Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Производство модифицированной аутологичной кондиционированной сыворотки и оценка ex vivo ее лечебного потенциала в эпителии роговицы мышей

3.3K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/64911

⸱

24 марта 2023 г.

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Education, Chang Gung Memorial Hospital Linkou, 2School of Medicine, Chang Gung University, 3Department of Chemical Engineering and Biotechnology, National Taipei University of Technology, 4Cell Therapy Center, Tri-Service General Hospital, 5Department of General Surgery, Bo-Ai Clinic, 6Department of Ophthalmology, Chang Gung Memorial Hospital Linkou, 7Institute of Clinical Medicine, National Yang Ming Chiao Tung University

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

В этой статье описывается протокол, позволяющий упростить процесс и сделать приготовление аутологичной кондиционированной сыворотки (ОКС) менее дорогим. Никаких специальных шприцев или стеклянных шариков с поверхностным покрытием не требуется. Кроме того, модифицированная ОКС (mACS) имеет конкурентные преимущества перед обычной аутологичной сывороткой при заживлении ран роговицы мышиных глаз ex vivo.

Аннотация

В последние десятилетия местная терапия, полученная из крови человека, была благом для клиницистов. Аутологичная сыворотка (AS) и обогащенная тромбоцитами плазма (PRP) обогащены эпителиотропными факторами роста, которые необходимы для заживления ран роговицы. В отличие от AS, PRP основана на системе дифференциального центрифугирования, что дает больше тромбоцитарных факторов роста. Аутологичная кондиционированная сыворотка (ОКС) не только сохраняет препарат АС и PRP, но и фокусируется на иммуномодулирующих свойствах, которые важны при воспалительных заболеваниях.

Отсутствие стандартизированных протоколов и высокие затраты на подготовку являются ограничениями для клинического применения ОКС. Этот видеоэксперимент демонстрирует стандартную операционную процедуру приготовления глазных капель модифицированной аутологичной кондиционированной сыворотки (mACS). Во-первых, глицерин добавляли в гепариновые шприцы в качестве стабилизатора клеток крови во время гипоксической инкубации. Для активации клеток крови была начата 4-часовая инкубация при 37 ° C. Затем образцы крови центрифугировали при 3 500 × г в течение 10 мин при комнатной температуре. После фильтрации надосадочной жидкости через фильтр 0,22 мкм глазные капли mACS были полностью приготовлены.

Предварительная проверка терапевтического эффекта mACS показала, что он может иметь конкурентные преимущества перед обычным АС при заживлении ран роговицы в глазах мышей ex vivo . АС, использованная в этом исследовании, была подготовлена в соответствии с опубликованными исследованиями и клинической практикой в нашей больнице. Таким образом, эффективность mACS при заболеваниях глазной поверхности может быть оценена в будущих исследованиях с помощью исследований in vivo на животных и клинических испытаний.

Введение

Терапевтические эффекты аутологичной сыворотки (АС) при заболеваниях сухого глаза были впервые зарегистрированы в 1980-х годах Fox et al.1. Считается, что как смазывающее свойство, так и основные эпителиотропные биохимические компоненты АС, имитирующие естественные слезы, способствуют пролиферации эпителиальных клеток роговицы. За последние десятилетия на этой основе было проведено несколько исследований. Трофические компоненты включают эпидермальный фактор роста (EGF), витамин А, трансформирующий фактор роста β (TGF-β) и другие цитокины. Интересно, что сыворотка богата TGF-β и витамином А, которые, как полагают, играют ключевую роль в пролиферации эпидермиса 2,3,4,5. Кроме того, при лечении пациентов с заболеваниями глазной поверхности несколько исследований показали некоторые преимущества глазных капель АС в исходах, сообщаемых пациентами, других объективных параметрахсухого глаза 6,7 и микроскопических данных, таких как плотность клеток8. Метааналитические исследования показали, что при лечении глазными каплями АС могут быть некоторые преимущества в улучшении синдромов пациентов, но долгосрочные результаты и наблюдения по-прежнему отсутствуют 9,10.

В отличие от АС, обогащенная тромбоцитами плазма (PRP) получается путем добавления антикоагулянта во время приготовления с дальнейшим дифференциальным центрифугированием и химической активацией тромбоцитов. По сравнению с АС, в PRP присутствуют многочисленные химические вещества и факторы роста, такие как TGF-β, фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) и EGF. Он также применялся к заболеваниям глазной поверхности с клиническими преимуществами в облегчении симптомов11.

Перекрестная связь между дефектами эпителия и воспалением сложна. Примечательно, что иммунопатофизиология является еще одним важным вопросом при заболеваниях глазной поверхности. Считается, что провоспалительные цитокины, такие как IL-1β и ИФН-γ, являются ключевыми медиаторами в воспалительных каскадах12. Таким образом, открываются новые пути лечения, основанные на понимании иммунного механизма. Стратегии остановки этого воспалительного процесса, включая выработку антагониста рецептора интерлейкина-1 (IL-1Ra) и других противовоспалительных цитокинов, также могут играть важную роль при заболеваниях глазной поверхности13,14,15.

С 1998 года Orthokine, коммерциализированная аутологичная кондиционированная сыворотка (ACS), клинически используется у ортопедических пациентов, страдающих остеоартритом (ОА), ревматоидным артритом (РА) и заболеваниями позвоночника13. По сравнению с АС и PRP, обработка стеклянными шариками с химическим покрытием и гипоксическая инкубация для активации моноцитов являются специфическими особенностями ACS16. Теоретически можно секретировать больше противовоспалительных факторов путем добавления стресса выживания к клеткам, что приводит к более высокой концентрации основных иммуномодулирующих компонентов, включая IL-1Ra. Также сообщалось об улучшении терапевтических преимуществ ОКС при ОА по сравнению с АС17. Заболевания глазной поверхности в некоторых отношениях имеют сходную иммунную подоплеку с ортопедическими воспалительными заболеваниями. Таким образом, основываясь на успешных результатах терапии крови человека в ортопедической области, ОКС может иметь преимущества перед традиционными методами лечения в клинической практике по эпителиотропным и иммуномодулирующим свойствам. Несмотря на то, что ОКС широко используется при ортопедических воспалительных заболеваниях, его клиническое применение в офтальмологии все еще нуждается в изучении, что может быть затруднено его высокой стоимостью, отсутствием литературной поддержки и отсутствием стандартизации процесса подготовки, что приводит к разнообразным характеристикам.

В этой видеостатье был продемонстрирован новый, экономически эффективный и удобный метод создания модифицированной ACS (mACS) или плазмы, богатой факторами роста (PRGF), для получения глазных капель с сопоставимой практической ценностью с коммерциализированными ACS. Ключевые идеи добавления антикоагулянтов и запуска клеток крови для секреции противовоспалительных цитокинов путем стрессовой инкубации были сохранены, но в отличие от химически индуцированных методов, таких как основанные на стеклянных шариках с покрытиемCrSO 4 и коммерческих наборах, критический стрессовый статус физически индуцируется гипоксической инкубацией в этом методе. Кроме того, глицерин был добавлен для обеспечения дополнительных преимуществ, включая повышение стабильности мембраны клеток крови, поддержание надлежащего осмотического давления внеклеточной жидкости18 и соответствующий источник питательных веществ в гипоксических условиях, которые позволяют избежать перенапряжения клеток.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Исследование проводилось в соответствии с институциональными руководящими принципами, изложенными в начале раздела протокола. Все протоколы и процедуры были проведены в соответствии с Хельсинкской декларацией и были рассмотрены и одобрены Институциональным наблюдательным советом Медицинского фонда Чан Гун. Все добровольцы были проинформированы о характере этого исследования и подписали форму информированного согласия до их включения. Расходные материалы, необходимые для всей экспериментальной процедуры, представлены на рисунках 1 и 2, а также в таблице материалов.

1. Подготовка материалов, необходимых для производства глазных капель mACS

  1. Приготовьте 250 мл 10% раствора глицерина и держите наготове инфузионный набор с крылом бабочки весом 21 г, шприц объемом 3 мл без иглы и шесть вакуумных пробирок по 10 мл, содержащих гепарин 158 единиц USP (рис. 1).
  2. Подсоедините иглу для забора крови 21 г к шприцу объемом 3 мл и наберите 3 мл 10% раствора глицерина в подготовленный шприц.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Все материалы должны быть стерилизованы перед введением иглы.
  3. Распределите 10% раствор глицерина в вакуумные пробирки последовательно, по примерно 0,5 мл 10% раствора глицерина в каждой (рис. 3А).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Из-за отрицательного давления в пробирке игла должна выйти сразу после входа, чтобы равномерно распределить 3 мл раствора глицерина по шести пробиркам.
  4. Стерилизуйте кожу пациента стерильными ватными тампонами со стерильным 75% спиртом. Проколите поверхностную вену верхних конечностей пациента иглой для забора крови 18 G. Всего из поверхностной вены берут 60-70 мл венозной крови.

2. Подготовка к глазным каплям mACS

  1. Последовательно введите 10 мл взятой венозной крови в каждую из шести вакуумных пробирок (рис. 3B).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Этот шаг зависит от отрицательного давления вакуума для заполнения трубок. Чтобы избежать разрушения клеток крови и гемолиза, не прикладывайте никакого положительного давления.
  2. Поместите шесть вакуумных пробирок в инкубатор с постоянной температурой 37 °C на 4 часа (рис. 3C).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Гипоксический статус поддерживается и стабилизируется оставшимся отрицательным давлением в герметичной пробирке, в которую поступал глицерин.
  3. Через 4 ч выньте пробирки из инкубатора и центрифугируйте их при концентрации 3 500 × г в течение 10 мин при комнатной температуре.
  4. На этом этапе подготовьте материалы для экстракции mACS, включая стерилизованные флаконы с глазными каплями, шприц объемом 3 мл с иглой, фильтр 0,22 мкм, иглу 18 G и пару стерильных перчаток (рис. 2).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Операционный стол следует протереть 75% спиртом, чтобы обеспечить асептическую среду. Надосадочная жидкость после центрифугирования уже является полуфабрикатом mACS.
  5. Поместите шесть пробирок на стойку для пробирок и откройте крышки после полного центрифугирования (рис. 3D).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Стерильность на этом этапе не требуется.
  6. Наденьте стерильные перчатки и вытащите mACS один за другим с помощью шприца объемом 3 мл с иглой 18 G.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Будьте осторожны, чтобы не нарисовать нижний слой клеток крови на этом этапе (рис. 3E).
  7. Вытащите иглу, подсоедините ее к фильтру 0,22 мкм и подсоедините иглу для сбора крови 23 G, 1,5 дюйма оригинальным шприцем объемом 3 мл к выходному отверстию ниже (рис. 3F).
  8. Осторожно протолкните иглу через фильтр 0,22 мкм в подготовленные стерильные флаконы с глазными каплями (рис. 3G).
  9. Повторяйте описанные выше шаги до тех пор, пока все mACS не будут отфильтрованы и сохранены во флаконах с глазными каплями (рис. 3H).
  10. Храните глазные капли mACS при температуре 4 °C для немедленного использования; хранить при температуре -20 °C для длительного хранения.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Не храните их более 2 недель при температуре 4 ° C или более 3 месяцев при -20 ° C 9,19.

3. Модель заживления ран эпителия роговицы мыши ex vivo

ПРИМЕЧАНИЕ: Следующая модель животных ex vivo была основана на предыдущем опыте Hung et al. по механическим повреждениям эпителияроговицы 20. Следующие шаги должны быть выполнены под микроскопом, чтобы создать хорошо очерченную и последовательную эпителиальную рану роговицы.

  1. Анестезируйте мышей C57BL/6 3%-4% изофлураном. Вдавливайте удар биопсии кожи над центральной роговицей мыши, оставляя неглубокий круг на эпителии в качестве однородного края раны.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Будьте осторожны, чтобы избежать разрыва глазного яблока.
  2. Удалите эпителий роговицы в пределах подтвержденной области вплоть до слоя Боумена с помощью кольца для удаления ржавчины роговицы, оснащенного заусенцем 0,5 мм.
  3. Чтобы создать животную модель механической раны роговицы ex vivo , соберите глазное яблоко и хорошо подготовьте культуру.
    1. Сначала усыпьте мышей; Затем осторожно надавите на верхний и нижний орбитальные ободки мышей, введите кончик щипцов над ретробульбарным пространством, вытащите глазное яблоко и удерживайте его за щипцы.
    2. Разрежьте зрительный нерв и периорбитальные мягкие ткани ножницами роговицы, чтобы идеально изолировать глазное яблоко.
    3. Подготовьте 96-луночную пластину с расплавленным воском внутри. Быстро создайте круглое отверстие с помощью кончиков щипцов, а затем дождитесь застывания.
  4. Подготовьте среду к тестированию: 0,5% mACS, 0,5% AS для сравнения, нормальный физиологический раствор в качестве отрицательного контроля и модифицированная среда Дульбекко Игла (DMEM).
    ПРИМЕЧАНИЕ: mACS получается с использованием протокола, упомянутого выше.
  5. Для культуры ex vivo поместите собранное глазное яблоко на подготовленную тарелку с 96 лунками. Добавьте 200 мкл каждой среды в 96-луночную пластину.
  6. Поместите культуральную пластину с 96 лунками в инкубатор при температуре 37 °C с содержаниемCO2 5%. Следите за тем, чтобы питательные среды менялись каждые 24 часа.
  7. Для подтверждения последовательного ранозаживляющего эффекта контролируют область эпителиальной раны под микроскопом каждые 8 ч путем окрашивания флуоресцеином.
    1. Растворите флуоресцеин на флуоресцеиновой бумаге обычным физиологическим раствором.
    2. Капните флуоресцеиновый краситель на центральную роговицу мыши, затем наблюдайте и документируйте его под микроскопом. Типичный результат показан на рисунке 4.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Для наблюдения достаточно одной капли (примерно 0,05 мл) флуоресцеинового красителя.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

На рисунках 1 и 2 показаны материалы, необходимые для эксперимента, а на рисунке 3 показаны последовательные этапы и успешные промежуточные продукты во время подготовки mACS. Сначала 0,5 мл 10% раствора глицерина добавляли в каждую стерильную пробирку объемом 10 мл (рис. 3А). Затем у пациента брали 60-70 мл венозной крови, и в каждую пробирку вводили по 10 мл крови (рис. 3Б...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

В этом исследовании описан протокол приготовления mACS и дополнительно показана польза глазных капель mACS для заживления ран на животных моделях. Важнейшей модификацией этого протокола mACS является добавление приблизительно 0,5 мл 10% раствора глицерина в каждую пробирку, что создает подходящие гипоксические условия во время 4-часовой инкубации при 37 °C. Эта настройка обеспечивает АС надлежащий стресс и побуждает клетки выделять необходимые факторы роста, которые способствуют заживлению ран. Фильтр 0,22 мкм может пом...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Все авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Благодарности

Авторы благодарят Ya-Lan Chien и Chia-Ying Lee за отличную техническую помощь, а также компанию OnLine English за лингвистическое издание. Это исследование было частично профинансировано Chang Gung Medical Research Project (грант No CMRPG3L1491).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
  96-луночный культуральный планшетMerck KGaA, ГерманияCLS3997
Barraquer крышка зеркалоkatenaK1-535515 мм
Barraquer иглодержательKatenaK6-3310без замка 
Вакуумный пуансон Barron 8,0 ммkatenaK20-2108для резки фильтровальной бумаги
BD 10,0 мл вакуумные пробирки, содержащие гепарин 158 единиц USPBecton, Dickinson and Company, US367880Не менее 6 пробирок, необходимых для сбора крови для последующих экспериментов и во избежание агглютинации
крови BD 21 G набор для инфузии бабочек-крыльевBecton, Dickinson and Company, US367281Для равномерного распределения раствора глицерина
C57BL/6 мышей Национальный центр лабораторных животныхRMRC11005для мыши модели
Castroviejo щипцы 0,12 ммkatena K5-2500
ЦентрифугаEppendorf, Германия58110004283,500 x g в течение 10 мин
Cheng Yi 10,0 мл стерилизованный флакон с пипеткойCheng Yi Chemical, ТайваньCP405141Должен быть стерильным и в качестве контейнера для хранения конечного продукта
Удалитель ржавчины роговицы с кольцом 0,5 мм заусенецAlgerbrush IITM; Alger Equipment Co., Inc. Lago Vista, TXCHI-675для обработки эпителия роговицы
модифицированной минимальной эфирной средойMerck KGaA, ГерманияD6429
Фильтровальная бумага Тойо Роси Кайша, ООО1.11
Флуоресцеин натрия офтальмологические полоски U.S.POPTITECHокрашивание при дефекте эпителия роговицы 
ИнкубаторFirstek, ТайваньS300S37° C для 4 часов
стерильные перчатки KanamLatex Industries, ИндияEN455Для асептической эксплуатации
Merck 0.22 &; m фильтрMerck KGaA, ГерманияPR05359Не менее 2 фильтров для фильтрации mACS
Nang Kuang 250 мл 10% раствор глицеринаNang Kuang Pharmaceutical, Тайвань19496Для обеспечения подходящего эффекта стабилизации мембраны и внеклеточного осмотического давления для клеток крови
Нормальный физиологический растворTAIWAN BIOTECH CO., LTD.100-120-1101
Пункция для биопсии кожи 2 ммSTIEFEL22650
СтереомикроскопCarl Zeiss Meditec, Дублин, КалифорнияSV11микроскоп для хирургии
Terumo 18 G иглаTerumo, ТайваньSMACF0120-18BX3,0 мл шприц с иглой 18 G для извлечения надосадочной жидкости после центрифугирования
Terumo 20,0 мл шприцTerumo, ТайваньMDSS20ESМожет использоваться для сбора сыворотки после первичного центрифугирования и использования ее для вторичного центрифугирования.
Шприц Terumo объемом 3,0 мл с иглой 23 GTerumo, ТайваньMDSS03S2325шприц объемом 3,0 мл используется для извлечения надосадочной жидкости после центрифугирования. Затем подсоедините фильтр и иглу 23 G для инъекций во флаконы с глазными каплями.
Ножницы для тенотомии Westcott MediumkatenaK4-3004
OPTFL100

Ссылки

  1. Fox, R. I., Chan, R., Michelson, J. B., Belmont, J. B., Michelson, P. E. Beneficial effect of artificial tears made with autologous serum in patients with keratoconjunctivitis sicca. Arthritis and Rheumatology. 27 (4), 459-461 (1984).
  2. Noble, B. A., et al. Comparison of autologous serum eye drops with conventional therapy in a randomised controlled crossover trial for ocular surface disease. The British Journal of Ophthalmology. 88 (5), 647-652 (2004).
  3. Bradley, J. C., Bradley, R. H., McCartney, D. L., Mannis, M. J. Serum growth factor analysis in dry eye syndrome. Clinical & Experimental Ophthalmology. 36 (8), 717-720 (2008).
  4. Alshammari, T. M., Al-Hassan, A. A., Hadda, T. B., Aljofan, M. Comparison of different serum sample extraction methods and their suitability for mass spectrometry analysis. Saudi Pharmaceutical Journal. 23 (6), 689-697 (2015).
  5. Tsubota, K., et al. Treatment of dry eye by autologous serum application in Sjögren's syndrome. The British Journal of Ophthalmology. 83 (4), 390-395 (1999).
  6. Urzua, C. A., Vasquez, D. H., Huidobro, A., Hernandez, H., Alfaro, J. Randomized double-blind clinical trial of autologous serum versus artificial tears in dry eye syndrome. Current Eye Research. 37 (8), 684-688 (2012).
  7. Cui, D., Li, G., Akpek, E. K. Autologous serum eye drops for ocular surface disorders. Current Opinion in Allergy and Clinical Immunology. 21 (5), 493-499 (2021).
  8. Jirsova, K., et al. The application of autologous serum eye drops in severe dry eye patients; subjective and objective parameters before and after treatment. Current Eye Research. 39 (1), 21-30 (2014).
  9. Pan, Q., Angelina, A., Marrone, M., Stark, W. J., Akpek, E. K. Autologous serum eye drops for dry eye. Cochrane Database of Systematic Reviews. 2 (2), (2017).
  10. Wang, L., et al. Autologous serum eye drops versus artificial tear drops for dry eye disease: a systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials. Ophthalmic Research. 63 (5), 443-451 (2020).
  11. Soni, N. G., Jeng, B. H. Blood-derived topical therapy for ocular surface diseases. The British Journal of Ophthalmology. 100 (1), 22-27 (2016).
  12. Solomon, A., et al. anti-inflammatory forms of interleukin-1 in the tear fluid and conjunctiva of patients with dry-eye disease. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 42 (10), 2283-2292 (2001).
  13. Meijer, H., Reinecke, J., Becker, C., Tholen, G., Wehling, P. The production of anti-inflammatory cytokines in whole blood by physico-chemical induction. Inflammation Research. 52 (10), 404-407 (2003).
  14. Bielory, B. P., Shah, S. P., O'Brien, T. P., Perez, V. L., Bielory, L. Emerging therapeutics for ocular surface disease. Current Opinion in Allergy and Clinical Immunology. 16 (5), 477-486 (2016).
  15. Stevenson, W., Chauhan, S. K., Dana, R. Dry eye disease: an immune-mediated ocular surface disorder. Archives of Ophthalmology. 130 (1), 90-100 (2012).
  16. Yang, J., Guo, A., Li, Q., Wu, J. Platelet-rich plasma attenuates interleukin-1β-induced apoptosis and inflammation in chondrocytes through targeting hypoxia-inducible factor-2α. Tissue and Cell. 73, 101646(2021).
  17. Shakouri, S. K., Dolati, S., Santhakumar, J., Thakor, A. S., Yarani, R. Autologous conditioned serum for degenerative diseases and prospects. Growth Factors. 39 (1-6), 59-70 (2021).
  18. Gull, M., Pasek, M. A. The role of glycerol and its derivatives in the biochemistry of living organisms, and their prebiotic origin and significance in the evolution of life. Catalysts. 11 (1), 86(2021).
  19. Drew, V. J., Tseng, C. L., Seghatchian, J., Burnouf, T. Reflections on dry eye syndrome treatment: therapeutic role of blood products. Frontiers in Medicine. 5, 33(2018).
  20. Hung, K. H., Yeh, L. K. Ex vivo and in vivo animal models for mechanical and chemical injuries of corneal epithelium. Journal of Visualized Experiments. (182), e63217(2022).
  21. Geerling, G., Maclennan, S., Hartwig, D. Autologous serum eye drops for ocular surface disorders. The British Journal of Ophthalmology. 88 (11), 1467-1474 (2004).
  22. Rutgers, M., Saris, D. B., Dhert, W. J., Creemers, L. B. Cytokine profile of autologous conditioned serum for treatment of osteoarthritis, in vitro effects on cartilage metabolism and intra-articular levels after injection. Arthritis Research & Therapy. 12 (3), R114(2010).
  23. Antebi, B., et al. Short-term physiological hypoxia potentiates the therapeutic function of mesenchymal stem cells. Stem Cell Research & Therapy. 9 (1), 265(2018).
  24. Chen, Y. M., Wang, W. Y., Lin, Y. C., Tsai, S. H., Lou, Y. T. Use of autologous serum eye drops with contact lenses in the treatment of chemical burn-induced bilateral corneal persistent epithelial defects. BioMed Research International. 2022, 6600788(2022).
  25. Diaz-Valle, D., et al. Comparison of the efficacy of topical insulin with autologous serum eye drops in persistent epithelial defects of the cornea. Acta Ophthalmologica. 100 (4), e912-e919 (2022).
  26. Metheetrairut, C., et al. Comparison of epitheliotrophic factors in platelet-rich plasma versus autologous serum and their treatment efficacy in dry eye disease. Scientific Reports. 12 (1), 8906(2022).
  27. NaPier, E., Camacho, M., McDevitt, T. F., Sweeney, A. R. Neurotrophic keratopathy: current challenges and future prospects. Annals of Medicine. 54 (1), 666-673 (2022).
  28. Garcia-Conca, V., et al. Efficacy and safety of treatment of hyposecretory dry eye with platelet-rich plasma. Acta Ophthalmologica. 97 (2), e170-e178 (2019).
  29. Gholian, S., et al. Use of autologous conditioned serum dressings in hard-to-heal wounds: a randomised prospective clinical trial. Journal of Wound Care. 31 (1), 68-77 (2022).
  30. Raeissadat, S. A., Rayegani, S. M., Jafarian, N., Heidari, M. Autologous conditioned serum applications in the treatment of musculoskeletal diseases: a narrative review. Future Science OA. 8 (2), 776(2022).
  31. Tokawa, P. K. A., Brossi, P. M., Baccarin, R. Y. A. Autologous conditioned serum in equine and human orthopedic therapy: A systematic review. Research in Veterinary Science. 146, 34-52 (2022).
  32. Evans, C. H., Chevalier, X., Wehling, P. Autologous conditioned serum. Physical Medicine and Rehabilitation. Clinics of North America. 27 (4), 893-908 (2016).
  33. Coskun, H. S., Yurtbay, A., Say, F. Platelet rich plasma versus autologous conditioned serum in osteoarthritis of the knee: clinical results of a five-year retrospective study. Cureus. 14 (4), e24500(2022).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Заживление ран роговицысывороточные глазные каплитерапия на основе компонентов кровибогатая тромбоцитами плазмазаболевания поверхности глазаанализ цитокиновдифференциальное центрифугирование
Производство модифицированной аутологичной кондиционированной сыворотки и оценка ex vivo ее лечебного потенциала в эпителии роговицы мышей
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.