Method Article

Долгосрочный живых изображений устройства для улучшения экспериментальных манипуляций личинок данио рерио

DOI:

10.3791/56340

⸱

October 27th, 2017

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Biomedical Engineering, University of Wisconsin-Madison, 2Morgridge Institute for Research, University of Wisconsin-Madison, 3Laboratory for Optical and Computational Instrumentation, University of Wisconsin-Madison, 4Cellular and Molecular Pathology Graduate Program, University of Wisconsin-Madison, 5Department of Medical Microbiology and Immunology, University of Wisconsin-Madison, 6Department of Pediatrics, University of Wisconsin-Madison

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта рукопись описывает zWEDGI (данио рерио Wounding и захвата устройство для роста и изображений), который является разобщенным устройство, предназначенное для ориентации и сдерживать данио рерио личинки. Конструкция позволяет хвост перерезка и долгосрочной коллекции изображений с высоким разрешением флуоресцентной микроскопии заживление и регенерацию.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Данио рерио личинка — организм важной моделью для развития биологии и заживление ран. Кроме того данио рерио личинка является ценным системой для живой разрешением микроскопических изображений динамических биологических явлений в пространстве и времени с сотовой резолюции. Однако традиционный метод инкапсуляции агарозы для живых изображений могут препятствовать развития личинок и подроста тканей. Таким образом, эта рукопись описывает zWEDGI (данио рерио Wounding и захвата устройство для роста и изображений), который был разработан и изготовлены как функционально разобщенным устройство ориентации личинок для микроскопии высокого разрешения допуская хвостовой плавник перерезка в устройство и последующих безудержной хвост развития ре роста. Это устройство позволяет ранения и долгосрочное изображений при сохранении жизнеспособности. Учитывая, что форма zWEDGI 3D печати, настраиваемость его геометрии сделать его легко модифицирован для разнообразных данио рерио графических приложений. Кроме того zWEDGI предлагает многочисленные преимущества, такие как доступ к личинки во время экспериментов за ранение или для применения реагентов, параллельно ориентации несколько личинок для упорядоченной обработки изображений и повторного использования устройства.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Регенеративной способностью личинок данио рерио данио рерио делают их организма идеальная модель для изучения ответ раны, а также исцеления и отрастания1,2,3,4. Доступ к массиву данио рерио трансгенных линий и данио рерио анатомические прозрачности дальше повышения их полезности в vivo исследований рану ответ события, а также долгосрочные восстановительные процессы4. Изучение этих биологических процессов, с помощью микроскопии высокого разрешения замедленной флуоресценции поэтому требует живой изобра....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Примечание: для данио рерио личинки, которые являются 2-4 дней после оплодотворения (dpf) и следовать указаниям из животных ресурсов университета Висконсин-Мэдисон исследовательского центра был разработан дизайн базовый zWEDGI.

1. дизайн и 3D печать формы

  1. модель PDMS компонент устройства с желаемой геометрией и атрибуты в 3D моделирования программного обеспечения 5. Создайте сборку пустой формы и части PDMS и генерировать негативные формы для PDMS части, создав полость в плесени, соответствующий части PDSM. Сохраните форму как файл .stl для 3D печати ( Рисунок 2, шаг 1.1). <....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ZWEDGI PDMS microfluidic устройство является устройством функционально разобщенным, предназначенные для размещения четырех основных функций (перечислены ниже), связанные с живой изображений хвостового плавника, ранив исцеления и волоски в zebrafish личинки. PDMS был выбран для изготовления zWEDGI, потому что это не только легко доступны и отраслевым стандартом для биосовместимости, но также хорошо работает в формы. Кроме того PDMS делает устройства многоразовые и пустота твердых или остры.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Устройство zWEDGI предназначен для захвата 3D Замедленная съемка изображений путем стабилизации и ориентации рыбы в пределах небольшой рабочее расстояние объектив высокого разрешения Микроскоп. Выполняя эти спецификации, это также улучшение над традиционными агар основе подготовки для живых изображений. При изготовлении zWEDGI, которая, если не сделали правильно, может привести к дефектных устройств есть три важнейшие шаги (см. ниже):

PDMS подготовка (Рисунок 5A)<.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не имеют ничего сообщать.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы хотели бы признать первичный проект из Morgridge института для финансирования исследований и лаборатории для оптических и вычислительной аппаратуры. Мы также признаем, что финансирование из низ # R01GM102924 (AH и Кве). KH, JMS, RS, Ай и Кве задуман и разработан исследования. KH и JMS исполнил все эксперименты с поддержкой из DL, КП и RS. KH, JS, RS, Ай и Кве способствовали написания манускрипта.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Fabricate molds
Solidworks Professional Accedemic Research Программное обеспечение для 3D-моделированияDassault SystèmesSPX0117-01Fisher Unitech
Viper Si2 SLA 3D-принтер3D Systems Inc.23200-9023D Systems Inc.
Фотополимерная смола Accura 603D Systems Inc.24075-9023D Systems Inc.
денатурат спиртSunnyside5613735аппарат
постполимеризации3D Systems Inc.23363-101-00Компания 3D Systems Inc.
Нитриловые перчатки TouchNTuffAnsell92-600McMaster Carr
220B, 400B, зерно 600 T414 синяя наждачная бумага Norton66261139359, 54, 52MSC
диск из боросиликатного стекла, диаметр 2 дюймаMcMaster-CarrMIL-G-47033McMaster-Carr
Брэнсон1510R-MTH
изопропиловый медицинский спирт 70%Hydrox54845T43McMaster-Carr
10 унций прозрачный пластиковый стаканчикWNA Masterpiece557405Amazon
6-дюймовая рукоятьPerfect StixCraft WTD-500Amazon
Название<strong>Company>Номер в каталогеКомментарии
Изготовить zWEDGI PDMS device
Sylgard 184 силиконовый эластомерный комплект Dow-Corning4019862Ellworth Adhesives 
Шприц 10 млBecton Dickinson305219Vitality Medical Inc
десикаторBel-Art SciencewareF42027-0000Amazon
4 в хомуте с трещоткойPittsburgh68974Harbor Freight
lab ovenQuincy Lab Inc.20GCGlobal Industrial
пинцетнабор Aven549825McMaster-Carr
сопло для фильтрации сжатым воздухомInnotechTA-N2-2000FTCleanroom Supply
вакуумный стенд тискиWilton Tool Group63500MSC Industrial
55 мм стеклянная нижняя тарелка; 30 мм микролунка #1.5 защитное стеклоCellvisD60-30-1.5-NCellvis
очиститель плазмыHarrick PlasmaPDC-001Harrick Plasma
НазваниеCompanyНомер в каталоге>Комментарии
>Загрузка личинок
Pipetteman, P200GilsonF123601
100% этанол (разбавленный до 70% водой перед использованием)Pharmco-aaper111000200
Трансферная пипеткаFisherbrand13-711-5AFisher Scientific
сухое обезжиренное молоко2902887MP Biomedicals
двойная дистиллированная вода
N-фенилтиормочевинаSigma-AldrichP7629Sigma-Aldrich
трикаин (этил3-аминобензоат)C-FINQ-UEWestern Chemical
низкая температура плавления агарозаSigma-AldrichA0701Sigma-Aldrich
тепловой блок (инкубатор для сухой ванны)Fisher Scientific11-718-2Fisher Scientific
E3 буфер 
наконечник для пипетки с большим отверстием, 200 мклFisherbrand02-707-134общего назначения Fisher Scientific
, 200 мклFisherbrand21-197-8E
лезвие скальпеля Fisher Scientific#15 Перо2976Amazon
25G игла для шприцаBD BD305122Fisher Scientific
Name<strong>Company>Каталожный номер<strong>Комментарии
Imaging
inverted microscope
Программное обеспечение для визуализации ImarisBitplane
Menards UV Ультразвуковой очиститель Наконечник для пипетки

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Yoo, S. K., Freisinger, C. M., LeBert, D. C., Huttenlocher, A. Early redox, Src family kinase, and calcium signaling integrate wound responses and tissue regeneration in zebrafish. J. Cell Biology. 199 (2), 225-234 (2012).
  2. Kawakami, A., Fukazawa, T., Takeda, H.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Zebrafish LarvaeWound HealingLive ImagingPDMS Device3D PrintingMultiphoton MicroscopyCollagen Fiber AnalysisTissue RegrowthMicrofluidic ChannelsAgarose Encapsulation

Related Articles