Методическая статья

Экспериментальный аутоиммунный увеит: внутриглазная воспалительная модель мыши

DOI:

10.3791/61832

⸱

12 января 2022 г.

 ,  ,  , 
1UCL Institute of Ophthalmology, University College London

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В этом отчете мы представляем протокол, который позволяет исследователю сгенерировать мышиную модель внутриглазного увеита. Эта модель, чаще называемая экспериментальным аутоиммунным увеитом (EAU), охватывает многие аспекты заболеваний человека. Здесь мы опишем, как индуцировать и контролировать прогрессирование заболевания, используя несколько показаний.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Экспериментальный аутоиммунный увеит (EAU) управляется иммунными клетками, реагирующими на собственные антигены. Многие особенности этой неинфекционной, внутриглазной модели воспалительного заболевания повторяют клинический фенотип заднего увеита, поражающего людей. EAU был надежно использован для изучения эффективности новых воспалительных терапевтических средств, их способа действия и для дальнейшего исследования механизмов, лежащих в основе прогрессирования внутриглазных заболеваний. Здесь мы приводим подробный протокол по индукции EAU у мыши C57BL/6J – наиболее широко используемого модельного организма с восприимчивостью к этому заболеванию. Клиническая оценка тяжести и прогрессирования заболевания будет продемонстрирована с помощью фундоскопии, гистологического исследования и флуоресцеиновой ангиографии. Процедура индукции включает подкожную инъекцию эмульсии, содержащей пептид (IRBP1-20) из глазного белка интерфоторецептора ретиноидового связывающего белка (также известного как ретинолсвязывающий белок 3), complete Freund's Adjuvant (CFA) и дополненного убитой Mycobacterium tuberculosis. Инъекция этой вязкой эмульсии на заднюю часть шеи сопровождается однократной внутрибрюшинной инъекцией токсина Bordetella pertussis . При появлении симптомов (12-14 день) и под общим наркозом делаются фундоскопические снимки для оценки прогрессирования заболевания путем клинического обследования. Эти данные можно напрямую сравнить с данными в более поздние моменты времени и пик заболевания (день 20-22) с проанализированными различиями. В то же время этот протокол позволяет исследователю оценить потенциальные различия в проницаемости сосудов и повреждениях с помощью флуоресцеиновой ангиографии. EAU может быть индуцирован у других штаммов мышей - как дикого типа, так и генетически модифицированных - и в сочетании с новыми методами лечения, обеспечивающими гибкость для изучения эффективности лекарств и / или механизмов заболевания.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Этот протокол продемонстрирует, как индуцировать экспериментальный аутоиммунный увеит (EAU) у мыши C57BL/6J путем однократной подкожной инъекции антигена сетчатки в эмульгированном адъюванте. Методы мониторинга и оценки прогрессирования заболевания будут детализированы с помощью фандоскопической визуализации и гистологического исследования с изложенными в них параметрами измерения. Кроме того, будет обсуждаться флуоресцеиновая ангиография, методика исследования структуры кровеносных сосудов сетчатки и проницаемости.

Эта модель EAU резюмирует центральные особенности неинфекционного заднего увеита у людей в отношении клиникопатологических характеристик и основных клеточных и молекулярных механизмов, которые управляют заболеванием. EAU опосредована подмножествами Th1 и/или Th17 самореактивных CD4+T-лимфоцитов, как показано в экспериментах по переносу усыновления и у мышей, обедненных IFNγ1. Большая часть нашего понимания потенциальной роли этих клеток при увеите исходит из изучения EAU2, где клетки Th1 и Th17 обнаруживаются в тканях сетчатки3. Часто EAU используется в качестве доклинической модели для оценки полезности новых методов лечения в ослаблении заболевания. Терапевтические подходы, которые успешно модулировали болезнь EAU, показали некоторую эффективность в клинике и достигли статуса одобренного FDA. Примерами этого являются группы иммунорегуляторных препаратов, таких как Т-клеточная таргетная терапия: циклоспорин, FK-506 и рапамицин 4,5,6. В последнее время в этой модели также были изучены вмешательства, нацеленные на новые пути, для изучения как механизма, так и влияния на исход заболевания. К ним относятся нацеливание транскрипционной регуляции через считыватель хроматина Bromodomain Extra-Terminal (BET) белки и ингибиторы P-TEFb3. Более того, более традиционные подходы, такие как ингибитор VLA-4, недавно продемонстрировали подавление в EAU посредством модуляции эффекторных CD4 + Т-клеток7. Кроме того, было обнаружено, что нацеливание на клетки Th17 с помощью TMP778, обратного агониста RORγt, значительно подавляет EAU8. Кроме того, эта модель дает возможность изучить хроническое аутоиммунное воспаление в сетчатке и сопутствующие основные механизмы, такие как прайминг лимфоцитов.

Основными показаниями для доклинических исследований EAU являются клиническая оценка путем выполнения визуализации фундоскопии сетчатки и реже путем оценки целостности сетчатки с помощью оптической когерентной томографии (OCT). Гистопатологическая оценка сетчатки и иммунофенотипирование клеток сетчатки методом проточной цитометрии затем проводятся при прекращении. Фундоскопия - это простая в использовании живая система визуализации, которая позволяет быстро и воспроизводимо проводить клиническую оценку всей сетчатки. Для иммуногистохимических оценок методики основаны на подготовке срезов сетчатки, которые позволяют изучать архитектуру тканей на степень воспаления и структурного повреждения9. Критерии оценки и традиционные системы оценки для всех используемых методов будут изложены в рамках этого протокола. Степень повреждения, регистрируемого с помощью фандоскопической визуализации, часто тесно коррелирует с гистологическими изменениями. Этот двойной подход к мониторингу и оценке тяжести заболевания обеспечивает большую чувствительность и более надежные результаты измерения.

EAU является хорошо зарекомендовавшей себя, широко используемой моделью для доклинического тестирования и исследования иммуноопосредованных заболеваний глаз. Эта модель надежна и воспроизводима с >95% заболеваемости и генерирует всеобъемлющие данные, которые могут быть использованы для проверки или отказа от новых методов лечения внутриглазного воспалительного заболевания, которое представляет собой основную причину слепоты трудоспособного возраста во всем мире10.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все эксперименты проводились в соответствии с Законом Великобритании о животных (научные процедуры) 1986 года и руководящими принципами Институционального органа по благополучию животных и этическому обзору (AWERB).

1. Корпус мышей C57BL/6J

  1. Домашние мыши в определенной среде, свободной от патогенов, на 12-часовом цикле свет-темнота и пища и вода доступны ad libitum.
  2. Провести все эксперименты на взрослой женщине C57BL/6J (предпочтительно выбираются женщины, так как существует частота женщин к мужчинам 1,4 к 1 у пациентов с увеитом). Рандомизируйте самок мышей C57BL/6J в возрасте от 6 до 8 недель по весу и возрасту. Размещайте мышей в индивидуально вентилируемых клетках (IVC) в группах по 5-6 мышей на клетку.

2. Иммунизация мышей C57BL/6

  1. IRBP1-20 - Препарат эмульсии CFA
    ПРИМЕЧАНИЕ: Препарат эмульсии необходим для воспроизводимости и заболеваемости; таким образом, необходимо приложить все усилия для поддержания последовательности на протяжении всего процесса подготовки и экспериментов. При приготовлении эмульсии потери должны быть учтены в расчетах всех реагентов заранее. Эта потеря может составлять примерно 1,5x (или 50% дополнительно от подготовленного объема), исходя из количества мышей, запланированных для иммунизации. Ниже приведен следующий пример. Чтобы иммунизировать 10 мышей, подготовьте 15 мышей и используйте 400 мкг (пептид на 20 г мыши) x 15 мышей = 6 мг. Каждая мышь должна получить 200 мкл для иммунизации (всего 3 мл). Конечный объем содержит соотношение 1:1 пептидного раствора и CFA, следовательно, 1,5 мл пептидного раствора и 1,5 мл CFA.
    1. Подготовьте все стерильные растворы в ламинарной проточной камере с использованием асептических методов.
    2. Взвесьте желаемое количество (400 мкг на 20 г мыши) человеческого IRBP1-20 (LAQGAYRTAVDLESLASQLT) лиофилизированного пептида. Растворяют пептид в 100% ДМСО. Хранить в запасе в лиофилизированном виде при -20 °C.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Для обеспечения полного растворения порошка каждая чешуйка должна сначала вступить в контакт с ДМСО и не проявлять никаких признаков остаточного твердого вещества. Добавьте PBS небольшими порциями, чтобы достичь окончательного объема. Не смешивайте с вихрем, вместо этого используйте мягкое перемешивание пипеткой. Конечная концентрация ДМСО не должна превышать 1% от общего объема пептидного препарата. Приготовление эмульсии в пластиковой трубке объемом 20 мл с коническим дном должно обеспечить лучший доступ ДМСО к лиофилизированному порошку.
    3. Добавьте раствор пептида DMSO-PBS при 1:1 v/v к CFA, который уже был дополнен 1,5 мг/мл убитой Mycobacterium tuberculosis, чтобы получить конечную концентрацию 2,5 мг/мл. Добавляйте по каплям, мягко и часто пипетируя, образуя вязкую и равномерно распределенную эмульсию.
    4. Аэрировать пептидный раствор и CFA с помощью пипетки 1000 мкл (установленной на 700 мкл для предотвращения дальнейшей потери) и пипетки для получения кремообразной густой консистенции. Этот метод включает в себя использование пипетки для многократной аспирации вверх и вниз до достижения желаемой толщины. Для достижения оптимальных результатов убедитесь, что раствор антигена и адъювант тщательно смешаны перед инъекцией.
  2. Внутрибрюшинная инъекция коклюшного токсина
    1. Суспендировать 1,5 мкг коклюшного токсина Bordetella в 100 мкл среды RPMI 1640, дополненной 1% мышиной сывороткой11.
    2. Выполните внутривенную инъекцию стерильным шприцем и иглой 23G.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Во избежание нарушений в месте инъекции, токсин коклюша необходимо вводить перед введением антигена.
    3. Временно переведите каждую мышь в отдельную клетку, чтобы получить одну инъекцию 100 мкл i.p. токсина Bordetella pertussis .
  3. Подкожное введение эмульсии IRBP
    1. Далее вводят эмульсию IRBP подкожно. Этот процесс требует, чтобы два обработчика животных были надлежащим образом одеты с защитой в соответствии с правилами охраны здоровья и безопасности.
    2. Попросите одного обученного человека слегка удерживать мышь на верхней части клетки в позе, похожей на неряшливость, животом вниз, в то время как другой обученный человек зажимает кожу, чтобы сформировать палаточную структуру на задней части шеи, где игла может быть вставлена, чтобы прорезать между пальцем и большим пальцем.
      ВНИМАНИЕ: Существует опасность травмы от укола иглой.
    3. Как только игла будет позиционирована, введите 200 мкл эмульсии IRBP. При удалении иглы поверните головку иглы, чтобы закрыть кожу перед вытаскиванием, и приложите давление после этого к месту инъекции, чтобы предотвратить рефлюкс эмульсии.
      ВНИМАНИЕ: Эмульсия не должна контактировать с кожей или мехом мыши, так как это может вызвать раздражение, а в более тяжелых случаях - развитие поражения. Если это происходит, область должна быть немедленно протерта и тщательно с использованием 70% этанола, а затем высушена.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Если дренирующие лимфатические узлы необходимы для обследования в конце исследования, место инъекции будет другим. В этом случае вводят 100 мкл в обе стороны бока подкожно. Это создаст более сильную реакцию на дренирующие паховые лимфатические узлы, которые могут быть иссечены во время сбора урожая. Однако, если предполагаемый результат заключается исключительно в развитии EAU, предпочтительнее одна инъекция 200 мкл в задней части шеи, чтобы избежать дискомфорта от нескольких мест инъекции.

3. Клиническая оценка - Исследование глазного дна мыши

ПРИМЕЧАНИЕ: Клиническое заболевание должно быть оценено с помощью исследования глазного дна, с помощью живой визуализации яркого поля с использованием фундоскопа и программного обеспечения Discover, используемого для визуализации.

  1. В начале заболевания (12-14 день) седативные мыши под общим наркозом использовали комбинацию кетамина (50 мг/мл) и домитора (медетомидин; 1 мг/мл). Разбавить 1-й частью Домитора; 1,5 части кетамина и 2,5 части стерильной инъекционной воды, затем вводят 100 мкл на 30 г внутрибрюшинно. Используйте 1 мл стерильных шприцев и игл 23G для вышеуказанной комбинации анестезии.
  2. После этого следите за мышью, чтобы убедиться, что все рефлексы потеряны и что она не реагирует на раздражители.
  3. Сразу после получения инъекции i.p. и пока мышь все еще удерживается в неряшливости, нанесите 1% тропикамида и 2,5% фенилэфрина местно на каждый глаз для расширения зрачка. Стремитесь полностью покрыть роговицу обоими расширяющими растворами. Может пройти несколько минут, прежде чем зрачок полностью расширится.
  4. После этого щедро нанесите на глазную мазь viscotears и поддерживайте на протяжении всего процесса визуализации, чтобы сохранить глаз полностью смазанным и увлажненным.
  5. Тем временем откройте программное обеспечение (например, Discover) и установите фундоскоп (например, Micron) для захвата изображений под ярким полем. Выделите каждой отдельной мыши папку и пометьте изображения R или L в соответствии с каждым сфотографированным глазом.
  6. Установите мышь на специально построенную сцену для визуализации в реальном времени и позиционируйте микроскоп для полного доступа к сетчатке.
  7. Чтобы получить точное представление о заболевании, сделайте снимки всей области сетчатки, охватывающей все уголки периферии помимо диска зрительного нерва. Для этого отрегулируйте окуляр по всей длине. Крайне важно, чтобы глаз всегда оставался полностью смазанным на протяжении всего процесса визуализации; убедитесь в этом, доливая глазную мазь с постоянной скоростью.
  8. Обратитесь к разделу 4 (ниже) на данном этапе для выполнения флуоресцеиновой ангиографии.
  9. После того, как все изображения будут завершены, разбавьте анестетик обратного противоседания (5 мг / мл антиседана) в инъекционной воде и введите в дозе 0,1 мг / кг т.. Верните мышь в клетку и поместите на предварительно нагретый коврик с доступом к пропитанной влажной пищей до выздоровления. Полное восстановление характеризуется движением всего тела и ходьбой по клетке с устойчивой походкой, обычно занимающей несколько часов.
  10. В назначенной экспериментальной конечной точке (например, день 21-23) повторите шаги 4.1-4.5 и снова сфотографируйте всю область сетчатки, покрывая диск зрительного нерва и все уголки периферии, чтобы получить точное представление о заболевании.

4. Флуоресцеиновая ангиография

  1. Чтобы измерить утечку сосудов у этих животных, находясь под анестезией, дайте каждой мыши инъекцию 2% флуоресцеина подкожно в задней части шеи и в таком положении, чтобы сетчатка была централизована в середине живого изображения.
  2. Установите в фундоскоп фильтр возбуждения синего света при 465-490 нм. Свет, улавливаемый возбужденным флуоресцеином, составляет 520-530 нм.
  3. Через 1,5 мин после инъекции флуоресцеина сфотографируйте каждую сетчатку и повторите снова через 7 минут.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Время имеет решающее значение для этих событий, если невозможно захватить оба, то просто изобразить один глаз.

5. Оценка клинических заболеваний

  1. Основывают клиническую оценку на тяжести следующих критериев: воспаление диска зрительного нерва, манжеты сосудов сетчатки, инфильтрация тканей сетчатки и структурные повреждения.
  2. Присудите каждому из этих параметров оценку по шкале от 0 до 5, и общая сумма является репрезентативной для клинического заболевания для всего глаза, с максимальным баллом 20, доступным на глаз. Таблица 1 может быть использована в качестве руководства для критериев оценки.

6. Гистология и гистологическая оценка

  1. После усыпления мышей по вывиху шейки матки энуклеа исследуйте глаза, раздвинув веки друг от друга для легкого доступа ко всему глазу.
  2. Затем поместите изогнутые щипцы позади земного шара с намерением захватить орбитальную соединительную ткань и зрительный нерв. Позаботьтесь о том, чтобы не сжимать земной шар.
  3. Для фиксации поместите глаз в 4% глутаровый альдегид минимум на 15 минут, чтобы свести к минимуму отслоение сетчатки, а затем переведите на 10% формальдегид в течение не менее 24 ч. 1-2 мл фиксатора даст достаточный объем, чтобы покрыть два глаза.
  4. Выполняют встраивание в парафин, сечение на микротоме и окрашивание по стандартным протоколам. Толщина сечения 3-4 мкм рекомендуется для любого типа окрашивания.
  5. Выполните гистологическое исследование глаз с использованием стандартных протоколов окрашивания гематоксилином и эозином (H&E).
  6. Назначают баллы по шкале 0-4, согласно критериям оценки EAU, основанным на степени инфильтрации иммунных клеток в пределах сетчатки и сосудистой оболочки, нарушении слоев сетчатки, степени образования гранулемы и степени отслоения сетчатки, что указывает на повреждение сетчатки, как описано ранее (Agarwal 2013) и обобщено в таблице 211.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В этом протоколе мы описываем пошаговый метод индуцирования модели экспериментального аутоиммунного увеита (EAU) путем иммунизации мышей увейтогенным пептидом сетчатки, полученным из IRBP. Оценка заболеваний с использованием широко используемых и легкодоступных подходов охватывается, хотя они не являются исключительными и могут быть добавлены или частично заменены другими методами визуализации. Первые признаки EAU у мышей C57BL/6J могут быть обнаружены через две недели после иммунизации, а пик заболевания достигнут в теч...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Экспериментальные модели на животных являются необходимыми инструментами для изучения патогенеза заболеваний и доклинического тестирования новых терапевтических парадигм. В текущем протоколе мы обсудили методологию индуцирования, мониторинга и оценки EAU, экспериментальной модели внутриглазного воспалительного увеита. Эта модель EAU имеет более 95% заболеваемости, когда все процедуры выполняются в соответствии с протоколом, изложенным в настоящем документе, и приводит к развитию хронической, монофазной EAU. Для достижени...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

У авторов нет конфликта интересов, которые можно было бы заявить с этой работой.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

JG была награждена финансированием UCL Impact Studentship и Rosetrees Trust для поддержки CB. VC получил грант на совместную исследовательскую деятельность от Akari Therapeutics Inc. Мы хотели бы поблагодарить Институт офтальмологии UCL, подразделение биологической службы, особенно г-жу Элисон О'Хара и ее команду за их техническую поддержку.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
антиседанZOETIS, СШАза пробуждение
Complete Freund' с адъювантом; CFASigma, UKF5881для иммунизации 
DomitorOrion Pharma, Финляндиядля анестезии
FluoresceinSigma, UKF2456для ангиографии
IRBP1-20Chamberidge peptide, британскийпептид; антиген 
КетаминOrion Pharma, Финляндиядля анестезии
Micron IIIPhoenix Research, СШАдля глазного дна
Сыворотка мышейSigma, ВеликобританияM5905для иммунизации 
Mycobacterium terberculosisSigma, Великобритания344289для иммунизации 
Коклюшный токсинSigma, UKP2980для иммунизации 
фенилэфрина гидрохлорид 2,5% Bausch & Lomb UK PHEN25для расширения 
Тропикамид 1%САНДОЗдля расширения 
ВискозиерыWELDRICKS Pharmacy, Великобритания2082642для смазки глаз

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lyu, C., et al. TMP778, a selective inhibitor of RORgammat, suppresses experimental autoimmune uveitis development, but affects both Th17 and Th1 cell populations. The European Journal of Immunology. 48, 1810-1816 (2018).
  2. Klaska, I. P., Forrester, J. V. Mouse models of autoimmune uveitis. Current Pharmaceutical Design. 21, 2453-2467 (2015).
  3. Eskandarpour, M., Alexander, R., Adamson, P., Calder, V. L. Pharmacological Inhibition of Bromodomain Proteins Suppresses Retinal Inflammatory Disease and Downregulates Retinal Th17 Cells. The Journal of Immunology. 198, 1093-1103 (2017).
  4. Mochizuki, M., et al. Preclinical and clinical study of FK506 in uveitis. Current Eye Research. 11, Suppl 87-95 (1992).
  5. Nguyen, Q. D., et al. Intravitreal Sirolimus for the Treatment of Noninfectious Uveitis: Evolution through Preclinical and Clinical Studies. Ophthalmology. 125, 1984-1993 (2018).
  6. Leal, I., et al. Anti-TNF Drugs for Chronic Uveitis in Adults-A Systematic Review and Meta-Analysis of Randomized Controlled Trials. Frontiers in Medicine (Lausanne). 6, 104(2019).
  7. Chen, Y. H., et al. Functionally distinct IFN-?+ IL-17A+ Th cells in experimental autoimmune uveitis: T-cell heterogeneity, migration, and steroid response. European Journal of Immunology. 50 (12), 1941-1951 (2020).
  8. Xu, H., et al. A clinical grading system for retinal inflammation in the chronic model of experimental autoimmune uveoretinitis using digital fundus images. Experimental Eye Research. 87, 319-326 (2008).
  9. Copland, D. A., et al. The clinical time-course of experimental autoimmune uveoretinitis using topical endoscopic fundal imaging with histologic and cellular infiltrate correlation. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 49, 5458-5465 (2008).
  10. Dick, A. D. Doyne lecture 2016: intraocular health and the many faces of inflammation. Eye (Lond). 31, 87-96 (2017).
  11. Agarwal, R. K., Silver, P. B., Caspi, R. R. Rodent models of experimental autoimmune uveitis. Methods in Molecular Biology. 900, 443-469 (2012).
  12. Caspi, R. R. A look at autoimmunity and inflammation in the eye. Journal of Clininical Investigation. 120, 3073-3083 (2010).
  13. Caspi, R. R., et al. Mouse models of experimental autoimmune uveitis. Ophthalmic Research. 40, 169-174 (2008).
  14. Shao, H., et al. Severe chronic experimental autoimmune uveitis (EAU) of the C57BL/6 mouse induced by adoptive transfer of IRBP1-20-specific T cells. Experimental Eye Research. 82, 323-331 (2006).
  15. Horai, R., et al. Microbiota-Dependent Activation of an Autoreactive T Cell Receptor Provokes Autoimmunity in an Immunologically Privileged Site. Immunity. 43, 343-353 (2015).
  16. Chen, J., et al. Comparative analysis of induced vs. spontaneous models of autoimmune uveitis targeting the interphotoreceptor retinoid binding protein. PLoS One. 8, 72161(2013).
  17. Chen, J., Qian, H., Horai, R., Chan, C. C., Caspi, R. R. Use of optical coherence tomography and electroretinography to evaluate retinal pathology in a mouse model of autoimmune uveitis. PLoS One. 8, 63904(2013).
  18. Harry, R., et al. Suppression of autoimmune retinal disease by lovastatin does not require Th2 cytokine induction. Journal of Immunology. 174, 2327-2335 (2005).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

IRBP 1 20Bordetella pertussisC57BL 6J

Похожие статьи