Методическая статья

Создание колонизации Assay легких для циркулирующих визуализации опухолевых клеток в тканях легких

DOI:

10.3791/56761

⸱

16 июня 2018 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1The Institute of Basic Medical Sciences, College of Medicine, National Cheng Kung University, 2Department of Biochemistry and Molecular Biology, College of Medicine, National Cheng Kung University, 3Trauma Office, Children's National Health System

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Животной модели необходимо расшифровать роль циркулирующих опухолевых клеток (CTCs) в содействии легких колонизации во время метастазов рака. Здесь мы создали и успешно выступила в естественных условиях анализа специально тест требование Ассамблеи полимерных фибронектина (polyFN) на CTCs для легких колонизации.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Метастазирование является основной причиной смерти от рака. Энергично исследована роль циркулирующих опухолевых клеток (CTCs) в содействии метастазов рака, в котором легких колонизации CTCs критически способствует метастатических процессов раннего легких. Таким образом Животные модели являются единственный подход, который захватывает полный системный процесс метастазирования. Учитывая, что проблемы возникают в предыдущих экспериментальные проекты для изучения вклад ЦОК в кровеносный сосуд кровоподтек, мы создали assay колонизации в естественных условиях легких в котором долгосрочной перспективе флуоресценции клеток трассирующими, Карбоксифлуоресцеина Эстер succinimidyl (CFSE), была использована для ярлык приостановлено опухолевых клеток и легких перфузии была исполнена очистить-специально в ловушке CTCs до легкого удаления, конфокальная томография и количественной оценки. Было установлено, что полимерные фибронектина (polyFN) собрал на поверхностях КТК посредником легких колонизации в окончательном создании метастатические опухоли тканей. Здесь, чтобы специально проверить требования polyFN Ассамблеи на CTCs для легких колонизации и кровоподтек, мы провели короткий срок легких колонизации анализов в которой приостановлено клеток карциномы легкого Льюис (LLC), стабильно выражая FN-индуцируемый (shFN) или схватка индуцируемый (shScr) и предварительно помечены с 20 мкм CFSE внутривенно были привиты в мышей C57BL/6. Мы успешно продемонстрировали, что способности клеток shFN ООО колонизировать мыши легких значительно сократились по сравнению с shScr ООО клетки. Таким образом это краткосрочные методологии могут широко применяется конкретно продемонстрировать способность ЦОК в циркуляции колонизировать легких.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Метастазирование является основной причиной рака смерти1,2. Опухолевые клетки, полученные из основной ткани введите тираж в суспензии и выжить различных гематогенного вызовы, например, anoikis, иммунных нападений и убытки из-за напряжения сдвига от кровяного давления или геометрических зависимостей, прежде чем они возможность колонизировать отдаленные органы, ключевой шаг диктуют успех метастазированием3,4,5,6. Таким образом энергичные усилия в настоящее время достигнут в характеристике циркулирующих клеток опухоли (CTCs) и соотнося эти характеристики с злокачественности опухоли, метастазы и выживаемость больных раком7,8 , 9. Поскольку процесс метастазирования рака специально изображает события в естественных условиях , Животные модели являются единственный подход, который захватывает полный системный процесс метастазирования10,11,12 .

ЦОК стать метастатические опухоли тканей через несколько клеточных события, включая колонизации отдаленные органы1,2. Однако наиболее часто используемых метастазов анализов13,,1415 не позволяют соблюдать КТК колонизации отдаленные органы. Таким образом срочно необходима в vivo пробирного дизайн для визуализации колонизации КТК. Хотя несколько in vivo и ex vivo короткий срок легких колонизации, анализы были разработаны, проблемы и недостатки остаются. Например, в то время как зеленый флуоресценции белков (ГПУП)-избытком опухолевые клетки были использованы в эти assays22,23, это занимает время стабильно transfect и клонировать опухолевых клеток с достаточной интенсивности флуоресценции GFP под Микроскоп. Аналогичным образом, хотя переходные окрашивание опухолевых клеток с трассирующими сотовый долгосрочной перспективе CFSE был нанят для замены GFP-выражая опухолевых клеток, он по-прежнему трудно судить, присоединены ли CFSE-меченых опухолевые клетки или просто присутствует в сосудистую подакцизным отдаленные органы16,17.

Было установлено, что полимерные фибронектина (polyFN) собрал на поверхностях CTCs критически внести вклад в окончательное создание метастатические опухоли тканей18,19,20,21,22 . Здесь мы провели короткий срок легких колонизации анализов в которых приостановлено Льюис легких карцинома клетки (LLC) стабильно выражая FN-индуцируемый (shFN) или схватка индуцируемый (shScr) и предварительно помечены CFSE внутривенно были привиты в мышей C57BL/6. После 2-3 дня легкие мыши были впервые увлажненную с-фосфатный буфер (PBS), чтобы полностью удалить неприсоединенной ЦОК в сосудистую прежде чем подвергнуться confocal микроскопии и количественная оценка легких колонизировать LLC. Мы ясно показали, что количество легких колонизировать shFN LLC и узелки опухоли были значительно снижены по сравнению с shScr LLC, существенно подтверждающих роль polyFN Ассамблеи на ЦОК в деле содействия колонизацией и рост ЦОК в легкие. Наше исследование заслуживает дальнейшего расследования для роли polyFN в рак метастазы.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все эксперименты на мышах были исполнены в соответствии с руководящими принципами нашего института (руководство для ухода и использования лабораторных животных, NCKU медицинский колледж).

1. Подготовка документов, средства массовой информации культуры и блюда

  1. Перед началом экспериментальные протоколы, получить стерильные хирургические нити, шприцы 1 мл с иглой 26G/0,5 см (для инъекции Вену хвост), шприцы 3 мл с иглой 24G/3 см (для легких перфузии), Дульбекко изменение орел СМИ (DMEM), раствор трипсина ЭДТА (5 g/L трипсина и 0.53 мм), плода бычьим сывороточным (ФБС), ПБС (137 мм NaCl, 2,7 мм KCl, 10 мм Na2Пхо4и 1,8 мм х2PO4) и 6 см культуры блюда.

2. Подготовка и восстановление опухолевых клеток в суспензии

  1. Подготовить стерильные Дульбекко изменение орел СМИ (DMEM) содержит 10% или 20% FBS и свежезаваренным добавить 2 мм L-глютамином, ПБС и 0,05% трипсина-ЭДТА.
  2. Культура клетки в DMEM дополнена 10% FBS при 37 ° C и вырастить их до тех пор, пока существует 70-80% слияния в культуре блюдо.
  3. Удалите медиа культуры (DMEM) от блюда, следуют две автомойки с 2 мл стерильного ПБС.
  4. Добавить 1 мл 0,05% трипсина-ЭДТА в посуду тщательно освещать все клетки. Немедленно удалите 800 мкл раствора и оставить только 200 мкл в блюда. Инкубировать блюда при 37 ° C за 30 s 1 мин (в зависимости от типа клеток) и подождать до тех пор, пока большинство клеток находятся в приостановленном состоянии.
  5. Добавьте 1 mL свежих DMEM содержащие 10% FBS непосредственно в блюда, чтобы остановить Ферментативная активность трипсина и энергично Пипетка суспензию клеток вверх и вниз с 1000 мкл пипетки подготовить одну ячейку подвеска.
  6. Передать пробки microcentrifuge 1,5 мл клетки от блюдо и спина вниз клетки при комнатной температуре на 162 x g на 3 мин.
  7. Аспирационная супернатант и Ресуспензируйте опухолевых клеток в 1,5 мл DMEM, содержащий 20% FBS и конца над вращать клетки в подвеска при 37 ° C на 2 ч.
    Примечание: Если носитель желтеет во время восстановления, Обмен старых средних с свежими носитель, содержащий 20% FBS.

3. флуоресценции окрашивание и анализ опухолевых клеток в суспензии с Карбоксифлуоресцеина Succinimidyl эфира (CFSE)

  1. После восстановления клеток в суспензии рассчитывать число соответствующих жизнеспособных клеток с Трипановый синий в Нойбауэр, подсчета камеры для титрования флуоресценции, окрашивание дозы и для хвоста вен инъекций.
  2. Спин вниз клетки на 162 x g при комнатной температуре 3 мин и Ресуспензируйте гранулированных клеток в 1 мл стерилизованное ПБС, следуют комнатной температуре центрифугирования в 162 x g на 3 мин.
  3. Ресуспензируйте гранулированных клетки в 500 мкл ПБС, содержащие 10% FBS и 0, 5, 10, 20 или 40 мкм CFSE для титрования дозы и инкубировать суспензию клеток на 37 oC на 10 мин в темноте.
  4. Спин вниз клетки на 162 x g при комнатной температуре 3 мин и Ресуспензируйте гранулированных клетки с 4 мл DMEM, содержащей 1% FBS. Повторите этот шаг Стиральная еще три раза. Ресуспензируйте гранулированных клетки с 4 мл DMEM только для окончательной стирки.
  5. Тема CFSE-меченых клетки флуоресценции активированный ячейку Сортировка (FACS) анализ для количественного определения интенсивности флуоресценции одну ячейку, или хвост инъекции Вену.
    Примечание: Держите клетки на льду до выполнения инъекции Вену СУИМ анализа или хвост.

4. легких колонизации Assay

  1. Подготовка клетки, помечены 20 мкм CFSE (см. шаги 3.1 через 3.4).
    Примечание: Решить рабочую дозу CFSE для маркировки опухолевых клеток, основываясь на результатах титрование анализ СУИМ (обратитесь к шагу 3.3).
  2. Разминка хвосты 4-6 недели-старых самцов мышей C57BL/6 (6 мышей) с лампа для 5-10 мин на основе мышь для расширения вен хвост мыши.
  3. Тщательно перемешайте и аспирационная CFSE-меченых опухолевых клеток с шприц 1 мл (26Gx1/2), избегая любой пузыри в суспензии клеток (с плотностью окончательный клеток 5 х 106 клеток/мл).
  4. Тщательно вставки 1 x106 CFSE-меченых опухолевых клеток в 200 мкл DMEM в Вену хвост мыши, которая должна быть подана в мыши фиксатор.
    Примечание: Во время инъекции, если иглы помещается непосредственно в просвете Вены хвост, опухолевые клетки должен быть легко доставлены в оборот без необходимости нажать трудно на шприц. Если это трудно толкать опухолевых клеток путем, они скорее были введены вне Вены хвост, в подкожной пространство.
  5. Разделите мышей, которые внутривенно получил CFSE-меченых опухолевые клетки на две группы: одна группа претерпит легких перфузии, следуют confocal микроскопии и ImageJ квантификация assay колонизации легких и другой останется только для 4-5 недель в долгосрочной перспективе легких колонизации assay.
  6. На 20, 38 или 45 h и с 1 x 10-6 опухолевых клеток, внутривенно вводят во время курс и дозозависимый титрования анестезировать опухоль подшипник мышей с zoletil 50-75 мг/кг 50, который является широко признанным и надлежащего anesthetizer23.
    Примечание: Использование ветеринар мазь на мышей глаза для предотвращения сухости под наркозом.
  7. Ножницы хирургические продольно режут кожи и подкожной ткани из брюшной полости в область грудной клетки. Откройте плевральной полости с Ножницы хирургические и щипцы для полностью разоблачить сердца и легких.
    Примечание: Будьте осторожны избежать отсечения кровеносных сосудов.
  8. Галстук верхней полой вены (SVC) и нижней полой вены (IVC) с стерильные хирургические шовные материалы для предотвращения обратного потока раствора перфузии во время легких перфузии.
  9. Вырежьте стенке левого желудочка с Ножницы хирургические открыть щели (около 2-4 мм) для слива перфузии решение из легких.
  10. Придать ПБС в правый желудочек с 3 мл шприц и удалить слить раствор с постоянным всасывания во время легких перфузии, до тех пор, пока легкие превратить из красноватый цвет полностью бледно.

5. конфокальный микроскопических изображений и анализ колонизировали легкого опухолевые клетки

  1. Удаление легких теперь Пале из плевральной полости и отделить пять лепестков, убирания трахеи и соединительной ткани связок с хирургические ножницы и щипцы24.
  2. Подготовьте легких носилки как держатель, как показано на рисунке 3B методом намотки нейлон накладывать шов вокруг двух металлических стержней производить сетчатые текстуру с пробелом между двух стержней для размещения долей легких. Установите держатель легких в 6 см блюдо.
    Примечание: Держатель легких будет использоваться для стабилизации долях легких под объектив конфокального микроскопа.
  3. Подать и исправить долях легких на сетчатые текстуру держателя легких. Обложка и смачивают долях легких с ПБС.
  4. Тема 6-см культуры блюдо, укрывательство долях легких на держателе легких для confocal микроскопии для захвата изображений флуоресценции запись колонизировать легкого опухолевые клетки.
  5. Для изображений, используйте объективов (5 X, MPLN, НС: 0.1, WD: 20, воздуха).
  6. Вращайте колесо фильтров для NIBA (возбуждения/выбросов; 470-495 нм/510-550 Нм) и использовать 488 нм лазер для возбуждения CFSE, четко визуализировать изображения точек флуоресценции в долях легких.
  7. Вращайте колесо фильтра для СМ690 (для лазерной MaiTai HP DeepSee) для сканирования с 2.0 МКС/пиксель сканирования ускорить и оптимизировать HV, усиление и смещение уровнях.
  8. Захватить флуоресценции изображения (512 x 512 пикселей) с помощью программного обеспечения микроскоп с 10 мкс/пиксель скорость сканирования.
  9. Количественно и статистически анализа микроскопических изображений с помощью программного обеспечения ImageJ и GraphPad как описано выше21.

6. долгосрочное легких колонизации анализов

Примечание: Повторите шаги 4.1 через 4.5.

  1. Пожертвовать мышей после инокуляции опухолевых клеток для 4-5 недель и исправить их легкие с Буэна в жидкости25 за 1-2 дней.
  2. Количественно и статистически анализируем узелки опухоли из легких мышей с программного обеспечения21.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Перед выполнением assay колонизации в естественных условиях легких как показано на рисунке 1A для проверки ли polyFN на взвешенных опухолевые клетки опосредует легких колонизации и/или кровоподтек в содействии метастазов, мы сначала титруют различных концентрации CFSE, флуоресцентный соединение, которое является проницаемой и ковалентно конъюгатов внутриклеточных Амин содержащих молекул26,27 ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Наряду с давно термин легких колонизации анализов, короткий срок методологии мы здесь оценить в естественных условиях легких колонизации ЦОК в отдаленных органах явно обнародовал и дифференцированной конкретная роль polyFN, собрал на ЦОК в колонизации легких, которые затем привели к кровоподтек и метастатических процессов18,19,,2021. Хотя маркировки клетки с долгосрочной перспективе кл...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы хотели бы поблагодарить д-р Чан Минь-мин и г-жа Ya-синь Чэн за их техническую поддержку. Эта работа была поддержана Министерством науки и технологий Тайваня (большинство-103-2325-B-006-009, большинство-104-2325-B-006-001, большинство-105-2325-B-006-001 и MOST-106-2320-B-006-068-MY3) и Министерство здравоохранения и социального обеспечения (MOHW106-TDU-B-211-144004). Мы признательны также за поддержку от основной научно-исследовательской лаборатории колледжа медицины, Национальный университет Ченг Кунг, за их участием Фотон конфокального микроскопа.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Material
Borume Serum Albumin ( BSA)Cyrusbioscience (Тайбэй, Тайвань)101-9048-46-8
Bouin's FluidMCC (медицинская химическая корпорация)/POISON456-A-1GL
CFSE ProliferationDye ebiosciences65-0850-85Полное название: Карбоксифлуоресцеин сукцинимидиловый эфир
модифицированной орлиной среды Дульбекко (DMEM) (Gibco)ThermoFisher Scientific12100-061
Этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА)Cyrusbioscience (Тайбэй, Тайвань)101-6381-92-6Для приготовленного раствора трипсина-ЭДТА (Конечная концентрация: 0,53 мМ)
Фетальная бычья сыворотка (FBS)(Gibco)ThermoFisher Scientific10437-028
Льюис карцинома легких (LLC)ATCC, Манассас, Вирджиния, СШАCRL-1642
L-глутамин, USP (Gibco)ThermoFisher Scientific21051-024
Хлорид калия (KCl)Cyrusbioscience (Тайбэй, Тайвань)101-7447-40-7Для приготовленного 1X PBS ( Конечная концентрация: 2,7 мМ )
Одноосновной фосфат калия (KH2PO4)Cyrusbioscience (Тайбэй, Тайвань)101-7778-77-0Для приготовленного 1X PBS ( Конечная концентрация: 1,8 мМ )
Натрий хлорид (NaCl)Cyrusbioscience (Тайбэй, Тайвань)101-7647-14-5Для приготовленного 1X PBS (Конечная концентрация: 137mM) Двухосновной
фосфат натрия (Na2HPO4)Cyrusbioscience (Тайбэй, Тайвань)101-10039-32-4Для приготовленного 1X PBS (Конечная концентрация: 10mM)
Trypan BlueSigma AldrichT61460,5 г смеси со 100 мл 1X PBS
TrypsinSigma AldrichT4799Для приготовления раствора трипсина-ЭДТА ( Конечная концентрация: 5 г/л )
Zoletil 50VirbacРазбавить 1X PBS 
Name<strong>CompanyНомер в каталогеКомментарии
>Оборудование
Компактная настольная центрифуга 2420KUBOTA Co.2420
Чашка для культур (6 см)Wuxi NEST Biotechnology Co.
Одноразовый шприц (с иглой)Perfect Medical Industry Co.24G/3 см;3 мл & 26G/0,5 см;1 мл
Торцевой миксерC.T.I YOUNG CHENNTS-20Для восстановления взвешенных клеток 
FACSCalibur (FACS)BD biosciences
ЩипцыDimeda10.102.14
Forma Direct Heat CO2 инкубаторThermo Fisher Scientific Inc.HEPA CLASS 100
Удерживатель мыши (Цилиндрический ограничитель 15-30 г)Stoelting51338
Многофотонный конфокальный микроскоп BX61WIOlympusFV1000MPE
Счетная камера НейбауэраMarienfeld-Superior640010
Хирургические ножницыDimeda08.370.11
Хирургические швы UNIK SURGICAL ШОВНЫЕ НИТИ MFG. CO.No 0034Черный плетеный шелк; нерассасывающийся (25 ярдов; U.S.P. 4/0)
1,5 мл микроцентрифужная пробиркаWuxi NEST Biotechnology Co.
15 мл пробирка GreinerGreiner bio-one188271
705001615001

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Massague, J., Obenauf, A. C. Metastatic colonization by circulating tumour cells. Nature. 529 (7586), 298-306 (2016).
  2. Lambert, A. W., Pattabiraman, D. R., Weinberg, R. A. Emerging Biological Principles of Metastasis. Cell. 168 (4), 670-691 (2017).
  3. Mohme, M., Riethdorf, S., Pantel, K. Circulating and disseminated tumour cells - mechanisms of immune surveillance and escape. Nat Rev Clin Oncol. 14 (3), 155-167 (2017).
  4. Steinert, G., et al. Immune escape and survival mechanisms in circulating tumor cells of colorectal cancer. Cancer Res. 74 (6), 1694-1704 (2014).
  5. Mahauad-Fernandez, W. D., Okeoma, C. M. Cysteine-linked dimerization of BST-2 confers anoikis resistance to breast cancer cells by negating proapoptotic activities to promote tumor cell survival and growth. Cell Death Dis. 8 (3), e2687(2017).
  6. Maheswaran, S., Haber, D. A. Circulating tumor cells: a window into cancer biology and metastasis. Curr Opin Genet Dev. 20 (1), 96-99 (2010).
  7. Yu, M., et al. RNA sequencing of pancreatic circulating tumour cells implicates WNT signalling in metastasis. Nature. 487 (7408), 510-513 (2012).
  8. Adams, D. L., et al. Mitosis in circulating tumor cells stratifies highly aggressive breast carcinomas. Breast Cancer Res. 18 (1), 44(2016).
  9. Baccelli, I., et al. Identification of a population of blood circulating tumor cells from breast cancer patients that initiates metastasis in a xenograft assay. Nat Biotechnol. 31 (6), 539-544 (2013).
  10. Malladi, S., et al. Metastatic Latency and Immune Evasion through Autocrine Inhibition of WNT. Cell. 165 (1), 45-60 (2016).
  11. Spiegel, A., et al. Neutrophils Suppress Intraluminal NK Cell-Mediated Tumor Cell Clearance and Enhance Extravasation of Disseminated Carcinoma Cells. Cancer Discov. 6 (6), 630-649 (2016).
  12. Pattabiraman, D. R., et al. Activation of PKA leads to mesenchymal-to-epithelial transition and loss of tumor-initiating ability. Science. 351 (6277), aad3680(2016).
  13. van der Weyden, L., et al. Genome-wide in vivo screen identifies novel host regulators of metastatic colonization. Nature. 541 (7636), 233-236 (2017).
  14. Obenauf, A. C., et al. Therapy-induced tumour secretomes promote resistance and tumour progression. Nature. 520 (7547), 368-372 (2015).
  15. Genovese, G., et al. Synthetic vulnerabilities of mesenchymal subpopulations in pancreatic cancer. Nature. 542 (7641), 362-366 (2017).
  16. von Horsten, S., et al. Stereological quantification of carboxyfluorescein-labeled rat lung metastasis: a new method for the assessment of natural killer cell activity and tumor adhesion in vivo and in situ. J Immunol Methods. 239 (1-2), 25-34 (2000).
  17. Reymond, N., et al. Cdc42 promotes transendothelial migration of cancer cells through beta1 integrin. J Cell Biol. 199 (4), 653-668 (2012).
  18. Cheng, H. C., Abdel-Ghany, M., Elble, R. C., Pauli, B. U. Lung endothelial dipeptidyl peptidase IV promotes adhesion and metastasis of rat breast cancer cells via tumor cell surface-associated fibronectin. J Biol Chem. 273 (37), 24207-24215 (1998).
  19. Huang, L., et al. Protein kinase Cepsilon mediates polymeric fibronectin assembly on the surface of blood-borne rat breast cancer cells to promote pulmonary metastasis. J Biol Chem. 283 (12), 7616-7627 (2008).
  20. Chang, Y. H., et al. Secretomic analysis identifies alpha-1 antitrypsin (A1AT) as a required protein in cancer cell migration, invasion, and pericellular fibronectin assembly for facilitating lung colonization of lung adenocarcinoma cells. Mol Cell Proteomics. 11 (11), 1320-1339 (2012).
  21. Wang, Y. J., et al. Pterostilbene prevents AKT-ERK axis-mediated polymerization of surface fibronectin on suspended lung cancer cells independently of apoptosis and suppresses metastasis. J Hematol Oncol. 10 (1), 72(2017).
  22. Cheng, H. C., Abdel-Ghany, M., Pauli, B. U. A novel consensus motif in fibronectin mediates dipeptidyl peptidase IV adhesion and metastasis. J Biol Chem. 278 (27), 24600-24607 (2003).
  23. Hsu, Y. Y., et al. Thrombomodulin is an ezrin-interacting protein that controls epithelial morphology and promotes collective cell migration. FASEB J. 26 (8), 3440-3452 (2012).
  24. Arlt, M. J., Born, W., Fuchs, B. Improved visualization of lung metastases at single cell resolution in mice by combined in-situ perfusion of lung tissue and X-Gal staining of lacZ-tagged tumor cells. J Vis Exp. (66), e4162(2012).
  25. Shi, Y., Parhar, R. S., Zou, M., Al-Mohanna, F. A., Paterson, M. C. Gene therapy of melanoma pulmonary metastasis by intramuscular injection of plasmid DNA encoding tissue inhibitor of metalloproteinases-1. Cancer Gene Ther. 9 (2), 126-132 (2002).
  26. Parish, C. R. Fluorescent dyes for lymphocyte migration and proliferation studies. Immunol Cell Biol. 77 (6), 499-508 (1999).
  27. Quah, B. J., Warren, H. S., Parish, C. R. Monitoring lymphocyte proliferation in vitro and in vivo with the intracellular fluorescent dye carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester. Nat Protoc. 2 (9), 2049-2056 (2007).
  28. Migone, F. F., et al. In vivo imaging reveals an essential role of vasoconstriction in rupture of the ovarian follicle at ovulation. Proc Natl Acad Sci U S A. 113 (8), 2294-2299 (2016).
  29. Itkin, T., et al. Distinct bone marrow blood vessels differentially regulate haematopoiesis. Nature. 532 (7599), 323-328 (2016).
  30. Jiang, M., Qin, C., Han, M. Primary breast cancer induces pulmonary vascular hyperpermeability and promotes metastasis via the VEGF-PKC pathway. Mol Carcinog. 55 (6), 1087-1095 (2016).
  31. Aceto, N., et al. Circulating tumor cell clusters are oligoclonal precursors of breast cancer metastasis. Cell. 158 (5), 1110-1122 (2014).
  32. Zheng, Y., et al. Expression of beta-globin by cancer cells promotes cell survival during blood-borne dissemination. Nat Commun. 8, 14344(2017).
  33. Chen, X., et al. Retinoic acid facilitates inactivated transmissible gastroenteritis virus induction of CD8(+) T-cell migration to the porcine gut. Sci Rep. 6, 24152(2016).
  34. Saranchova, I., et al. Discovery of a Metastatic Immune Escape Mechanism Initiated by the Loss of Expression of the Tumour Biomarker Interleukin-33. Sci Rep. 6, 30555(2016).
  35. Ahmed, M., et al. An Osteopontin/CD44 Axis in RhoGDI2-Mediated Metastasis Suppression. Cancer Cell. 30 (3), 432-443 (2016).
  36. Hoffman, R. M. In vivo imaging of metastatic cancer with fluorescent proteins. Cell Death Differ. 9 (8), 786-789 (2002).
  37. Mendoza, A., et al. Modeling metastasis biology and therapy in real time in the mouse lung. J Clin Invest. 120 (8), 2979-2988 (2010).
  38. Meacham, C. E., Morrison, S. J. Tumour heterogeneity and cancer cell plasticity. Nature. 501 (7467), 328-337 (2013).
  39. Wagenblast, E., et al. A model of breast cancer heterogeneity reveals vascular mimicry as a driver of metastasis. Nature. 520 (7547), 358-362 (2015).
  40. Nguyen, D. X., Bos, P. D., Massague, J. Metastasis: from dissemination to organ-specific colonization. Nat Rev Cancer. 9 (4), 274-284 (2009).
  41. Ragelle, H., et al. Chitosan nanoparticles for siRNA delivery: optimizing formulation to increase stability and efficiency. J Control Release. 176, 54-63 (2014).
  42. Chu, V. T., et al. Increasing the efficiency of homology-directed repair for CRISPR-Cas9-induced precise gene editing in mammalian cells. Nat Biotechnol. 33 (5), 543-548 (2015).
  43. Wirtz, D., Konstantopoulos, K., Searson, P. C. The physics of cancer: the role of physical interactions and mechanical forces in metastasis. Nat Rev Cancer. 11 (7), 512-522 (2011).
  44. Joyce, J. A., Pollard, J. W. Microenvironmental regulation of metastasis. Nat Rev Cancer. 9 (4), 239-252 (2009).
  45. Sanchez-Laorden, B., et al. BRAF inhibitors induce metastasis in RAS mutant or inhibitor-resistant melanoma cells by reactivating MEK and ERK signaling. Sci Signal. 7 (318), ra30(2014).
  46. Torchiaro, E., et al. Peritoneal and hematogenous metastases of ovarian cancer cells are both controlled by the p90RSK through a self-reinforcing cell autonomous mechanism. Oncotarget. 7 (1), 712-728 (2016).
  47. Wan, J., et al. Establishment of monoclonal HCC cell lines with organ site-specific tropisms. BMC Cancer. 15, 678(2015).
  48. Ye, Y., Liu, S., Wu, C., Sun, Z. TGFbeta modulates inflammatory cytokines and growth factors to create premetastatic microenvironment and stimulate lung metastasis. J Mol Histol. 46 (4-5), 365-375 (2015).
  49. Morales, M., et al. RARRES3 suppresses breast cancer lung metastasis by regulating adhesion and differentiation. EMBO Mol Med. 6 (7), 865-881 (2014).
  50. Stone, J. P., et al. Mechanical removal of dendritic cell-generating non-classical monocytes via ex vivo lung perfusion. J Heart Lung Transplant. 33 (8), 864-869 (2014).
  51. Vettorazzi, S., et al. Glucocorticoids limit acute lung inflammation in concert with inflammatory stimuli by induction of SphK1. Nat Commun. 6, 7796(2015).
  52. Urade, Y., Yoshida, R., Kitamura, H., Hayaishi, O. Induction of indoleamine 2,3-dioxygenase in alveolar interstitial cells of mouse lung by bacterial lipopolysaccharide. J Biol Chem. 258 (10), 6621-6627 (1983).
  53. Hong, G., et al. Through-skull fluorescence imaging of the brain in a new near-infrared window. Nat Photonics. 8 (9), 723-730 (2014).
  54. Liu, Q., Guo, B., Rao, Z., Zhang, B., Gong, J. R. Strong two-photon-induced fluorescence from photostable, biocompatible nitrogen-doped graphene quantum dots for cellular and deep-tissue imaging. Nano Lett. 13 (6), 2436-2441 (2013).
  55. Peti-Peterdi, J., Burford, J. L., Hackl, M. J. The first decade of using multiphoton microscopy for high-power kidney imaging. Am J Physiol Renal Physiol. 302 (2), F227-F233 (2012).
  56. Duda, D. G., et al. Malignant cells facilitate lung metastasis by bringing their own soil. Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (50), 21677-21682 (2010).
  57. Gupta, G. P., et al. Mediators of vascular remodelling co-opted for sequential steps in lung metastasis. Nature. 446 (7137), 765-770 (2007).
  58. Kosaka, N., et al. Neutral sphingomyelinase 2 (nSMase2)-dependent exosomal transfer of angiogenic microRNAs regulate cancer cell metastasis. J Biol Chem. 288 (15), 10849-10859 (2013).
  59. Hoshino, A., et al. Tumour exosome integrins determine organotropic metastasis. Nature. 527 (7578), 329-335 (2015).
  60. Jaskelioff, M., et al. Telomerase deficiency and telomere dysfunction inhibit mammary tumors induced by polyomavirus middle T oncogene. Oncogene. 28 (48), 4225-4236 (2009).
  61. Si, L. L., Lv, L., Zhou, W. H., Hu, W. D. Establishment and identification of human primary lung cancer cell culture in vitro. Int J Clin Exp Pathol. 8 (6), 6540-6546 (2015).
  62. Weng, D., et al. Metastasis is an early event in mouse mammary carcinomas and is associated with cells bearing stem cell markers. Breast Cancer Res. 14 (1), R18(2012).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

CFSELewisC57BL 6

Похожие статьи