Анион обмен метода на основе смолы, адаптированных к жидкости, продемонстрированную выборки на основе покушение Биоаэрозоль вирусов. При сочетании с течению молекулярной обнаружения, метод позволяет легким и чувствительных обнаружения вирусов из биоаэрозоли.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Обнаружение вирусов от биоаэрозоли, используя анион обмен смолы
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Этот протокол демонстрирует метод выборки настроить Биоаэрозоль на вирусы. В этой системе анион обмен смолы в сочетании с жидкого воздуха, покушение на основе выборки устройства для эффективной концентрации отрицательно заряженные вирусов от биоаэрозоли. Таким образом смолы служит дополнительной концентрации шага в рабочем Биоаэрозоль выборки. Нуклеиновые кислоты добыча вирусных частиц затем выполняется непосредственно из смолы обмен анион, с результирующей выборки, подходит для молекулярного анализа. Кроме того этот протокол описывает заказ Биоаэрозоль камеры, способные генерировать вирус Ладена биоаэрозоли под разнообразные условия окружающей среды и позволяющие непрерывный мониторинг экологических переменных, таких как температура, влажность, скорость ветра и массовой концентрации аэрозолей. Главным преимуществом использования этого протокола является повышенная чувствительность обнаружения вирусных, как оценивать через прямое сравнение в неизмененном обычного жидкого Импинджера. Другие преимущества включают возможность сосредоточиться отрицательно заряженные различных видов вирусов, низкая стоимость анион обмен смолы (~$0.14 на сэмпл) и простота использования. Недостатки включают неспособность оценить инфективности смолы адсорбированные вирусных частиц настоящего Протокола, и потенциально потребность в оптимизации жидких проб буфера используется внутри Импинджера.
Введение
Цель этого метода является обеспечение высокочувствительный Биоаэрозоль выборки платформы для облегчения молекулярной обнаружение отрицательно заряженные вирусов от биоаэрозоли. Микроорганизмов, в том числе вирусные частицы, могут выжить в биоаэрозоли для длительных периодов времени1. Биоаэрозоли могут путешествовать на относительно большие расстояния и поддерживать жизнеспособность и инфективности, о чем свидетельствует вспышка болезни легионеров, породивший от промышленных охладительных башен, расположенных на расстоянии 6 км от пострадавших лиц и в результате 18 погибших2. Косвенные передачи вирусов для людей при поср....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. Установка камеры Биоаэрозоль (см. Рисунок 2)
-
Предварительно загрузите жидкого impingers с 20 мл 0,01 М фосфат буфер солевой, рН 7,5 (PBS).
- Добавить 0,5 г аниона обмен смолы и приостановить в PBS одного из жидкого impingers, с другой жидкости Импинджера, выступающей в качестве элемента управления.
- Позиция жидких impingers параллельно внутри Биоаэрозоль камеры с помощью зажима стенды с вводами аэрозоля, стоящих перед прибором.
Примечание: Для дополнительных сведений см. - Размещайте монитор прямого чтения аэрозолей вблизи жидкие impinger....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Рисунок 1 демонстрирует принцип, лежащий в основе заряда захват вирусов от биоаэрозоли через включение смолы в основе жидких impingers. Рисунок 2 показывает настройку камеры на заказ Биоаэрозоль. Рисунок 3 описывает шаги по настройке эксперимента аэрозолизации и меры для обеспечения контроля качества. Рисунок 4 показывает кривые усилители для обнаружения qRT ПЦР отрицате.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Этот протокол описывает метод для чувствительных вирусный захвата от биоаэрозоли, с использованием модифицированных жидкий impingers. Оптимизированный метод для обнаружения и количественного определения вирусной нагрузки в биоаэрозоли. Конкретные изменения, продемонстрировали здесь включает в себя добавление анион смолы обмен жидкости, содержащиеся в общей жидкости Импинджера. Этот метод был разработан для его простота в обработке течению выборки, тогда как другие методы обработки образца центрифугирования, фильтрации и .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют ничего сообщать.
Благодарности
Эта работа была поддержана финансирование из CDC/NIOSH высокие равнины межгорной центра сельскохозяйственных здоровья и безопасности (5U54OH008085) и Программа грантов оценки Колорадо Bioscience обнаружения (14BGF-16).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Escherichia coli бактериофаг MS2 (ATCC 15597-B1) | Американская коллекция типовых культур | ATCC 15597-B1 | |
| FluMist Quadrivalent | AstraZeneca | Contact производитель | Вирусные компоненты этой вакцины могут ежегодно изменяться |
| CFX96 Touch Real-Time PCR Detection System | Bio-Rad | 1855195 | |
| Праймеры и зонды | Integrated DNA Technologies | NA | |
| 0.2 µ M стерильный фильтр | NA | NA | |
| 1 л бутылочки с пирексом или эквивалент | NA | NA | |
| 1 мл наконечники для пипетки | NA NA | ||
| 1 мл пипетка | NA | NA | |
| 50 мл серологическая пипетка | NA | NA | |
| ПЦР пробирки | NA | NA | |
| Pipet-aid или эквивалент | NA | NA | |
| QIAamp Viral RNA Mini Kit | Qiagen | 52904 | |
| QuantiTect Probe RT-PCR Kit | Qiagen | 204443 | |
| Амберлит IRA-900 хлоридная форма | Sigma-Aldrich | 216585-500G | |
| Фосфат буферный физиологический | Sigma-Aldrich | P5368-10PAK | |
| Вода (класс молекулярной биологии) | Sigma-Aldrich | W4502-1L | |
| Микроцентрифужные пробирки Eppendorf DNA LoBind | ThermoFisher | 13-698-791 | |
| Falcon 50 мл Конические центрифужные пробирки | ThermoFisher | 14-432-22 | |
| Falcon Полипропиленовые центрифужные пробирки | ThermoFisher | 05-538-62 | |
| SuperScript III Platinum One-Step qRT-PCR Kit с ROX | ThermoFisher | 11745100 | |
| SKC Biosampler 20 мл, набор из 3 предметов стекла | SKC Inc. | 225-9593 | |
| Насосы для отбора проб Vac-u-Go SKC | Inc. | 228-9695 | |
| Небулайзер Collison (6-струйный) | BGI Inc. | NA | |
| HEPA капсула | PALL | 12144 | |
| Q-TRAK монитор качества воздуха в помещении 8554 | TSI Inc. | NA | |
| Alnor velometer тепловой анемометр AVM440-A | TSI Inc. | NA | |
| SidePak AM510 персональный аэрозольный монитор | TSI Inc. | НА | |
| Биоаэрозольная камера | НА | НА |
Ссылки
- Pirtle, E. C., Beran, G. W. Virus survival in the environment. Revue scientifique et technique (International Office of Epizootics). 10 (3), 733-748 (1991).
- Nguyen, T. M., et al. A community-wide outbreak of legionnaires disease linked to industrial cooling towers--how far can contaminated aerosols spre....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
