7), 1028-1037 (2016).
  50. Balducci, C., Forloni, G. In Vivo Application of Beta Amyloid Oligomers: a Simple Tool to Evaluate Mechanisms of Action and New Therapeutic Approaches. Curr Pharm Des. 20 (15), 2491-2505 (2013).
  51. Schiffer, N. W., et al. Identification of anti-prion compounds as efficient inhibitors of polyglutamine protein aggregation in a zebrafish model. J Biol Chem. 282 (12), 9195-9203 (2007).
  52. Wieduwild, R., Tsurkan, M., Chwalek, K., Murawala, P., Nowak, M., Freudenberg, U., Neinhuis, C., Werner, C., Zhang, Y. Minimal peptide motif for non-covalent peptide-heparin hydrogels. Journal of the American Chemical Society. 135 (8), 2919-2922 (2013).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Амилоид-бета 42синтез пептидовметод микроинъекцийконфокальная микроскопиянейральные стволовые клеткимодель болезни Альцгеймераочистка методом ВЭЖХпротокол лиофилизациифлуоресцентное окрашивание
Моделирование амилоид β42 токсичности и нейродегенеративные в мозге взрослого данио рерио
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.