Методическая статья

Изоляции клеток эндотелия прародителем от человеческой пуповинной крови

DOI:

10.3791/56021

⸱

14 сентября 2017 г.

 ,  , 
1Department of Biomedical Engineering, University of Arkansas

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Цель настоящего Протокола заключается в изоляции эндотелиальной прогениторных клеток из пуповинной крови. Некоторые из приложений включают, используя эти клетки в качестве биомаркеров для выявления пациентов с сердечно-сосудистого риска, лечение ишемической болезни, и создание ткани инженерии сосудов и сердца клапан конструкций.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Существование эндотелиальной прогениторных клеток (ПЭК) в периферической крови и ее участие в vasculogenesis был впервые сообщил Ашара и коллеги-1. Позже другие документированы существование аналогичных типов Пэк, происходящих из костного мозга2,3. Совсем недавно Йодер и Ингрэм, показал, что Пэк вытекает из пуповинной крови был выше пролиферативный потенциал, по сравнению с них изолированы от взрослого периферической крови4,5,6. Помимо участия в послеродовом vasculogenesis, Пэк также показали обещание как источник клеток для создания ткани инженерии сосудов и сердца клапан конструкции7,8. Существуют различные протоколы изоляции, некоторые из которых связаны с сортировки мононуклеарных клеток (МНК), полученные из источников, упомянутых ранее с помощью маркеров эндотелиальной и гемопоэтических клеток, или культивирование эти МНК с специализированный эндотелиальной роста Средний, или сочетание этих методов9. Здесь, мы представляем собой протокол для изоляции и культуры ПЭК с помощью специализированных эндотелиальной среднего дополнена факторов роста, без использования immunosorting, следуют характеристика изолированных клеток, используя Западный blotting и иммуноокрашивания.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Некоторые следователи изучили характеристики и потенциал человека Пэк5,10,11,12,13. Пэк может быть описана как циркулирующих клеток, которые имеют возможность присоединиться к эндотелиальной тканей в местах гипоксии, ишемии, травмы или образования опухоли и способствовать формированию новых сосудистых структур4,14. Их наблюдаемых участие в неоваскуляризация, в форме послеродовой vasculogenesis, привело к пониманию патофизиологии этих клеток и их использования в терапевтического применения4,15, 16. количество Пэк в лицо было показано, быть связаны с сердечно-сосудистой патологии9,,1516,,1718,19 ,20. Другие исследования также дифференцированы Пэк в клапан фибробластоподобных фенотип и предложил, что эти клетки могут использоваться для тканевой инженерии сердца клапаны7,21.

Конкретной ячейке поверхности молекул, необходимо изолировать Пэк не были четко определены из-за расхождений между исследования4. Адгезии МНК к матрице, с воздействием различных условий культуры, было выполнено несколько групп1,17,22,23, предполагая, что предполагаемый Пэк может Отображение различных фенотипических свойств. Эти свойства включают в себя отсутствие phagocytotic способности, формирования трубки в Matrigel и поглощение Dil ацетилированные уровня липопротеидов низкой плотности. Два свойства с которой Пэк может быть структурировано5высокий колониеобразования и пролиферативным потенциалом. Пэк могут также образовывать в vitro трубочки, когда cocultured с человеческих легких плода фибробластов4. Эти клетки, как известно, чтобы выразить эндотелиальных клеток поверхностных маркеров и поделиться некоторыми из гемопоэтических маркеры13,24,25. Положительно выраженное маркеров, которые широко принимаются фенотипирование Пэк, CD31, CD34, Сосудистый эндотелиальный фактор роста рецепторов 2 (VEGFR2), Виллебранда фактор (vWF), CD133, c комплект и сосудистого эндотелия Кадгерины (VE-Кадгерины)4 , 18. клетки, которые совместно Экспресс CD90, CD45, CD14, CD115 или альфа гладких мышц актина (α-SMA) не считаются Пэк из-за их ограниченного пролиферативный потенциал, способность фагоцитоз бактерий и неспособности сформировать de novo человека судов в vivo4,7. Эта статья конспектирует измененный Протокол для изоляции клеток эндотелия прародителем от человеческой пуповинной крови без необходимости в любую ячейку Сортировка протоколы. Для этой статьи мы использовали CD31, CD34 и VEGFR2 как положительных маркеров, с α-SMA как отрицательный показатель.

В этой статье мы предлагаем, что метод изоляции и культивирования эндотелиальной прогениторных клеток из пуповинной крови без ячеек, сортировка с использованием специализированных среднего роста эндотелия сосудов, дополнена факторов роста (СГЭ). Этот внеочередного общего собрания акционеров содержит Сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF) и фактор роста фибробластов (ФБП), которые увеличивают миграцию эндотелиальных клеток26выживания и распространения. Она также включает в себя аскорбиновую кислоту, которая отвечает за поддержание булыжником морфологию клеток; инсулиноподобный фактор роста-1 (ИФР-1), которая обеспечивает ангиогенных и мигрирующих функции; и гепарин, который вызывает повышение долгосрочной стабильности факторов роста в среднесрочной26. Другие факторы роста, добавляется эндотелиальных клеток питательной среды включает в себя добавки с эпидермального фактора роста (EGF), который помогает в стимулировании пролиферации и дифференциации и гидрокортизон, который знакомит клетки EGF26 . Мы покажем, что использование этой конкретной роста среднего дает более высокие числа Пэк, по сравнению с эндотелиальной базальной средний (МВБ) или Дульбекко изменение средних орла (DMEM).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

это исследование было проведено с одобрения университета Арканзас, институциональных Наблюдательный Совет (номер 16-04-722 утверждения). Были собраны в цитрата фосфат декстрозы (ДСП) на Арканзас пуповинной крови Банк пуповинной крови единиц, и подразделения, которые не отвечают требованию для хранения были пожертвованы для исследований. Пуповинной крови единиц был доставлен в лабораторию в течение 24 часов коллекции при температурах.

1. изоляция эндотелиальной прогениторных клеток из пуповинной крови

  1. Подготовка реагентов.
    1. Подготовить EGM, добавив эндотелиальной базальной среднего (МВБ) до 10% плода бычьим сывороточным (ФБС) дополнены 20 нг/мл инсулина подобный фактор роста (IGF), аскорбиновой кислоты 1 мкг/мл, 5 нг/мл рекомбинантного человеческого эпидермального фактора роста (rhEGF), 22,5 мкг/мл гепарин и 0,5 нг/мл Сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF), наряду с 10 нг/мл рекомбинантного человеческого фактора роста фибробластов B (rhFGF-B), гидрокортизон 0,2 мкг/мл и 2% пенициллин стрептомицином глутамина. Стерилизовать питательную среду, используя вакуумный фильтр мембраны Полиэфирсульфон (PES) 0,2 мкм.
    2. Подготовка крысы хвост я коллагена раствор в концентрации 50 мкг/мл, используя 0,02 N уксусной кислоты. Стерилизовать это решение, с помощью шприца фильтра 0,2 мкм.
    3. До пальто 6-ну пластины с 2 мл подготовленных крысы хвост я коллагена раствор для каждой скважины. Поместите их в инкубаторе, составляла 5% CO 2 и 37 ° C для по крайней мере 1 час перед посевом.
    4. Разбавить приблизительно 25 мл пуповинной крови с Хэнкс сбалансированный соли раствора (HBSS) в концентрации 1:1.
    5. Подготовка радио иммуно осадков пробирного буфера (RIPA), используя натрия хлорида 150 мм, 1% X-100 Тритон, Дезоксихолат натрия 0,5%, 1 мм β-метронидазол, 0.1% SDS и 50 мм трис (рН 8,0).
  2. Изоляции клеток эндотелия прародителю.
    1. Тепло все подготовленные реагентов на водяной бане, поддерживается при 37 ° C до изоляции.
    2. Добавить 20 mL реагента градиент средней плотности 50 мл пластиковых пробирок.
    3. Тщательно слоя 20 мл разбавленной пуповинной крови в пластиковых пробирок, содержащие средний градиент плотности не нарушая этот слой, стремясь пипетки на боковые стенки трубки.
    4. Отдельные компоненты крови, основанный на их плотности ( рис. 1) центрифугированием на 800 x г за 30 мин при комнатной температуре, с тормоза ротора центрифуги выкл. Не беспокоить различные слои.
    5. Удалить плазменный слой, тщательно закупорить ее из трубки не нарушая других клеток, которые слои до кончика пипетки сможет достичь НСМ слоя (см. Рисунок 1). Отбросить удалены плазмы.
      Примечание: При использовании пипетки советы для удаления плазмы, оставить небольшой слой плазмы выше MNC слоя ( рис. 1), чтобы уменьшить помехи.
    6. Собирать Баффи слой, содержащий МНК, с помощью шприца для 18-иглы и перенести его на свежий пластиковых пробирок.
    7. Добавить равное количество EBM собранных МНК. Центрифуга эти трубы на 500 x g 10 мин в 4 ° C. удалить супернатант.
      Примечание: Гранулы ячейки появится красный ввиду наличия красных кровяных клеток/эритроцитов.
    8. Добавить 5 мл раствора хлорида аммония чтобы лизировать красных кровяных клеток. Инкубировать эту трубку на льду на 5-10 мин, с время от времени встряхивая.
      Примечание: Следует проявлять осторожность во время этого шага не превышает продолжительность времени, как это может быть вредным для МНК.
    9. Центрифуга трубы на 500 g x 10 мин при температуре 4 ° C и удалить супернатант. Если сохраняются эритроцитов, повторите шаги 1.2.8 и 1.2.9 до тех пор, пока не красный цвет наблюдается в Пелле.
    10. Ресуспензируйте гранулы в подготовленных EGM и использовать Горяева для подсчета МНК.
    11. Аспирата крысы хвост я коллагена покрытием 6-ну пластины (от шага 1.1.3) и Промыть лунки три раза с 1 x фосфат амортизированное saline (PBS).
    12. Семя MNC Пелле высокомобильна в EGM коллагеновые пластины в концентрации 1 x 10-7 МНК в каждой скважине. Поместите его в 37 ° C, 5% CO 2 инкубатора.
    13. После 24 ч, аспирационная среднего и Промыть лунки с СГЭ. Добавить 3 мл EGM среды в каждой скважине и поместить его обратно в 37 ° C, 5% CO 2 инкубатора.
    14. Пополнения пластины с свежими EGM среднего каждый день в течение 7 дней. После 7 дней, изменить EGM среднего каждый день.
    15. С помощью микроскопа ярко поле, принимать образы пластину 6-ну каждый день для отслеживания прогрессирования колоний эндотелиальных клеток. Марк пластину, где колонии возникают для их роста.
      Примечание: Обычно это занимает от 5 до 9 дней для колоний в культуры.
  3. Расширение клеток эндотелия прародителю.
    1. Пальто T-25 культуры колбу с крысы хвост я коллагена (50 мкг/мл) и поместите его в 37 ° C, 5% CO 2 инкубатора для по крайней мере 60 мин аспирата и мойте колбу культуры клеток T-25 три раза с ПБС до посева клетки.
    2. Trypsinize колоний эндотелиальных клеток, когда они достигают около 3 мм в размер с помощью 150 мкл 0,05% раствор трипсина-ЭДТА в каждой скважине. Место пластину 6-Ну обратно в 37 ° C, 5% CO 2 инкубатора для 2-3 мин
    3. Легко вбейте пластину 6-ну выбить прилагаемый клетки. Сразу же добавить 2 мл внеочередного общего собрания акционеров и восстановить клетки в пластиковых пробирок 15мл.
    4. Подсчитать ячейки, используя Горяева и рассчитать Начальная плотность посева.
    5. Отжима центрифуги 15 мл трубки на 400 g x 5 мин Ресуспензируйте Пелле клеток в внеочередного общего собрания акционеров и семян T-25 колбу с ~ 500 000 ячеек. Пометить этот настой как проход 1 и место T-25 колбу обратно в 37 ° C, 5% CO 2 инкубатора.
      Примечание: Клетки может быть покрытием EBM и DMEM сравнивать рост с СГЭ.
    6. Для дальнейшего проходы, когда настой достигает 90% слияния, выполните шаги 1.3.1 - 1.3.5 и повторное заполнение ячеек на 10 4 клетки/см 2 фляги культуры клеток T-75 или T-175. Перейти к характеристике изолированных клеток (шаги 2 и 3).

2. Характеристика изолированных клеток с помощью западный Blotting

  1. Добавить лизис 50-100 мкл буфера на каждый проход, когда после расширения шаги, чтобы характеризовать изолированных клеток. Собирать белки от приблизительно 500 000 или более ячеек.
  2. Пипетка вверх и вниз энергично разрушения клеток и освободить белки. Собирать и передавать буфер пробки microcentrifuge.
  3. Спина пробки microcentrifuge на 500 x g и тщательно передать новые пробки microcentrifuge супернатант. Этикетки и хранить трубы на-80 ° C для долгосрочного хранения.
  4. Подсчитать количество белков в каждой тюбике, с помощью либо Брэдфорд ' s или BCA пробирного 27 , , 28- 29.
  5. Осуществляют западной blotting, используя стандартные процедуры 27 , , 28 29. Анализ 5 мкг общего белка для выражения CD31 и CD34, VEGFR2, α-SMA. Использовать для нормализации данных α-тубулина.

3. Непрямой иммунофлюоресценции

  1. Sonicate coverslips 18-мм стекла в 50% этанола и высушите их. Оставьте чистый coverslips в 12-ну пластины на ночь в капюшоне биобезопасности с УФ света на стерилизовать их.
  2. Пальто coverslips с 50 & #181; г/мл крысы хвост я коллагена и передачи пластины до 37 ° C, 5% CO 2 инкубатора для по крайней мере 60 мин
  3. Аспирационная коллагена и добавьте 1 mL ПБС к пластине 12-ну мыть coverslips. Аспирационная ПБС и повторять дважды.
  4. Семя 250,000 культивированный Пэк в каждой скважины и место их обратно в 37 ° C, 5% CO 2 инкубатора для по крайней мере 3 дней перед проведением иммуноокрашивания.
  5. Мыть пластину 3 раза с ПБС. Добавьте 1 mL ледяной метанола для каждой скважины и инкубировать при комнатной температуре 15 мин исправить клетки и.
  6. Проводят с использованием стандартного протокола по 27 , 28 , 29 иммуноокрашивания. Использование антител на их соответствующих разведений (например, CD31 (1:20), CD34 (1:50), α-SMA (1: 100) и VEGFR2 (1:50)).
  7. Принимать образы immunostained coverslips, с помощью эпифлуоресцентного микроскопа.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Изоляция и расширение клеток эндотелия прародителя:
Схема (рис. 1) предоставляется с изображением общий протокол. Слои компонент различных крови наблюдались следующие плотность градиентного центрифугирования человеческой пуповинной крови с средний градиент плотности. После посева МНК на коллаген лечение пластин, нарост колоний впервые наблюдалось между дней 5 и 7(Рисунок 2). Эти колонии продол...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Как упоминалось ранее, сторонник Пэк обладают булыжником морфологии. Наши изолированные МНК перешла от колонии веретеновидной формы клеток (рис. 2A-2D) на ранних стадиях булыжником колонию (Рисунок 2E-2F) в течение десяти дней в культуре. Пэк были помечены по-разному в различных исследовательских групп, а именно конце клетки эндотелия прародитель10, эндотелиальные колонии, формируя клетки

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Этот материал основан на работе, поддержке Национального научного фонда под Грант № CMMI-1452943 и отличием колледж университета штата Арканзас. Мы хотели бы также признать Арканзас пуповинной крови Банк за предоставление нам единиц крови шнура.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
A) Для выделения и культивирования
EGM-2 BulletKitLonzaCC-3162Этот продукт содержит все факторы роста, необходимые для создания эндотелиальной среды роста
Фетальная сыворотка крупного рогатого скотаThermofisher Scientific26140079
Pencillin-Streptomycin-Glutamine (100x)Thermofisher Scientific10378016
Ficoll-PaqueGE Heatlhcare17-1440-02
Сбалансированный солевой раствор ХэнкаThermofisher Scientific14170-112
Технологии стволовых клетокхлорида аммония7850
1x Фосфатный буфер Солевой растворThermofisher Scientific14190250
Rat Tail I КоллагенCorning 354236
Ледяная уксусная кислотаAmresco0714-500ML
0,05% трипсин-ЭДТАThermofisher Scientific25300054
HEPES буферThermofisher Scientific15630080
Dulbecco's Modified Eagle's MediumThermofisherScientific 10566-016
B) Антитела и клеточные лизаты
CD31 Abcamab28364:250 разведение  для вестерн-блоттинга
CD34Santa Cruz Biotechnologysc-70451:100 разведение для вестерн-блоттинга
α-SMAabcamab56941:100 разведение для вестерн-блоттинга
&альфа;-тубулинabcamab72911:2,500 разведение для вестерн-блоттинга
VEGFR2abcamsc5041:100 разведение для вестерн-блоттинга
лизат эндотелиальных клеток пупочной вены человекаSanta Cruz Biotechnologysc24709 
интерстициальных клетокклапана Первичная клеточная линия, культивированная в собственной лаборатории и лизированная буфером RIPA
C) Вестерн-блоттинг и иммуноокрашивание
10x Трис/Глицин/SDS буферBiorad161-0772Используется в качестве бегущего буфера
10x Трис/Глицин буферBiorad161-0771Используется в качестве буфера для переноса
Передаточная мембрана Immobilon-FLMerck MilliporeIPFL0010Это передаточная мембрана из ПВДФ, которая имеет 45 & микро; m размер пор и упоминается в протоколе как западная блот-мембрана
4x Laemmli буфер для пробBiorad161-0747
2-меркаптоэтанолBiorad161-0710
10% Критерий TGX сборный гельBiorad5671033
Prolong Gold antifadeThermofisher ScientificP36930Используется для монтажа иммуноокрашенных покровных стекол для длительного хранения
МетанолVWR АналитическийBDH1135-4LP
1Лизат

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Asahara, T., et al. Isolation of putative progenitor endothelial cells for angiogenesis. Science. 275 (5302), 964-967 (1997).
  2. Lin, Y., Weisdorf, D. J., Solovey, A., Hebbel, R. P. Origins of circulating endothelial cells and endothelial outgrowth from blood. J Clin Invest. 105 (1), 71-77 (2000).
  3. Shi, Q., et al. Evidence for circulating bone marrow-derived endothelial cells. Blood. 92 (2), 362-367 (1998).
  4. Hirschi, K. K., Ingram, D. A., Yoder, M. C. Assessing identity, phenotype, and fate of endothelial progenitor cells. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28 (9), 1584-1595 (2008).
  5. Ingram, D. A., et al. Identification of a novel hierarchy of endothelial progenitor cells using human peripheral and umbilical cord blood. Blood. 104 (9), 2752-2760 (2004).
  6. Yoder, M. C., et al. Redefining endothelial progenitor cells via clonal analysis and hematopoietic stem/progenitor cell principals. Blood. 109 (5), 1801-1809 (2007).
  7. Sales, V. L., et al. Transforming growth factor-beta1 modulates extracellular matrix production, proliferation, and apoptosis of endothelial progenitor cells in tissue-engineering scaffolds. Circulation. 114, 1 Suppl 193-199 (2006).
  8. Sales, V. L., et al. Endothelial Progenitor Cells as a Sole Source for Ex Vivo Seeding of Tissue-Engineered Heart Valves. Tissue Eng Pt A. 16 (1), 257-267 (2010).
  9. Liew, A., Barry, F., O'Brien, T. Endothelial progenitor cells: diagnostic and therapeutic considerations. Bioessays. 28 (3), 261-270 (2006).
  10. Hur, J., et al. Characterization of two types of endothelial progenitor cells and their different contributions to neovasculogenesis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 24 (2), 288-293 (2004).
  11. Ingram, D. A., Caplice, N. M., Yoder, M. C. Unresolved questions, changing definitions, and novel paradigms for defining endothelial progenitor cells. Blood. 106 (5), 1525-1531 (2005).
  12. Melero-Martin, J. M., et al. In vivo vasculogenic potential of human blood-derived endothelial progenitor cells. Blood. 109 (11), 4761-4768 (2007).
  13. Melero-Martin, J. M., Bischoff, J. Chapter 13. An in vivo experimental model for postnatal vasculogenesis. Methods Enzymol. 445, 303-329 (2008).
  14. Yoder, M. C. Human endothelial progenitor cells. Cold Spring Harb Perspect Med. 2 (7), 006692(2012).
  15. Siddique, A., Shantsila, E., Lip, G. Y. H., Varma, C. Endothelial progenitor cells: what use for the cardiologist. J Angiogenes Res. 2 (6), (2010).
  16. Camci-Unal, G., et al. Surface-modified hyaluronic acid hydrogels to capture endothelial progenitor cells. Soft Matter. 6 (20), 5120-5126 (2010).
  17. Hill, J. M., et al. Circulating endothelial progenitor cells, vascular function, and cardiovascular risk. N Engl J Med. 348 (7), 593-600 (2003).
  18. Young, P. P., Vaughan, D. E., Hatzopoulos, A. K. Biologic properties of endothelial progenitor cells and their potential for cell therapy. Prog Cardiovasc Dis. 49 (6), 421-429 (2007).
  19. Mehta, J. L., Szwedo, J. Circulating endothelial progenitor cells, microparticles and vascular disease. J Hypertens. 28 (8), 1611-1613 (2010).
  20. Nevskaya, T., et al. Circulating endothelial progenitor cells in systemic sclerosis are related to impaired angiogenesis and vascular disease manifestations. Ann Rheum Dis. 66, 67-67 (2007).
  21. Cebotari, S., et al. Clinical application of tissue engineered human heart valves using autologous progenitor cells. Circulation. 114, 1 Suppl 132-137 (2006).
  22. Ito, H., et al. Endothelial progenitor cells as putative targets for angiostatin. Cancer Res. 59 (23), 5875-5877 (1999).
  23. Vasa, M., et al. Increase in circulating endothelial progenitor cells by statin therapy in patients with stable coronary artery disease. Circulation. 103 (24), 2885-2890 (2001).
  24. Wu, X., et al. Tissue-engineered microvessels on three-dimensional biodegradable scaffolds using human endothelial progenitor cells. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 287 (2), 480-487 (2004).
  25. Boyer, M., et al. Isolation of endothelial cells and their progenitor cells from human peripheral blood. J Vasc Surg. 31 (1), Pt 1 181-189 (2000).
  26. Huber, B., Czaja, A. M., Kluger, P. J. Influence of epidermal growth factor (EGF) and hydrocortisone on the co-culture of mature adipocytes and endothelial cells for vascularized adipose tissue engineering. Cell Biol Int. 40 (5), 569-578 (2016).
  27. Sturdivant, N. M., Smith, S. G., Ali, S. F., Wolchok, J. C., Balachandran, K. Acetazolamide Mitigates Astrocyte Cellular Edema Following Mild Traumatic Brain Injury. Sci Rep. 6, 33330(2016).
  28. Lam, N. T., Muldoon, T. J., Quinn, K. P., Rajaram, N., Balachandran, K. Valve interstitial cell contractile strength and metabolic state are dependent on its shape. Integr Biol (Camb). 8 (10), 1079-1089 (2016).
  29. Tandon, I., et al. Valve interstitial cell shape modulates cell contractility independent of cell phenotype. J Biomech. 49 (14), 3289-3297 (2016).
  30. Cockshell, M. P., Bonder, C. S. Isolation and Culture of Human CD133+ Non-adherent Endothelial Forming Cells. Bio-Protocol. 6 (7), (2016).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи