С помощью мыши яйцеклеток для оценки человеческого гена функции во время мейоза я

Diego Marin; Alexandra L. Nguyen; Richard T. Scott, Jr.; Karen Schindler

doi:10.3791/57442

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

С помощью мыши яйцеклеток для оценки человеческого гена функции во время мейоза я

8.3K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/57442

⸱

10 апреля 2018 г.

Diego Marin^*¹^,² , Alexandra L. Nguyen^*³ , Richard T. Scott, Jr.¹^,² , Karen Schindler³

¹IVI-RMA New Jersey, ²Jefferson College of Biomedical Sciences, Thomas Jefferson University, ³Department of Genetics, Rutgers, The State University of New Jersey

^* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Как генетические варианты, связанные с болезнью человека начинают стать обнаружили, она становится все более важным разработать системы, позволяющие быстро оценить биологическое значение этих выявленных вариантов. Этот протокол описывает методы для оценки функции человеческого гена во время женского мейоз, я с помощью мыши ооцитов.

Аннотация

Эмбриональных анеуплоидия является основной причиной генетических бесплодия в организме человека. Большинство из этих событий происходят во время женского мейоз, и хотя положительно коррелирует с возрастом матери, возраст только не всегда прогнозировать риск возникновения анеуплоидных эмбриона. Таким образом варианты гена может приходится неправильные хромосома сегрегации при женских. Учитывая, что ограничен доступ к человеческой яйцеклетки для исследовательских целей, серия анализов были разработаны для изучения функции человеческого гена во время мейоза, я с помощью мыши ооцитов. Во-первых матричная РНК (мРНК) гена и вариант гена интереса являются microinjected в профазе I арестован мыши ооцитов. После предоставления времени для выражения, ооциты синхронно выпускаются в meiotic созревания для завершения мейоза я. Путем пометки мРНК с последовательностью флуоресцентные репортер, такие как Зеленый флуоресцентный белок (КГВ), локализация человеческий белок может быть оценена в дополнение к фенотипические изменения. Например, прибыль или потеря функции могут расследоваться путем создания экспериментальных условиях, которые бросают вызов продукт гена исправить meiotic ошибки. Хотя эта система является выгодным в расследовании человеческий белок функции во время женских, адекватной интерпретации результатов следует провести учитывая, что выражение протеина не на местных уровнях и, если не контролируется для (т.е. постучал out или вниз) мышиных гомолог также присутствуют в системе.

Введение

Бесплодие является состоянием, которое влияет на 10-15% населения репродуктивного возраста ¹, из которых почти половина искать лечение ². Хотя этиология бесплодия разнообразны и во многих случаях многофакторного, наиболее распространенных генетических аномалий в организме человека является эмбриональных анеуплоидия ³. Анеуплоидия определяется как отклонение (прибыль или убыток) правильное количество хромосом в клетке. Феномен анеуплоидия в человеческих эмбрионов является общим и увеличивается с возрастом матери ⁴^,⁵. Четыре рандомизированны....