Методическая статья

Оценка механизмов сосудистой контроля использования видео микроскопии изолированных сопротивления артериях крыс

DOI:

10.3791/56133

⸱

5 декабря 2017 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Physical Therapy, Marquette University, 2Medical College of Wisconsin, 3Department of Physiology, Medical College of Wisconsin, 4Graduate Programs of Nurse Anesthesia, Texas Wesleyan University, 5Office of Research, Medical College of Wisconsin

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта рукопись описывает в vitro видео микроскопии протоколов для оценки функции сосудистого в артериях головного мозга сопротивления крыса. Манускрипт также описывает методы для оценки плотности microvessel с дневно обозначенные лектины и тканевой перфузии, используя Лазерная доплеровская флоуметрия.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Этот протокол описывает использование в vitro телевидения микроскопии для оценки функции сосудистого в изолированных мозгового сопротивления артерий (и других судов), а методы оценки перфузии тканей, с использованием Лазерная доплеровская флоуметрия (МСО ) и плотности microvessel, используя дневно помечены лектина Griffonia simplicifolia (ГС1). Нынешние методы для изучения изолированные сопротивления артерий на Трансмуральное давление с которыми в естественных условиях и в отсутствие влияния Паренхиматозный клетки обеспечивают важную связь между в vivo исследований и информации, полученной от молекулярной упрощенческих подходов, которые предоставляют ограниченное понимание интегративной ответы на уровне всей животных. LDF и методы выборочно определить артериол и капилляров с дневно меченых GS1 Лектин обеспечивают практические решения, позволяющие следователям расширить знания, полученные от исследования артерий изолированных сопротивления. Этот документ описывает применение этих методов для получения фундаментальных знаний сосудистой физиологии и патологии в крыса как общей экспериментальной модели и в различных специализированных генетически «дизайнер» крыса штаммов, которые могут обеспечить важно понимание влияние специфических генов на важных сосудистой фенотипов. Используя эти ценные экспериментальных подходов в крыса штаммов, разработанных стратегий селекции и новых технологий для производства моделей Нокаут гена в крыса, будет расширяться строгость научных помещений, разработанных в нокаут мыши модели и расширение знаний к более соответствующих животных модели, с хорошо понимали физиологических фон и пригодность для физиологических исследований из-за его большего размера.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ранние исследования функции сосудистого в артерии артерии использованы каналом и во многих случаях аорту. Формирование сил в крупных артерий обычно изучал прикрепляется кольцо сегмента артерии преобразователь силы в ванну ткани; в случае аорты методом спиральной резки полосы судна таким образом, чтобы гладкие мышечные волокна были ориентированы в продольном направлении между точкой крепления и датчик силы, для предоставления наиболее точной оценки сил, порожденных сокращение гладкие мышцы вдоль его продольной оси. Стандартным методом для резки винтовой полоски аорты было место стеклянной палочкой в просвет сосуда, сделать разрез в стенке сосуда на желаемый угол и Держись до конца подвергаются края стенки сосуда, как разрез был продлен производить весь Спиральные полосы судна. В тот момент эндотелиальные стороны судна обычно смыты для удаления мусора перед присоединением полосы судно для датчика силы и погружаемой подготовки в насыщенной кислородом и температуры ткани ванна. В конце концов что подход привел к одному из самых известных и важных открытий в истории физиологии Furchgott и Завадским1, а именно роль эндотелия производные расслабляющий фактор (EDRF), впоследствии определены как оксид азота, в регулирующие функции сосудистого. Решающим событием, ведущих к это открытие было положение, в котором следователи сохранить нетронутыми эндотелия, избегая контакта со стороны эндотелия артерии с внешней поверхности и заметил, что аортальной газа не сделал exhibit ожидаемых сокращение ацетилхолина (ACh), но вместо этого расслабленным в ответ ACh. На основе этого наблюдения, следователи Подготовка «сэндвич», в которой они придают сегмент аорты с нетронутыми эндотелия (но не в состоянии генерировать сократительной силы) разработать стандартные спиральные полосы аорты и преобразован, ACh индуцированной сокращение в релаксации.

Два основных достижений в этой области, которые широко используются сегодня являются разработка препаратов для измерения активной сократительной силы в малое сопротивление артерии2,3 (например в кишечной брыжейка3 ) и канюлированной сопротивления артерии препараты4,5,6. В одном из первых сообщений, Mulvany и Халперном3 описал применение препарата myograph проволока для изучения активной сократительной силы в изолированных сопротивления артерии от кишечных брыжейка спонтанно гипертензивных крыс (ШРМ) и нормотензивной WKY элементов управления. После разработки системы myograph проволока канюлированной сопротивления артерии препаратов были разработаны для исследования сосудов, ближе к в vivo условия4,,5-6.  Хотя оба подхода обеспечивают ценные результаты, подготовка канюлированной артерия имеет добавил преимущества более эффективного сохранения встроенные активные тон в артериях; и позволяя следователей для изучения активных миогенных реакции на изменения в Трансмуральное давление и сосуд реакции на изменения в скорости потока и эндотелиальных касательное напряжение (см. Обзор Халперн и Келли6).

Основная цель настоящего документа заключается в описывают, как использовать проверенный временем метод видео микроскопии с помощью изолированных, канюлированной сопротивления артерий для того чтобы получить точную информацию о механизмах, которые регулируют активные тон в этих важнейших судов, независимо от влияний нейронные, гуморальные или Паренхиматозный клеток. Этот основной информации, используя стандартный мышиной модели и примеры из нашего исследования новых генетически инженерии крыса штаммов, будет предоставить читателю представление о виды идеи относительно сосудистой функции, которые могут быть получены с телевидение микроскопия подходы, и которые могут быть использованы в исследованиях с участием любого управления и экспериментальной группы следователя выбора, включая мощные новые экспериментальные крыса модели производимые селективного инбридинга и недавно разработанный генетический Инженерные технологии.

Благодаря точности телевидения микроскопии подходов измерение диаметра изменений в канюлированной артерии препараты могут обеспечить весьма ценную информацию о эндотелий зависимых и эндотелий независимые механизмы сосудов релаксации, а также важные (и иногда неожиданных) изменения в механизмах контроля сосудов, происходящие с гипертонией, высоким содержанием соли и другие экспериментальные мероприятия. Кроме того, измерение давления диаметр отношений в изолированных и канюлированной сопротивления артерий, которые максимально расслаблены, лечение с Ca2 +-бесплатные решения или фармакологических сосудорасширяющего препарат, позволяет следователю оценить структурные изменения в артериях благодаря сосудистого ремоделирования и для вычисления отношения пассивной напряженно деформированного7 , который может обеспечить важные понимание изменений в пассивной механических свойств артерий, которые могут повлиять на функцию артериальной независимые (или в дополнение к) изменения в механизмы активного контроля. Важно также отметить, что информация, полученная от исследования артерий изолированных сопротивление может быть дополнена информация, полученная, используя LDF, практический метод для оценки перфузии тканей в целом животного уровня8,9 ,10, и на информации, полученной от оценки плотности microvessel, используя дневно помечены GS1 Лектин, который специально связывает гликопротеина постановление в базальной мембраны мелких артериол и капилляров11 , 12. Последний метод обеспечивает очень точную оценку плотности microvessel, что не подлежит классический трудности в оценке microvessel плотность путем подсчета судов в естественных условиях, например пропавших без вести, не увлажненную сосуды, где поток крови остановлена из-за закрытия активных артериол. При совместном использовании, эти подходы могут предоставить важную информацию для соотнесения функциональные изменения в артериях изолированных сопротивление изменениям в перфузии тканей на уровне микроциркуляторного; и некоторые примеры использования этих ценных подходов в сочетании с методами канюлированной артерия будет также оказываться в настоящей рукописи.

Настоящий документ посвящен использованию методов видео микроскопии для оценки сосудистые изменения в артериях беспородных крысах Sprague-Dawley. Однако важно отметить, что эти методы оказались весьма ценными в разъяснение фенотипические изменения в узкоспециализированных генетически крыса штаммов, созданные селекции или гена редактирования с использованием методов. В этой рукописи мы предоставляем примеры методов как видео микроскопии предоставили важную информацию о функции сосудистого ряда ценных крыса моделей, в том числе даль соли чувствительных (СС) крыса ан беспородных крыс штамм, который является наиболее широко используется Экспериментальная модель для изучения механизмов соли чувствительных hypertenson18,19,20,21,,2223; и consomic крысы, созданные с помощью селекции СС крыс с Солт нечувствительны штамм крыса Норвегии Браун (BN). В consomic крыса панелей Каждая хромосома из крыса Норвегии Браун был introgressed индивидуально в генетический фон Даль СС24,25,26 . Использование панелей крыса consomic предоставил ценные подсказки относительно конкретных хромосом, которые способствуют соли чувствительности кровяного давления и другие фенотипы, включая сосудистой реактивности24,25,26 ,27,28.

Селекция стратегии использования СС крыс и consomic крысы, перевозящих отдельные хромосомы BN позволили также поколения суженного congenic штаммы с небольших сегментов отдельных introgressed хромосомы Браун Норвегии в даль СС генетических 22,фон29. Эти можно предоставить чрезвычайно ценным ввода на конкретные гены или узких областей хромосом, которые могут повлиять на важнейших физиологических переменные, такие как кровяное давление, повреждение почек и сосудистой реактивности22,29. Еще одно мощное дополнение к крыса генетических элементов является развитие крысы Джин нокаут моделей использования передовых гена, редактирование методы, включая ZFNs, transcriptional nucleases активатор как эффекторных (ТАЛЕНС) и совсем недавно ТРИФОСФАТЫ-Cas913 ,14,,1516,17. Наступление эти мощные методы, позволяющие генов в нокаут в крыса является чрезвычайно важным событием, поскольку исследования Нокаут гена к настоящему времени использовали (и продолжают использовать) мышей почти исключительно. Другой экспериментальный компонент в настоящем документе демонстрирует значение методов канюлированной артерии и видео микроскопии для оценки контроля физиологических механизмов в нокаут крыс не хватает мастер антиоксидант и ячейки защитной транскрипции фактор, ядерный фактор (эритроидные производные 2) - как - 2 (NRF2)30,31, которые были разработаны с помощью технологии TALEN Sprague-Dawley генетический фон17. В этих экспериментах в пробирке видео микроскопии методы были использованы для обеспечения функциональной верификации потеря гена NRF2 и тестирования потенциально ценный лечебный подход, основанный на прямой upregulation антиоксидант, NRF2-опосредованной оборону. СР-2 имеет существенное терапевтическое значение в борьбе с сосудистой окислительный стресс в организме человека, учитывая разочаровывающие результаты клинических испытаний с участием прямого управления антиоксидантов, таких как витамины C и E32.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Медицинский колледж Висконсин институциональных животных ухода и использования Комитет (IACUC) одобрил все протоколы, описанные в этом документе и все процедуры проводятся во исполнение национальных институтов здравоохранения (НИЗ) Управление социального обеспечения по животных лаборатория (OLAW) правила.

1. Подготовка решений и судно камеры

  1. До проведения серии экспериментов, приготовить 2 Л 20 x концентрированной соли Стоковый раствор, состоящий из 278 г/Л NaCl; 14 г/Л хлористого калия; 11.52 г/Л MgSO4. 7H2O; и 9,4 г/Л CaCl2. 2H2O. Также приготовить 2 Л 20 x концентрированной буферных запасов, состоящих из 80.8 г/Л NaHCO3 и 0,4 г/Л ЭДТА, и 2 Л 20 x сосредоточены Ca2 +-бесплатный Стоковый раствор, состоящий из 281.6 г/Л NaCl; 14 г/Л хлористого калия и 11,52 г/Л MgSO4. 7H2O.
    Примечание: 20 X акций решения может храниться в холодильнике до использования.
  2. В день эксперимента, подготовить 2 Л физиологического раствора соли (PSS) от 20 x концентрированных растворов запасов следующим: добавить 100 мл 20 x соль акционерное 1800 мл обессоленной воды в колбу Эрленмейера 2 Л или стакан на моторизованных перемешивания тарелку. Добавить 100 мл 20 x буферных запасов при непрерывно equilibrating решение с газовой смеси, содержащей 21% O2, 5% CO2, N2, и помешивая магнитной перемешивания бар. Медленно добавьте 0,28 g NaH2PO4 во время мониторинга рН; Отрегулируйте при необходимости для рН 7,4, добавляя капли 6 N HCl или 6,5 N NaOH раствора из пипетки Пастера. После того, как подготовлен PSS и pH корректируется, добавьте 1,98 г глюкозы в PSS.
    Примечание: Важно, медленно добавить NaH2PO4 Последнее время мониторинг pH PSS, потому что добавление NaH2PO4 к щелочной раствор (pH > 7,4) может сформировать преципитат кальция фосфат, как указано внешний вид облачно раствора или белый осадок в нижней части контейнера.
    Примечание: Окончательного состава PSS-119 мм/Л NaCl; 4.7 мм/Л хлористого калия; 1.17 мм/Л мг2так4; CaCl 1.6 мм/Л2; NaH 1,18 мм/Л2PO4; 24 мм/Л NaHCO3; 0,03 мм/Л ЭДТА; и 5,5 мм/Л глюкозы. Хотя состава PSS могут отличаться между лабораториями, этот рецепт отлично подходит для поддержания сосудистый тонус, Эндотелиальная функция и ответы на вазоактивных агентов в изолированных сопротивления артерий.
  3. Чтобы определить максимальный диаметр и оценить активный тон в артерии, производя максимальная дилатация судна, подготовить 500 мл Ca2 +-бесплатно PSS, добавив 25 мл 20 X Ca2 +-бесплатно соли складе до 450 мл деионизированной воды , а затем 25 мл 20 x буферных запасов в колбу Эрленмейера или стакан подобный шаг 1.2 выше. Добавьте в решение 0,07 г NaH2PO4 во время мониторинга и корректировки рН раствора. Ca2 +-бесплатно PSS добавляется в зале в конце эксперимента, чтобы избежать истощения внутриклеточных Ca2 + магазины, которые могут повлиять на судно ответы в нормальных PSS PSS водохранилище и судна. Потому что Ca2 +-бесплатное решение добавляется в конце эксперимента для получения максимального расслабления артерий, нет необходимости добавлять глюкозы в PSS.
    Примечание: Когда полный, окончательный состав Ca2 +-бесплатный PSS-120.6 мм/Л NaCl; 4.7 мм/Л хлористого калия; 1.17 мм/Л мг2так4; NaH 1,18 мм/Л2PO4; 24 мм/Л NaHCO3; CaCl 0 мм/Л2; и 0,03 мм/Л ЭДТА.
    Примечание: Для многих исследований, требующих максимальной дилатация артерии, блокатор вход кальция например верапамил (1 мкм) и/или донора оксида азота как натрия нитропруссида (10 мкм) можно добавить в решение, помимо удаления Ca2 + от PSS.
  4. Сохранить PO2, ЦУП2и рН PSS, непрерывно equilibrating PSS, впадающих в зале судна в ванну стандартного орган, используется для изучения изолированных аортального кольца, гладких мышц кишечника или другие ткани (рис. 1). Использование синтетических фторопластовые трубы тетрафторэтилена соединиться ванна органа бензобака, потому что этот тип трубки газовой, непроницаема, в отличие от многих других видов труб, например, латекс.
  5. Место небольшой воздушный камень подключен к уравновешивания газовой смеси в камере судна для поддержания газового состава PSS.
    Примечание: Сосуд реакции на изменения в PO-2 может быть проверена путем equilibrating PSS в камере судна и просветный perfusate с газовой смеси, содержащие различные проценты O2, например, 21% O2, 10% O2, 5% O2 и 0% O2, с 5% CO2 и баланс N233,34,35. Для более крупных артерий толстые стены, где диффузии кислорода в центр стенке сосуда может быть ограничение, могут использоваться более высокий процент кислорода, например, 95% O2 .
  6. Температура в камере сосуд тщательно контролировать, как отдельных камер может варьироваться в их характеристики теплопередачи.
    Примечание: Многие коммерчески подготовленные судно камеры используется для исследования артерий канюлированной сопротивления использовать Перистальтический насос, чтобы доставить кислородом PSS от водохранилища, достижение равновесного уровня газа и обеспечивают очень точный контроль температуры и оксигенация PSS.
  7. Место PSS в большой бутылке Мариотта (2 Л), с пробкой и центральной стеклянной трубки, чтобы служить в качестве резервуара, непрерывно доставлять PSS в орган ванну, которая нагревает и газ уравновешивает PSS, впадающих в зале судна (рис. 1A).
  8. Место открытия центральной стеклянной трубки в бутылке Мариотта на том же уровне, как в верхней части PSS в ванне органа, для поддержания постоянного гидростатического давления головка для доставки PSS в ванну орган. Использование полиэтиленовые трубки подключены к J-образный стеклянные или пластиковые трубы для доставки PSS от бутылки Мариотта в ванну орган.
  9. Для Люминал перфузии (рис. 1а) используйте полиэтиленовые трубы для подключения приток пипеткой PSS водохранилище, состоящий из 60 cc Пластиковый шприц возведен в позицию, которая поддерживает желаемый приток давления (обычно 80 mmHg для исследования мозга крысы артерий), измеряемая с давлением датчика к системе через кран.
  10. Подключите отток пипеткой полиэтиленовые трубки позволяют PSS течь через судна в ответ на давление градиент, а линии отток в водоем похож на приток водохранилище. Используйте подключение аналогичные краном и давления датчика для измерения давления отток.
    Примечание: В разделе 2, ниже описаны процедуры для установки Трансмуральное давление и контроля потока через судна.
  11. В конце эксперимента тщательно промойте камеры, линии доставки и водохранилище систем с дистиллированной водой. Промежутки, заменить линии труб и доставки, чистый или заменять запорные краны в системе и периодически подвергать любое стекло PSS водохранилищ кислоты стирки для предотвращения роста бактерий и других микроорганизмов, которые вызывают загрязнение и влияет на судно реактивности.

2. канюлированной артерии подготовка

  1. Анестезировать Sprague-Dawley крыс с изофлюрановая 5% и поддержания анестезии, используя 1,5-2,5% медицинского кислорода36. Кроме того управлять внутримышечной инъекции, содержащей кетамин (75.0 мг/кг), acepromazine (2,5 мг/кг) и ксилазина (10,0 мг/кг); внутрибрюшинного введения Пентобарбитал (50-60 мг/кг); или любой другой утвержденный метод анестезии, в зависимости от протоколов и/или следователь предпочтения.
  2. Обезглавить крысу под глубокой анестезии и удалить мозга для исследования артерий головного мозга сопротивления.
  3. После удаления мозга, тщательно изолировать средней мозговой артерии (MCA) (или других артерий интерес, например, базилярной артерии или задней мозговой артерии)37,38. Чтобы изолировать MCAs, место мозга лежа в чашке Петри стекла, наполненный ледяной PSS (рис. 2).
  4. Используйте беззаботными ножницы, пинцет штрафа отзыв Дюмон #5 для акцизных MCA от мозга.  Очистить любые остаточные мозговой ткани от MCA, с помощью щипцов и передачи артерии температуры контролируемой судно камеру, содержащую PSS как описано выше. 33 , 34  .
  5. Для передачи артерии к палате судна, аккуратно прижмите подакцизным судно ACA или задней соединительной артерии сегмента и осторожно поместите его в камеру.
    Примечание: в дополнение к MCA, канюлированной судно система подходит для широкого спектра препаратов малого судна, включая скелетных мышц сопротивления артерий33,,3940, сопротивление верхней брыжеечной артерии 38 , 41 , 42и большой (первого порядка) артериол мышцы cremaster43, а также человека коронарных артериол и человека артериол, полученные из подкожной жировой ткани во время биопсии ягодичной44,45, 47 46,.
  6. Прикрепите артерии к приток микропипеткой, потянув ее к основанию пипетку до тех пор, пока кончик успехи в Люмене MCA. Закрепите артерии на приток пипетки, связывая петли из одной пряди волокон, ранее дразнили из 10-0 швов вокруг артерии (рис. 1B). Закрепите в противоположном конце MCA для оттока пипетки, затянув второй шов петля вокруг судна (рис. 1B).
    Примечание: Место петель шва на micropipettes до монтажа судна и разместите их рядом конечная точка крепления, позволяя им быть легко скользнула над артерией и быстро обеспеченных когда судно находится в положении, которое минимизирует риск артерия скольжения от пипетки.
    Примечание: Micropipettes готовят от капиллярной трубки боросиликатное стекло (внешний диаметр 2 мм; 1 мм внутренний диаметр 10 см длиной) с помощью вертикальной микропипеткой съемник. До присоединения артерии, матч кончик диаметры micropipettes максимально предотвратить несоответствия приток и отток сопротивления в системе перфузии.
  7. После артерии надежно связан с micropipettes, используйте микрометр, подключенных к держателю пипеткой приток растянуть артерии к длине в situ .
  8. Галстук с все боковые ветви с одной нити, дразнили от 10-0 швы для того, чтобы поддерживать постоянное давление в артериях.
  9. Проверьте отсутствие утечек, убедившись, что внутрипросветная (Трансмуральное) давление остается неизменным после временного закрытия притока пипеткой. Галстук с любой ветви или проверьте на предмет отверстий в емкости Если давление падает. Восстановление перфузии после проверки, что Трансмуральное давление остается постоянным.
    Примечание: Катетеризации изолированных сопротивления артерий требует сноровки и практики. Основные меры предосторожности, которые следует соблюдать, чтобы избежать нарушения пипетки и убедиться, что артерии не соскальзывали пипетки. Важно быть нежным с изолированной артерии на протяжении всей процедуры, как травма судна может привести к повреждению эндотелия и/или мешать нормальной функции гладких мышц сосудов.
  10. Измерьте внутренний диаметр артерии, с помощью микроскопии видео установки (рис. 1A), состоящий из видео камеры прилагается к микроскопом рассечения и подключен к видео микрометра и телевизионных монитора (цифры 1B, 1 C). Это позволяет наблюдателя для измерения диаметра сосуда вручную путем размещения подвижных опорных линий на внутренней стенке артерий и, при желании, на наружной стене артерии, а также для измерения толщины стенок сосуда.
    Примечание: Некоторые видео микрометров предлагают автоматическое отслеживание размеров судна.
    Примечание: Откалибровать видео микрометр микрометр Этап микроскопа и приток и отток преобразователи давления с манометром ртути (0 мм рт.ст., 50 мм рт.ст., 100 мм рт.ст., 150 мм рт.ст и 200 мм рт.ст.) между эксперименты для обеспечения точных измерений Диаметр и внутрипросветная давления судна.
    Примечание: Стандартный элемент управления Трансмуральное давление для крыса экспериментов MCA. 80 мм рт.ст. Калибровка для уровней выше и ниже давления обеспечивает точность исследований миогенных реакции на изменения в Трансмуральное давление и пассивного давления диаметр кривых в максимально расширенных артерий.
  11. Отрегулируйте высоту приток и отток водохранилищ для поддержания желаемого Трансмуральное давление на постоянном уровне. Повышение притока водохранилище на небольшую сумму (< 5 mmHg) и снижение оттока водохранилище на ту же сумму поддерживает среднее Трансмуральное давление и создает поток перфузии в просвет сосуда6.
    Примечание: Повышение притока водохранилище и снижение оттока водохранилище в равных количествах сохраняет же среднее Трансмуральное расправляющего давления в артериях, но создает градиент гидростатического давления, что вызывает поток и касательное напряжение в сосуде, позволяя следователь оценить эндотелий-зависит от реакции на изменения в внутрипросветная касательное напряжение в48различных экспериментальных групп.
  12. Чтобы оценить миогенных ответов и судно с сосудорасширяющим раздражители, убедитесь, что артерии exhibits подходящий уровень активных тон (около 40%) до эксперимента. Отказаться от любых артерий, отсутствует активный тон в состоянии покоя, за исключением судов, например, небольшой верхней брыжеечной артерии, которые обычно не проявляют активного отдыха тон.
    Примечание: Для судов, которые exhibit обычно спонтанное тон, предварительно сжимают артерии на эквивалентную сумму используя агонист вазоконстриктора норадреналин или фенилэфрин. Хороший подход к выбору доза агонист, используется для предварительно сужает артерии является использовать доза50 EC вазоконстриктора агента, например, норадреналина41,42. Однако вазоконстриктора фармакологических агентов не должны применяться к артерии, которые демонстрируют спонтанное активный тон под условия для отдыха.
  13. Протестировать эндотелий-зависит от реактивности артерии канюлированной сопротивление путем измерения диаметра сосуда при добавлении повышения концентрации ACh (10-10 M-10-5 M) к палате судна. Испытания эндотелий независимые оксида чувствительность сосудистой гладких мышц путем измерения диаметра сосуда при добавлении увеличения концентрации (10-10 M-10-5 M) оксида азота нитропруссида натрия доноров для Палата судна.
    Примечание: Чувствительность к вазоконстриктора агентами и другими агонистами сосудорасширяющим может испытываться аналогичным образом, добавив увеличение концентрации агониста к палате судна.
    Примечание: Помимо вазоактивных веществ, различные препараты, ингибиторы и других фармакологических агентов могут быть добавлены для ванны ткани и/или Люминал perfusate. Изменения в PO-2 (а также ЦУП2 и рН) может быть выборочно препарат эндотелиальной стороне или загородный просветный стороне артерии на отдельный уравновешивания Люминал perfusate с воздуха камень, подключенных к калиброванные газовой смеси отличается от смеси, используемые для сбалансировать PSS в ткани Ванна33,34,49. Миогенных реакции на изменения в Трансмуральное давление может быть изучен закрытия отток пипетки и повышение (или снижение) высота резервуара PSS подключен к приток пипеткой49,50,51 - увеличение или уменьшение давления внутрипросветная.
  14. Чтобы протестировать роль эндотелия в посредничестве судно ответы на конкретные стимулы, удалите эндотелия и сравнить судно ответы на эти раздражители в наличие или отсутствие эндотелия. Чтобы удалить эндотелия, тщательно развязать артерии из пипетки отток и медленно perfuse в просвет артерии с воздуха болюс (0,5-1,0 мл). После воздуха перфузии восстановите PSS перфузии чтобы очистить сотовой мусора до повторного связывания судна отток пипеткой43.
    Примечание: Эндотелиальная денудации процедурой, важно проверить, что эндотелия удаляется путем тестирования сосудистой ответы на агонистов (обычно ACh) известно, производят эндотелий зависимой вазодилатация в этом типе судна. Однако в некоторых патологических условиях, выпускаются эндотелий зависимой сосудосуживающие средства, в этом случае, важно, чтобы убедиться, что ответ удав устраняется после удаления эндотелия.
  15. В конце эксперимента, определить максимальный диаметр артерии, добавив Ca2 +-бесплатно PSS, perfusate и superfusate. Расчет активного отдыха тон (%) как ((DМакс-Dотдыха) /DМакс) x 100, где Dmax -максимальный диаметр присутствии Ca2 +-бесплатные решения и Dотдых это отдыха диаметр управления.
    Примечание: Диаметр измерения максимально расслабленным артерий в различных экспериментальных групп являются ценными в сравнении активного отдыха тон, структурной реконструкции (то есть, изменения в стены толщиной и Люмене диаметр) и пассивных механических свойств (напряжение деформация отношения рассчитывается от пассивного диаметров на различных уровнях Трансмуральное давление).

3. Оценка ответов потока церебрального кровотока с МСО

  1. Анестезировать животное с 5% изофлюрановая и закрепите крыса в стереотаксического аппарата9,10.
  2. Сохраняя мониторинг частоты дыхания, конца Приливные CO2и глубины анестезии с ног щепотку36животного под постоянным анестезии.
  3. Тщательно тонкий черепа, чтобы прозрачность с помощью низкая скорость стоматологических дрель и минеральное масло для предоставления оптическая муфта10. Проявлять осторожность во избежание создания избыточного тепла и во избежание проникновения кости.
    Примечание: Разбавление черепа позволяет лазерного света для достижения основной ткани и должны быть отражены обратно в зонд для измерения доплеровского сдвига, величина которого определяется количество движущихся частиц (то есть, красных кровяных клеток) и их скорость.
  4. Безопасный LDF зонд в микроманипулятор и поместите его непосредственно над районом разбавлять черепа. В ходе эксперимента это очень важно для предотвращения перемещения LDF зонд или подготовки себя, как Сол предназначен для измерения потока в одном ограниченной области ткани и чрезвычайно чувствителен к артефакты движения.
    Примечание: Любое движение зонда от своей первоначальной позиции даст оценку потока крови в другой области ткани, исключающие сравнений. Хотя МСО не предоставляют значения абсолютной потока и не подходит для сравнения между субъектами, это отличный способ для неинвазивно оценивать изменения в перфузии тканей в ответ на экспериментальных мероприятий в отдельных предметов; и относительные изменения в МСО сигнала от значений элементов управления может быть в среднем и по сравнению с изменениями в МСО сигнал от управления в других экспериментальных групп.
    Примечание: МСО представляет собой удобный подход лучше понять факторы, регулирующие поток крови на уровне всей сосудистого русла в различных экспериментальных групп8,9,10. Оценка перфузии тканей с МСО представляет собой практический подход усваивать знания, полученные от изолированных судно исследований в целом кровати перспективу. За исключением региональные различия в механизмах контроля сосудов между сопротивления артерий и микроциркуляцию измерения, полученные с МСО обеспечивают хорошим показателем ткани крови потока управления, который в целом соответствует результаты, полученные с подготовка канюлированной артерии.

4. Оценка плотности Microvessel скелетных мышц с GS1 Lectin

  1. Удалите cremaster мышцы от мужских особей крысы, резки мошонки с Стандартный штраф Ножницы хирургические и затем с помощью щипцов Дюмон #5 понять мышцы.
    Примечание: Тонкие мышцы (например, cremaster мышца, а также разгибателя пальцев Лонг и tibialis передней мышцы, которые находятся в самцов и самок крыс) идеально подходят для использования в целом крепления для исследования Лектин, хотя гистологические секции могут использоваться для толще ткани.
  2. Удалите cremaster мышцы от яичка, используя один разрез. Поместите его в ледяной PSS и закрепить его в чашку Петри с прокладкой из эластомера силикона на дне внутри поверхности. Аккуратно дразнить прочь соединительной ткани, с помощью щипцов Дюмон #5.
  3. Промойте мышц образцы с 2 мл буферизации PSS и затем погрузить их в родамин меченых GS1 Лектин (20 мкг/мл PSS) для 50 мин в 12-ну клетки культуры плита с 2 мл/хорошо, завернутый в фольгу для исключения свет.
  4. Удаление ткани из решения Лектин, промойте их три раза в PSS 5 мин «стирать» инкубаций на рокер и смонтировать их на скольжениях микроскопа. Убедитесь в том, инкубировать тканей в темноте и хранить слайды в темноте, чтобы предотвратить потерю флуоресценции.
    Примечание: Если слайды не может использоваться непосредственно, они могут храниться в холодильнике без потери флуоресценции. Для длительного хранения слайды могут храниться в холодильнике для предотвращения ухудшения11.
  5. Оцените microvessel плотность, подсчитывая количество пересечений помечены микрососудов, с линиями сетки, генерируемые компьютером, накладывается на изображение52, или с наложением ясно сетки, наложенной на экране монитора, используемого для просмотра слайдов.
    Примечание: GS1 Лектин подходы были использованы для демонстрации: соль индуцированной микрососудистой разрежения53, защитный эффект предотвращения соли индуцированной ангиотензина II подавления в восстановлении microvessel плотность в соль кормили животных17 ,,5354; роль NRF2 посреднической защитный эффект низкой дозы ангиотензина II настой для предотвращения microvessel разрежения в соль кормили крыс17; а также для оценки роли ангиотензина II в поддержании ангиогенных ответы на хронический мышечной стимуляции в соли кормили крыс54,55. Одним из преимуществ метода Лектин GS1 является, что она может использоваться для оценки плотности microvessel в том же животных, используемых для исследования канюлированной сопротивления артерий или LDF.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В vitro микроскопии канюлированной сопротивления артерий позволяет для изучения факторов, влияющих на активный тон артерий малого сопротивления (и больше артериол) в нормальной в vivo Трансмуральное давление и в отсутствие Паренхиматозный ячейки влияние. Помимо оценки реактивности сосудов на различные раздражители, сосудорасширяющим и сосудосуживающие и миогенных ответы на высоте Трансмуральное давление в нормальных PSS, Ca2 +-бесплатный PSS могут быть добавле...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Как отмечалось во введении, этот документ описывает использование телевидения микроскопии и изолированные сопротивления артерии подходы для оценки сосудистой функции не только в моделях стандартных крыс (как занятые в видео), но также в узкоспециализированных генетически инженерии крыса штаммов, которые показывают Роман и мощные идеи, которые могут быть получены используя эти подходы. Использовать эти мощные методы для оценки активных тон и пассивной механических свойств артерий малого сопротивления могут обеспечить важн...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы имеют без финансовых интересов.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы выражают свою искреннюю благодарность Кэти Fink и Линн Dondlinger за их неоценимую помощь в подготовке этой рукописи.

Грантовая поддержка: Низ #R21-OD018309; #R56-HL065289; и #R01-HL128242.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
SS RatMedical College of WisconsinSS/JHsd/Mcwiштамм Контакт Д-р Арон Гертс (ageurts@mcw.edu)
SS.5BN ConsomicRat Medical College of WisconsinSS-CHR 5BN/штамм McwiКонтакт д-р Арон Гертс (ageurts@mcw.edu)
SS.13BN ConsomicRat Medical College of WisconsinSS-CHR 13BN/штамм McwiСвязаться с доктором Ароном Гертсом (ageurts@mcw.edu)
Ren1-BN Congenic RatMedical College of WisconsinSS. Штамм BN-(D13hmgc41-D13)hmgc23/McwiСвяжитесь с доктором Ароном Гертсом (ageurts@mcw.edu)
Ren1-SSA Congenic RatMedical College of WisconsinSS. BN-(D13rat77-D13rat105/Mcwi штамм КонтактД-р Арон Гертс (ageurts@mcw.edu)
Ren1-SSB CongenicRatic Medical College of WisconsinSS. Штамм BN-(D13rat124-D13rat101/McwiКонтакт с доктором Ароном Гертсом (ageurts@mcw.edu)
Nrf2(-/-) Нокаут-крыса и однопометники дикого типаМедицинский колледж штата ВисконсинSD-Nfe212em1Mcwi штаммКонтакт доктора Арона Гертса (ageurts@mcw.edu)
Крысиный чау с низким содержанием соли (0,4% NaCl)-AIN-76ADyets, Inc.
Крысиный корм с высоким содержанием соли (4% NaCl)-AIN-76ADyets, Inc.
Колорадский видеоштангенциркульColorado Video, Inc.Модель 308
ВидеокамераHitachiKPM1AN
МикроскопOlympus Life ScienceCKX41
Телевизионный мониторPanasonicWVBM1410
Преобразователи давленияStoelting56360
Блок отображения артериального давленияStoelting50115
Канюлированная артериальная камераЖивые системы Контрольно-измерительные приборыCH-1Однососудистая камера общего назначения
Регулятор температуры для однокамерныхживых систем Контрольно-измерительные приборыTC-09S
Газодисперсионная трубка, миниатюрные, прямыеживые системы Контрольно-измерительные приборыGD-MSОбеспечивает аэрацию в ванне сосуда
Газообменный оксигенатор, миниатюрныеживые системы Контрольно-измерительные приборыOXПозволяет осуществлять газообмен с перфузатом
Лазерно-доплеровский расходомерPerimedPeriFlux 5000 LDPM
GS1 LectinVector LabsRL-1102
Стеклянные капиллярные трубки для микропипетокFredrich Haer Co.27-33-12 мм ODX1 мм ID
Verticle Pipette PullerKopf InstrumentsМодель 700C
Нейлоновый шовный материал (10/0)-3 PLYAshaway Line and Twine Manufacturing Co.114-ANM-10Одиночные нити 3-слойного нейлонового шовного материала, предназначенные для использования на сосудах
Dumont #5 Щипцы-нержавеющиеинструменты Fine Science Tools11254-20
Ножницы VannasFine Science Tools15003-08
ProtandimProtandimNRF2 Inducer: Свяжитесь с доктором Джо МакКордом (JOE.MCCORD@UCDENVER.EDU)
Биореагентыхлорида натрияBP358-212
Бикарбонат натрияFisher ChemicalS233-3
Декстроза (d-глюкоза) безводныйFisher ChemicalD16-500
Сульфат магния (MgSO4-7H2O)Sigma AldrichM1880-500 г
Хлорид кальция (CaCl2-2 H2O)SigmaC5080-500G
Одноосновной фосфат натрия (NaH2PO4)SigmaS0751-500G
Хлорид калия (KCl)Fisher ChemicalP217-500G
Этилендиаминтетрауксусная кислота дигидрат соли натрия (ЭДТА)SigmaED255-500G
113755113756 David микробиологические Фишера

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Furchgott, R. F., Zawadzki, J. V. The obligatory role of endothelial cells in the relaxation of arterial smooth muscle by acetylcholine. Nature. 288, 373-376 (1980).
  2. Bevan, J. A., Osher, J. V. A direct method for recording tension changes in the wall of small blood vessels in vitro. Agents Actions. 2, 257-260 (1972).
  3. Mulvany, M. J., Halpern, W. Contractile properties of small arterial resistance vessels in spontaneously hypertensive and normotensive rats. Circ. Res. 41, 19-26 (1977).
  4. Speden, R. N. The use of excised, pressurized blood vessels to study the physiology of vascular smooth muscle. Experientia. 41, 1026-1028 (1985).
  5. Osol, G., Halpern, W. Myogenic properties of cerebral blood vessels from normotensive and hypertensive rats. Am. J. Physiol. 249, H914-H921 (1985).
  6. Halpern, W., Kelley, M. In vitro methodology for resistance arteries. Blood Vessels. 28, 245-251 (1991).
  7. Feihl, F., Liaudet, L., Waeber, B. The macrocirculation and microcirculation of hypertension. Curr Hypertens Rep. 11, 182-189 (2009).
  8. Smits, G. J., Roman, R. J., Lombard, J. H. Evaluation of laser-Doppler flowmetry as a measure of tissue blood flow. J Appl Physiol. 61, 666-672 (1985).
  9. Hudetz, A. G., Roman, R. J., Harder, D. R. Spontaneous flow oscillations in the cerebral cortex during acute changes in mean arterial pressure. J Cereb Blood Flow Metab. 12, 491-499 (1992).
  10. Hudetz, A. G., Smith, J. J., Lee, J. G., Bosnjak, Z. J., Kampine, J. P. Modification of cerebral laser-Doppler flow oscillations by halothane, PCO2, and nitric oxide synthase blockade. Am J Physiol. 269, H114-H120 (1995).
  11. Hansen-Smith, F. M., Watson, L., Lu, D. Y., Goldstein, I. Griffonia simplicifolia I: fluorescent tracer for microcirculatory vessels in nonperfused thin muscles and sectioned muscle. Microvasc Res. 36, 199-215 (1988).
  12. Greene, A. S., Lombard, J. H., Cowley, A. W., Hansen-Smith, F. M. Microvessel changes in hypertension measured by Griffonia simplicifolia I lectin. Hypertension. 15, 779-783 (1990).
  13. Aitman, T., Dhillon, P., Geurts, A. M. A RATional choice for translational research? Dis Model Mech. 9, 1069-1072 (2016).
  14. Geurts, A. M., et al. Knockout rats via embryo microinjection of zinc-finger nucleases. Science. 325, 433(2009).
  15. Geurts, A. M., et al. Generation of gene-specific mutated rats using zinc-finger nucleases. Methods Mol Biol. 597, 211-225 (2010).
  16. Geurts, A. M., Moreno, C. Zinc-finger nucleases: new strategies to target the rat genome. Clin Sci (Lond). 119, 303-311 (2010).
  17. Priestley, J. R., Kautenburg, K. E., Casati, M. C., Endres, B. T., Geurts, A. M., Lombard, J. H. The NRF2 knockout rat: a new animal model to study endothelial dysfunction, oxidant stress, and microvascular rarefaction. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 310, H478-H487 (2016).
  18. Cowley, A. W., et al. Brown Norway chromosome 13 confers protection from high salt to consomic Dahl S rat. Hypertension. 37, 456-461 (2001).
  19. Rapp, J. P. Dahl salt-susceptible and salt-resistant rats. A review. Hypertension. 4, 753-763 (1982).
  20. Rapp, J. P., Wang, S. M., Dene, H. A genetic polymorphism in the renin gene of Dahl rats cosegregates with blood pressure. Science. 243, 542-544 (1989).
  21. Manning, R. D. Jr, Meng, S., Tian, N. Renal and vascular oxidative stress and salt-sensitivity of arterial pressure. Acta Physiol Scand. 179, 243-250 (2003).
  22. Moreno, C., et al. Multiple blood pressure loci on rat chromosome 13 attenuate development of hypertension in the Dahl S hypertensive rat. Physiol Genomics. 31, 228-235 (2007).
  23. Tobian, L., Lange, J., Iwai, J., Hiller, K., Johnson, M. A., Goossens, P. Prevention with thiazide of NaCl-induced hypertension in Dahl "S" rats. Evidence for a Na-retaining humoral agent in "S" rats. Hypertension. 1, 316-323 (1979).
  24. Mattson, D. L., et al. Chromosome substitution reveals the genetic basis of Dahl salt-sensitive hypertension and renal disease. Am J Physiol Renal Physiol. 295, F837-F842 (2008).
  25. Kunert, M. P., et al. Consomic strategies to localize genomic regions related to vascular reactivity in the Dahl salt-sensitive rat. Physiol Genomics. 26, 218-225 (2006).
  26. Cowley, A. W., Liang, M., Roman, R. J., Greene, A. S., Jacob, H. J. Consomic rat model systems for physiological genomics. Acta Physiol Scand. 181, 585-592 (2004).
  27. Kunert, M. P., Dwinell, M. R., Lombard, J. H. Vascular responses in aortic rings of a consomic rat panel derived from the Fawn Hooded Hypertensive strain. Physiol Genomics. 42A, 244-258 (2010).
  28. Liang, M., et al. Renal medullary genes in salt-sensitive hypertension: a chromosomal substitution and cDNA microarray study. Physiol Genomics. 8, 139-149 (2002).
  29. Durand, M. J., Moreno, C., Greene, A. S., Lombard, J. H. Impaired relaxation of cerebral arteries in the absence of elevated salt intake in normotensive congenic rats carrying the Dahl salt-sensitive renin gene. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 299, H1865-H1874 (2010).
  30. Hybertson, B. M., Gao, B., Bose, S. K., McCord, J. M. Oxidative stress in health and disease: the therapeutic potential of Nrf2 activation. Mol Aspects Med. 32, 234-246 (2011).
  31. Itoh, K., et al. An Nrf2/small Maf heterodimer mediates the induction of phase II detoxifying enzyme genes through antioxidant response elements. Biochem Biophys Res Commun. 236, 313-322 (1997).
  32. Myung, S. K., et al. Efficacy of vitamin and antioxidant supplements in prevention of cardiovascular disease: systematic review and meta-analysis of randomised controlled trials. BMJ. 346, f10(2013).
  33. Fredricks, K. T., Liu, Y., Lombard, J. H. Response of extraparenchymal resistance arteries of rat skeletal muscle to reduced PO2. Am J Physiol. 267, H706-H715 (1994).
  34. Fredricks, K. T., Liu, Y., Rusch, N. J., Lombard, J. H. Role of endothelium and arterial K+ channels in mediating hypoxic dilation of middle cerebral arteries. Am J Physiol. 267, H580-H586 (1994).
  35. Frisbee, J. C., Maier, K. G., Falck, J. R., Roman, R. J., Lombard, J. H. Integration of hypoxic dilation signaling pathways for skeletal muscle resistance arteries. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 283, R309-R319 (2002).
  36. Pavlov, T. S., Ilatovskaya, D. V., Palygin, O., Levchenko, V., Pochynyuk, O., Staruschenko, A. Implementing Patch Clamp and Live Fluorescence Microscopy to Monitor Functional Properties of Freshly Isolated PKD Epithelium. J Vis Exp. (103), (2015).
  37. Nelson, M. T., Conway, M. A., Knot, H. J., Brayden, J. E. Chloride channel blockers inhibit myogenic tone in rat cerebral arteries. J Physiol. 502 (Pt 2), 259-264 (1997).
  38. Brayden, J. E., Halpern, W., Brann, L. R. Biochemical and mechanical properties of resistance arteries from normotensive and hypertensive rats. Hypertension. 5, 17-25 (1983).
  39. Weber, D. S., Lombard, J. H. Elevated salt intake impairs dilation of rat skeletal muscle resistance arteries via ANG II suppression. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 278, H500-H506 (2000).
  40. Weber, D. S., Lombard, J. H. Angiotensin II AT1 receptors preserve vasodilator reactivity in skeletal muscle resistance arteries. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 280, H2196-H2202 (2001).
  41. Wang, J., Roman, R. J., Falck, J. R., de la Cruz, L., Lombard, J. H. Effects of high-salt diet on CYP450-4A omega-hydroxylase expression and active tone in mesenteric resistance arteries. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 288, H1557-H1565 (2005).
  42. Raffai, G., et al. Modulation by cytochrome P450-4A omega-hydroxylase enzymes of adrenergic vasoconstriction and response to reduced PO2 in mesenteric resistance arteries of Dahl salt-sensitive rats. Microcirculation. 17, 525-535 (2010).
  43. Mishra, R. C., Wulff, H., Hill, M. A., Braun, A. P. Inhibition of Myogenic Tone in Rat Cremaster and Cerebral Arteries by SKA-31, an Activator of Endothelial KCa2.3 and KCa3.1 Channels. J Cardiovasc Pharmacol. 66, 118-127 (2015).
  44. Freed, J. K., Beyer, A. M., LoGiudice, J. A., Hockenberry, J. C., Gutterman, D. D. Ceramide changes the mediator of flow-induced vasodilation from nitric oxide to hydrogen peroxide in the human microcirculation. Circ Res. 115, 525-532 (2014).
  45. Beyer, A. M., Durand, M. J., Hockenberry, J., Gamblin, T. C., Phillips, S. A., Gutterman, D. D. An acute rise in intraluminal pressure shifts the mediator of flow-mediated dilation from nitric oxide to hydrogen peroxide in human arterioles. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 307, H1587-H1593 (2014).
  46. Durand, M. J., et al. Vascular actions of angiotensin 1-7 in the human microcirculation: novel role for telomerase. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 36, 1254-1262 (2016).
  47. Beyer, A. M., et al. Transition in the mechanism of flow-mediated dilation with aging and development of coronary artery disease. Basic Res Cardiol. 112, 5(2017).
  48. Muller, J. M., Chilian, W. M., Davis, M. J. Integrin signaling transduces shear stress--dependent vasodilation of coronary arterioles. Circ Res. 80, 320-326 (1997).
  49. Liu, Y., Harder, D. R., Lombard, J. H. Interaction of myogenic mechanisms and hypoxic dilation in rat middle cerebral arteries. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 283, H2276-H2281 (2002).
  50. Potocnik, S. J., et al. Endothelium-dependent vasodilation in myogenically active mouse skeletal muscle arterioles: role of EDH and K+ channels. Microcirculation. 16, 377-390 (2009).
  51. Harder, D. R. Pressure-dependent membrane depolarization in cat middle cerebral artery. Circ Res. 55, 197-202 (1984).
  52. Greene, A. S., Rieder, M. J. Measurement of vascular density. Methods Mol. Med. 51, 489-496 (2001).
  53. Hernandez, I., Cowley, A. W., Lombard, J. H., Greene, A. S. Salt intake and angiotensin II alter microvessel density in the cremaster muscle of normal rats. Am J Physiol. 263, H664-H667 (1992).
  54. Resende, M. M., Amaral, S. L., Moreno, C., Greene, A. S. Congenic strains reveal the effect of the renin gene on skeletal muscle angiogenesis induced by electrical stimulation. Physiol Genomics. 33, 33-40 (2008).
  55. Petersen, M. C., Munzenmaier, D. H., Greene, A. S. Angiotensin II infusion restores stimulated angiogenesis in the skeletal muscle of rats on a high-salt diet. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 291, H114-H120 (2006).
  56. Frisbee, J. C., Weber, D. S., Liu, Y., DeBruin, J. A., Lombard, J. H. Altered structure and mechanics of skeletal muscle arteries with high-salt diet and reduced renal mass hypertension. Microvasc Res. 59, 323-328 (2000).
  57. Drenjancevic-Peric, I., Lombard, J. H. Introgression of chromosome 13 in Dahl salt-sensitive genetic background restores cerebral vascular relaxation. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 287, H957-H962 (2004).
  58. Drenjancevic-Peric, I., Phillips, S. A., Falck, J. R., Lombard, J. H. Restoration of normal vascular relaxation mechanisms in cerebral arteries by chromosomal substitution in consomic SS.13BN rats. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 289, H188-H195 (2005).
  59. Lukaszewicz, K. M., Paudyal, M. P., Falck, J. R., Lombard, J. H. Role of vascular reactive oxygen species in regulating cytochrome P450-4A enzyme expression in Dahl salt-sensitive rats. Microcirculation. 23, 540-548 (2016).
  60. Lombard, J. H., Sylvester, F. A., Phillips, S. A., Frisbee, J. C. High-salt diet impairs vascular relaxation mechanisms in rat middle cerebral arteries. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 284, H1124-H1133 (2003).
  61. Priestley, J. R., et al. Reduced angiotensin II levels cause generalized vascular dysfunction via oxidant stress in hamster cheek pouch arterioles. Microvasc Res. 89, 134-145 (2013).
  62. Velmurugan, K., Alam, J., McCord, J. M., Pugazhenthi, S. Synergistic induction of heme oxygenase-1 by the components of the antioxidant supplement Protandim. Free Radic Biol Med. 46, 430-440 (2009).
  63. Widlansky, M. E., Gokce, N., Keaney, J. F., Vita, J. A. The clinical implications of endothelial dysfunction. J Am Coll Cardiol. 42, 1149-1160 (2003).
  64. Lukaszewicz, K. M., Falck, J. R., Manthati, V. L., Lombard, J. H. Introgression of Brown Norway CYP4A genes on to the Dahl salt-sensitive background restores vascular function in SS-5BN consomic rats. Clin Sci (Lond). 124, 333-342 (2013).
  65. Lukaszewicz, K. M., Lombard, J. H. Role of the CYP4A/20-HETE pathway in vascular dysfunction of the Dahl salt-sensitive rat. Clin Sci (Lond). 124, 695-700 (2013).
  66. Roman, R. J. P-450 metabolites of arachidonic acid in the control of cardiovascular function. Physiol Rev. 82, 131-185 (2002).
  67. Roman, R. J., Maier, K. G., Sun, C. W., Harder, D. R., Alonso-Galicia, M. Renal and cardiovascular actions of 20-hydroxyeicosatetraenoic acid and epoxyeicosatrienoic acids. Clin Exp Pharmacol. 27, 855-865 (2000).
  68. Roman, R. J., Alonso-Galicia, M. P-450 eicosanoids: A novel signaling pathway regulating renal function. News Physiol Sci. 14, 238-242 (1999).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Isolated Resistance ArteriesVideo MicroscopyVascular Control MechanismsCerebral Resistance ArteriesLaser Doppler FlowmetryFluorescent Lectin LabelingTissue Perfusion AnalysisMicrovessel Density AssessmentVasoactive Stimuli TestingEndothelial Function Evaluation

Похожие статьи