Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Оценка ангиогенетических свойств стволовых клеток рака яичников с использованием трехмерной системы кокультур, NICO-1

2.5K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/61751

⸱

5 декабря 2020 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 

В этой статье

Краткое содержание

Стволовые клетки рака яичников (OCSC) ответственны за начало рака, рецидив, терапевтическую резистентность и метастазирование. Считается, что сосудистая ниша OCSC способствует самообновлению OCSC, что приводит к хеморезистентности. Этот протокол обеспечивает основу для создания воспроизводимой модели сосудистой ниши OCSC in vitro.

Аннотация

Раковые стволовые клетки (CSC) находятся в поддерживающей нише, представляя собой микросреду, состоящую из соседних стромальных клеток, сосудов и внеклеточного матрикса. Способность ЦОК участвовать в развитии эндотелия представляет собой важную характеристику, которая непосредственно способствует общему пониманию механизмов опухолевого генеза и метастазирования опухоли. Целью данной работы является создание воспроизводимой методологии исследования опухолевой способности стволовых клеток рака яичников (OCSC). Здесь мы изучили механизм неоваскуляризации между эндотелиальными клетками и OCSC наряду с морфологическими изменениями эндотелиальных клеток с использованием модели совместной культуры in vitro NICO-1. Этот протокол позволяет визуализировать стадию неоваскуляризации, окружающую OCSC, с течением времени. Метод может дать представление об ангиогенетических свойствах OCSC в метастазировании опухоли.

Введение

Рак яичников является восьмым наиболее распространенным злокачественным новообразованием у женщин во всем мире, с примерно 300 000 новых диагнозов и, по оценкам, 180 000 смертей в год1. При первоначальной диагностике рак яичников часто проявляется тяжелыми симптомами, причем около 75% пациенток уже находятся на стадии III-IV. Соответственно, 5-летняя выживаемость составляет <30%, а смертность является самой высокой среди гинекологических раковых заболеваний2, причем эффективность лечения рака яичников сильно зависит от клинических факторов, таких как успешное выполнение операции по удалению, устойчивость к химиотерапии и....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все процедуры выполнялись в соответствии с протоколом, утвержденным Комитетом по этике благосостояния человека. Все пациенты предоставили письменное информированное согласие на исследовательское использование их образцов, а сбор и использование тканей для этого исследования были одобрены Комитетом по этике исследований генома человека, генного анализа в Университете Тейкё.

1. Выделение и культивирование стволовых клеток рака яичников (OCSC) у пациентов с раком яичников и асцитом в кабинете биобезопасности уровня 2

  1. Изолируйте раковые стволовые клетки из асцита рака яичников человека, полученного с помощью парацентеза. Соберите не м....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Мы собрали асцитовые жидкости, полученные от пациенток с прогрессирующим раком яичников во время операции или парацентеза с целью выполнения долгосрочной стабильной культуры для сфероидов. Здесь мы представляем случаи долгосрочной сфероидной культуры Яичников, называемой CSC1 и CSC2. Обе клеточные линии несут один и тот же диагноз и гистологические профили. Механистические роли OCSC, лежащие в основе взаимодействия с эндотелиальными клетками, необходимыми для индуцирования неоваскуляризац.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Представленный протокол описывает, как имитировать микроокружение опухоли OCSC в условиях in vitro. Первичный компонент метода представляет собой высоковоспроизводимую модель кокультуры, полученную с использованием системы NICO-1, косвенной системы кокультур Transwell. Многие из доступных в настоящее время моделей кокультуры изучают влияние прямого клеточного контакта на кокутивируемые клеточные популяции 12,13,14,15,16,17,18.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Эта работа была поддержана грантом на научные исследования C (грант No 19K09834 для K.N.) от Министерства образования, науки и культуры Японии.

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
0,025% Трипсин ThermoR001100
10 мл ПипеткаThermo170356N
1250 &микро; L Наконечник для дозатораQSPT112XLRS-Q
15 мл Nunc339650
200 &; L Наконечник для дозатораQSPT110RS-NEW
2-меркаптоэтанолThermo (Gibco)21985023
5 мл ПипеткаThermo170366N
50 мл ТрубкаCorning430290
AccuMAXInnovative Cell TechnologiesAM105
BioCoatTM Collagen I 60 мм ТарелкаCorning 356401
ЦентрифугаKUBOTA2800
Costar 6 Well Clear Flat Bottom Ultra Low Attachment Multiple Well PlatesCorning3471
Endothelial Cell Growth Medium 2 PromoCellC-22011 
ЭтанолWAKO057-00456
FGF-BasicThermo (Gibco)PHG0021
HistodenzSIGMAD2158
HUEhT-1 элементJCRB Cell BankJCRB1458
ICCP Filter 0.6 µ mGinrei Lab.2525-06
Инсулин, человеческийSIGMA (Roche)11376497001
ЛюминометрPerkinElmerARVO MX-flad
Matrigel MatrixCorning 356234
микроскопYokogawaCQ-1
NICO-1Ginrei Lab.2501-02
OptiPlate-96PerkinElmer6005290
P1000 ПипетGilsonF123602
P200 ПипеткаGilsonF123601
PBSThermo (Gibco)14190-144
StemPro hESC SFMThermo (Gibco)A1000701
Передаточная пипеткаFALCON357575
Y-27632WAKO253-00513

Ссылки

  1. Bray, F., et al. Global cancer statistics 2018: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA, a Cancer Journal for Clinicians. 68, 394-424 (2018).
  2. Lengyel, E.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Стволовые раковые клетки рака яичниковстволовые раковые клеткисистема 3D-сокультивированиясистема NICO-1анализ формирования трубоксокультивирование эндотелиальных клетокцентрифугирование в градиенте плотностисверхнизкая адгезиягидрогель внеклеточного матриксаформирование сосудистых трубок