Методическая статья

Изучение фармакологического действия и молекулярного механизма салидрозида в ингибировании пролиферации и миграции клеток MCF-7

DOI:

10.3791/65634

⸱

9 июня 2023 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Pathology Department, Suining Central Hospital, 2General Surgery Day Ward, Department of General Surgery, the Third People's Hospital of Chengdu & the Affiliated Hospital of Southwest Jiaotong University

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Настоящий протокол описывает комплексную стратегию оценки фармакологического действия и механизма салидрозида в ингибировании пролиферации и миграции клеток MCF-7.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Салидрозид (Sal) обладает антиканцерогенной, антигипоксической и противовоспалительной фармакологической активностью. Тем не менее, лежащие в его основе механизмы борьбы с раком молочной железы были выяснены лишь до конца. Таким образом, этот протокол был направлен на расшифровку потенциала Sal в регуляции пути PI3K-AKT-HIF-1α-FoxO1 в злокачественной пролиферации клеток MCF-7 рака молочной железы человека. Во-первых, фармакологическую активность Sal в отношении MCF-7 оценивали с помощью CCK-8 и клеточного скретч-анализа. Кроме того, резистентность клеток MCF-7 была измерена с помощью анализов миграции и инвазии Матригеля. Для клеточного апоптоза и циклических анализов клетки MCF-7 обрабатывали поэтапно с помощью аннексина V-FITC/PI и наборов для обнаружения окрашивания клеточного цикла для анализа проточной цитометрии, соответственно. Уровни активных форм кислорода (АФК) иCa2+ исследовали методом иммунофлуоресцентного окрашивания DCFH-DA и Fluo-4 AM. Активность Na+-K+-АТФазы и Ca2+-АТФазы определяли с помощью соответствующих коммерческих наборов. Уровни экспрессии белков и генов в апоптозе и пути PI3K-AKT-HIF-1α-FoxO1 дополнительно определяли с помощью вестерн-блоттинга и qRT-ПЦР-анализа соответственно. Мы обнаружили, что лечение Sal значительно ограничивало пролиферацию, миграцию и инвазию клеток MCF-7 с дозозависимыми эффектами. Между тем, введение Sal также резко заставляло клетки MCF-7 подвергаться апоптозу и остановке клеточного цикла. Иммунофлуоресцентные тесты показали, что Sal наблюдаемо стимулирует продукцию АФК иCa2+ в клетках MCF-7. Дальнейшие данные подтвердили, что Sal способствовал уровню экспрессии проапоптотических белков, Bax, Bim, расщепленной каспазы-9/7/3 и соответствующих им генов. Последовательно вмешательство Sal заметно снижало экспрессию белков Bcl-2, p-PI3K/PI3K, p-AKT/AKT, mTOR, HIF-1α и FoxO1 и соответствующих им генов. В заключение, Sal может быть использован в качестве потенциального растительного соединения для лечения рака молочной железы, поскольку он может уменьшить злокачественную пролиферацию, миграцию и инвазию клеток MCF-7 путем ингибирования пути PI3K-AKT-HIF-1α-FoxO1.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Как один из наиболее часто диагностируемых видов рака и наиболее распространенных злокачественных новообразований, последние статистические данные показывают, что к 2020 году во всем мире возникло 2,3 миллиона случаев рака молочной железы, что составляет 11,7%всех случаев рака. Общие симптомы рака молочной железы включают болезненность и покалывание в груди, уплотнения и боль в груди, выделения из сосков, эрозию или впалую кожу, а также увеличение подмышечных лимфатических узлов 1,2. Еще большую тревогу вызывает тот факт, что число новых случаев заболевания и общая заболеваемость раком молочной железы продолжают расти с огромной скоростью каждый год, составляя 6,9% смертей, связанных с раком1. В настоящее время вмешательство при раке молочной железы по-прежнему в основном включает химиотерапию, хирургическое вмешательство, лучевую терапию и комплексное лечение. Несмотря на то, что лечение может эффективно снизить частоту рецидивов и смертность пациентов, длительное применение лечения часто приводит к множественной лекарственной устойчивости, выпадению волос на большой площади, тошноте и рвоте, а также серьезной психической и психологической нагрузке 2,3. Примечательно, что потенциальный риск метастазов в несколько органов при раке молочной железы также вынуждает людей искать новые растительные источники лекарственной терапии 4,5.

Фосфоинозитид-3-киназная (PI3K)-опосредованная передача сигналов участвует в росте, пролиферации и выживаемости рака молочной железы посредством сплайсинга, который влияет на экспрессию нескольких генов6. Многочисленные данные свидетельствуют о том, что протеинкиназа B (AKT) может соединяться с мишенью рапамицина (mTOR) млекопитающих для дальнейшего увеличения заболеваемости раком молочной железы 7,8,9. Кроме того, деактивация передачи сигналов PI3K/AKT/mTOR также считается ключевым компонентом препаратов, ингибирующих злокачественную пролиферацию и стимулирующих апоптоз при раке молочной железы10,11,12. Хорошо известно, что крайняя гипоксия в микроокружении опухоли вызывает массивный всплеск гипоксически-индуцируемого фактора 1 альфа (HIF-1α), что еще больше ухудшает прогрессирование рака молочной железы13,14,15. Параллельно стимуляция AKT также приводит к избыточному накоплению HIF-1α, ограничивая апоптоз в образцах рака молочной железы16,17. Интересно, что было подтверждено, что активация передачи сигналов PI3K-AKT-HIF-1α участвует в патологическом прогрессировании и метастазировании при различных видах рака, включая рак легких18, колоректальный рак19, рак яичников20 и рак простаты21. В дополнение к тому, что гиперэкспрессия фактора транскрипции 1 (FoxO1) раздвоенной головки также вызывается стимуляцией сигналов AKT, которая способствует остановке цикла и ингибированию апоптоза в клетках рака молочной железы22,23. В совокупности приведенные выше убедительные данные свидетельствуют о том, что ингибирование каскада передачи сигналов PI3K-AKT-HIF-1α-FoxO1 может быть потенциальной новой мишенью для лекарственной терапии при раке молочной железы.

Широко продемонстрировано, что салидрозид (Sal) обладает противораковой24,25, антигипоксией26,27,28,29 и иммуностимулирующей фармакологической активностью30. Это светло-коричневый или коричневый порошок, который легко растворяется в воде, является разновидностью фенилэтанового гликозида и имеет формулу химической структуры C14H 20 O7 и молекулярную массу300,331,32. Современные фармакологические исследования показали, что Sal может способствовать апоптозу клеток рака желудка, сдерживая передачу сигналов PI3K-AKT-mTOR24. Дальнейшие данные также свидетельствуют о том, что подавление передачи сигналов PI3K-AKT-HIF-1α с помощью лечения Sal может способствовать апоптозу раковых клеток, повышая их чувствительность к химиотерапевтическим агентам25. Данные также свидетельствуют о том, что Sal ограничивает миграцию и инвазию клеток и вызывает остановку цикла, способствуя апоптозу в клетках MCF-7 рака молочной железы человека33,34. Тем не менее, еще предстоит выяснить, может ли Sal регулировать передачу сигналов PI3K-AKT-HIF-1α-FoxO1 и ингибировать злокачественную пролиферацию клеток MCF-7. Таким образом, этот протокол был направлен на изучение влияния Sal на миграцию клеток MCF-7, инвазию, клеточный цикл и апоптоз через путь PI3K-AKT-HIF-1α-FoxO1. Интегрированные исследовательские стратегии, включающие традиционные, недорогие и независимые эксперименты, такие как оценка миграции и инвазии клеток, определение апоптоза и клеточного цикла с помощью проточной цитометрии, определение активных форм кислорода (АФК) и флуоресценцииCa2+ и т. д., могут служить ориентиром для общего планирования экспериментов по противораковым исследованиям с использованием традиционной фитотерапии. Экспериментальный процесс данного исследования показан на рисунке 1.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Клетки MCF-7, использованные в настоящем исследовании, были получены из коммерческого источника (см. таблицу материалов).

1. Клеточная культура

  1. Культивирование клеток MCF-7 в увлажненной атмосфере 5% CO2 при 37 °C с DMEM, содержащим 10% FBS и 1% пенициллина (10 000 Ед/мл)/стрептомицина (10 000 мкг/мл) (см. таблицу материалов).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Клетки, занимающие 90% дна чашки, были использованы для эксперимента и разделены на следующие группы: контрольная группа, группа доксорубицина гидрохлорида (DXR, 5 мкМ) и группы Sal (20 мкМ, 40 мкМ и 80 мкМ) или контрольная группа, LY294002 (10 мкМ, ингибитор PI3K) группы, группа Sal (80 мкМ) и группа LY294002 (10 мкМ) + Sal (80 мкМ) (см. таблицу материалов).

2. Анализ жизнеспособности клеток

ПРИМЕЧАНИЕ: Для получения более подробной информации об этой процедуре, пожалуйста, обратитесь к предыдущему отчету27.

  1. Высевают клетки MCF-7 с плотностью 8 x 104 клетки/лунку в 96-луночные планшеты и инкубируют с Sal (10 мкМ, 20 мкМ, 40 мкМ, 80 мкМ, 160 мкМ и 320 мкМ) в течение 24 ч или Sal (20, 40, 80 мкМ) в течение 12 ч/24 ч/36 ч/48 ч в течение ночи до тех пор, пока клетки не слипнутся.
  2. После обработки проводят совместную инкубацию клеток MCF-7 с 10 мкл/лунку раствора CCK-8 (см. таблицу материалов) в течение 2 ч. Затем измерьте оптическую плотность на длине волны 450 нм (OD450) с помощью автоматического считывателя микропланшетов.

3. Миграция и инвазия клеток

ПРИМЕЧАНИЕ: Для получения подробной информации об этой процедуре, пожалуйста, обратитесь к предыдущему отчету35.

  1. Инкубируйте 2 мл 5 x 10 клетокпо 6 клеток/мл, высеянных в 6-луночные планшеты, чтобы покрыть 90% дна чашки.
  2. Выполните линейную скретч-намотку по центру монослоя клетки стерильным наконечником пипетки. Получение изображений с помощью оптического микроскопа через 0 ч, 24 ч и 48 ч.
  3. Используйте программное обеспечение Image J для измерения ширины царапин.
  4. Для анализа на трансвелл суспендируйте клетки MCF-7 без сывороточной среды и затравите в верхней трансвелловой камере, предварительно покрытой Matrigel или без него (см. таблицу материалов).
  5. В нижней части трансвеллерной камеры используйте полную среду DMEM в качестве химического индуктора. Через 24 ч удаляют клетки в верхней камере, а оставшиеся инвазивные и мигрирующие клетки закрепляют в метаноле35.
  6. Окрасьте ячейки MCF-7 кристаллическим раствором фиалки (см. таблицу материалов). Сделайте снимки с помощью оптического микроскопа.

4. Оценка активности Na+-K+-АТФазы и Ca2+-Mg2+-АТФазы

  1. Используйте набор бицинхониновой кислоты (BCA) для измерения концентрации белка в лизированных клетках MCF-7, следуя инструкциям производителя (см. таблицу материалов).
    1. Добавьте образцы лизированных клеток в соответствующих группах в 96-луночные планшеты. После этого добавить рабочий раствор для дальнейшей инкубации при 37 °С в течение 5 мин. Наконец, измерьте значения OD636 с помощью многофункционального считывателя микропланшетов.

5. Анализ апоптоза и клеточного цикла методом проточной цитометрии

ПРИМЕЧАНИЕ: Для получения подробной информации об этой процедуре, пожалуйста, обратитесь к предыдущему отчету31.

  1. Переваривают клетки и собирают для ресуспендирования в фосфатно-солевом буфере (PBS) в течение 20 минут окрашивания аннексином V-FITC и йодидом пропидия (PI) (см. таблицу материалов), а затем определяют количество апоптотических клеток с помощью проточного цитометра.
  2. Смешивают ресуспендированный раствор образца с раствором PI в течение 30 мин инкубации с последующим детектированием с помощью проточного цитометра.

6. Флуоресцентное окрашивание DCFH-DA и Fluo-4 AM

ПРИМЕЧАНИЕ: Для получения подробной информации об этой процедуре, пожалуйста, обратитесь к предыдущему отчету29.

  1. Инкубируйте клетки MCF-7 в течение 20 мин с помощью флуоресцентного зонда dcfh-da 10 мкМ (см. таблицу материалов) при 37 °C. После тщательного удаления излишков DCFH-DA путем трехкратной промывки PBS с помощью флуоресцентного микроскопа проверяют интенсивность флуоресценции на длинах волн возбуждения и излучения 488 нм и 525 нм соответственно.
  2. Инкубируют клетки MCF-7 с раствором флуоресцентного зонда Fluo-4 AM 5 мкМ (см. таблицу материалов) в течение 45 мин при 37 °C. После трехкратной промывки ФБС с помощью флуоресцентного микроскопа определяют значения интенсивности флуоресценции на длинах волн возбуждения и излучения 488 нм и 516 нм соответственно.

7. Вестерн-блоттинг

  1. Добавьте 2 мл клеточных суспензий 5 x 10 6 клеток/мл, содержащих различные лекарственные препараты, в6-луночные планшеты и культивируйте в инкубаторе с температурой 37 °C, 5%CO2 в течение 24 часов.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Группы для вестерн-блоттинг-анализа были установлены следующим образом: контрольная группа, LY294002 (10 мкМ) группа, группа Sal (80 мкМ) и группа LY294002 (10 мкМ) + Sal (80 мкМ) (см. таблицу материалов).
  2. Соберите клетки и надосадочную жидкость и центрифугируйте при 560 × г при 4 °C в течение 3 мин. Выбросьте надосадочную жидкость и дважды промойте предварительно охлажденным ПБС. После каждой промывки центрифугируйте клетки при 560 × г при 4 °C в течение 3 мин.
  3. Добавьте 50 мкл лизисного буфера к образцу клетки, начиная с шага 7.2, на 15-минутную ледяную баню. Центрифугу при 8550 × г при 4 °C в течение 10 мин для сбора образца надосадочной жидкости.
  4. После определения концентрации белка методом BCA образец белка на стадии 7.3 смешивают с загрузочным буфером в соотношении 4:1, денатурируют при 100 °C в течение 10 мин в металлической ванне и охлаждают до комнатной температуры.
  5. Добавьте 20 мкг образца белка из шага 7.4, отделите белки с разной молекулярной массой35с помощью 10% SDS-PAGE (см. таблицу материалов), а затем перенесите на мембраны PVDF размером 0,22 мкм. После закупорки 5% БСА инкубируют мембраны с соответствующими первичными антителами в течение ночи при 4 °C.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Разбавленная концентрация следующих первичных антител составляет 1:1000: расщепленная каспаза-9/7/3 (CC-9/7/3), Bim, Bax, Bcl-2, p-PI3K/PI3K, p-AKT/AKT, mTOR, HIF-1α, FoxO1 и β-актин (см. таблицу материалов).
  6. На следующий день инкубируют мембраны с козьими антикроличьими вторичными антителами IgG в течение 2 ч при 37 °C. Проявите мембраны с использованием хемилюминесцентного раствора ECL и получите изображения с помощью бесконтактной количественной системы визуализации вестерн-блоттинга (см. таблицу материалов).

8. ОТ-ПЦР

  1. Проводят центрифугирование для сбора клеток MCF-7 при 560 x g при 4 °C в течение 3 мин и добавляют 500 мкл буфера RL1 в ячейки 5 × 106 . Продувайте и перемешивайте пипеткой до тех пор, пока не исчезнут клеточные массы.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Буфер RL1 является одним из компонентов общего набора для выделения РНК (см. таблицу материалов).
  2. Перенесите гомогенаты клеток на этапе 8.1 в колонку для очистки ДНК, встроенную в пробирку для сбора, и центрифугу при 8 550 × g при 4 °C в течение 2 мин. Снимите колонку для очистки ДНК и держите надосадочную жидкость в пробирке для сбора.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Колонка для очистки ДНК и пробирка для сбора являются двумя компонентами в наборе для выделения общей РНК (см. таблицу материалов).
  3. Добавьте 800 мкл буфера RL2 к 500 мкл надосадочной жидкости, начиная с шага 8.2, и осторожно перемешайте.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Буфер RL2 является одним из компонентов набора для выделения общей РНК (см. таблицу материалов). Добавьте 120 мл безводного этанола в 60 мл буфера RL2 перед использованием.
  4. Перенесите 700 мкл смеси со стадии 8.3 в колонку, содержащую только РНК, встроенную в сборную пробирку, и центрифугу при 8 550 × g при 4 °C в течение 1 мин. Выбросьте отработанную жидкость в сборную трубку.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Колонка только для РНК является одним из компонентов общего набора для выделения РНК (см. таблицу материалов).
  5. Повторите шаг 8.4, чтобы обработать оставшуюся смесь из шага 8.3.
  6. Добавьте 500 мкл буфера RW1 в колонку, содержащую только РНК, и центрифугируйте при 8 550 × г при 4 °C в течение 1 мин. Выбросьте отработанную жидкость в сборную трубку.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Буфер RW1 является одним из компонентов набора для выделения общей РНК (см. таблицу материалов).
  7. Добавьте 700 мкл буфера RW2 в колонку, содержащую только РНК, и центрифугируйте при 8 550 × г при 4 ◦C в течение 1 мин. Выбросьте отработанную жидкость в сборную трубку. Повторите шаг 8.7 один раз.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Буфер RW2 является одним из компонентов набора для выделения общей РНК (см. таблицу материалов).
  8. Поместите колонку, содержащую только РНК, обратно в пробирку для сбора и центрифугируйте при 8550 × г при 4 °C в течение 2 мин, чтобы удалить оставшийся буфер RW2.
  9. Перенесите колонку, содержащую только РНК, в новую сборную пробирку и капните 100 мкл безРНКазного ddH2O, предварительно нагретого при 65 °C, в центр мембраны для колонки только с РНК. Помещают при 25 °C на 2 мин и собирают раствор РНК центрифугированием при 8 550 × г при 4 °C в течение 1 мин.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Свободный от РНКазы ddH2O является одним из компонентов в наборе для выделения общей РНК (см. таблицу материалов).
  10. Добавьте 4 мкл 5-кратного реакционного буфера, 1 мкл праймера олиго (dT)18 , 1 мкл случайного праймера гексамера, 1 мкл ген-специфического праймера (см. таблицу 1), 1 мкл смеси ферментов и 5 мкг раствора РНК со стадии 8.9 в полоску из 8 пробирок объемом 100 мкл. Дополнить реакционную систему водой, не содержащей РНКазы, до 20 мкл.
  11. Установите условия реакции системы следующим образом: (1): 95 °C, 30 с, 1 цикл; (2): 95 °C, 5 с, 50 циклов, 60 °C, 34 с; (3): 95 °C, 5 с, 1 цикл, 65 °C, 60 с, 97 °C, 1 с; и (4): 42 °C, 30 с, 1 цикл. Выполните процедуру qRT-PCR.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Относительные уровни экспрессии генов-мишеней были количественно проанализированы методом 2−ΔΔCT 36,37. Информация о праймерах каждого гена, используемого для анализа qRT-PCR, приведена в таблице 1.

9. Статистический анализ

  1. Выразите данные в виде среднего ± стандартного отклонения трех независимых экспериментов.
  2. Проанализируйте сравнения между несколькими группами с помощью программного обеспечения для построения графиков и анализа (см. таблицу материалов) с помощью одностороннего дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим тестом Тьюки. В данной работе P < 0,05 был определен как статистически значимый.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Влияние Sal на ингибирование избыточной пролиферации и замедление заживления ран в клетках MCF-7
Чтобы исследовать потенциал Sal против рака молочной железы, мы сначала проверили его противоопухолевые свойства, используя токсичность пролиферации клеток и скретч-анализы клеточной линии MCF-7 рака молочной железы человека. Эти клетки инкубировали с серией концентраций Sal (5-320 мкМ) в течение 24 ч, а пролиферацию клеток оценивали с помощью анализа CCK-8. Наблюдалось дозозависимое ингибирующее действие ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Рак молочной железы поражает людей всех возрастов и вызывает неисчислимое физическое и психическое бремя, а также большое экономическое давление1. Рак молочной железы с его растущей заболеваемостью и смертностью с каждым годом также привлек внимание всего мира с точки зрения поиска эффективных комплексных методов лечения на растительной основе, выходящих за рамки традиционных методов лечения. Обнадеживает то, что большое количество доказат...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа была поддержана Комиссией по здравоохранению провинции Сычуань (120025).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
1% пенициллин/стрептомицинHyCloneSV30010
антитело AKTImmunoWay Biotechnology CompanyYT0185
Аннексин V-FITC/PI kitMultiSciences Biotech Co., Ltd.AP101
Автоматический считыватель микропланшетовMolecular DevicesSpectraMax iD5
Bax антителоCell Signaling Technology, Inc.#5023
Набор BCABiosharp Life SciencesBL521A
антитело Bcl-2Cell Signaling Technology, Inc.#15071
клеточной сигнализацииантител Bim#2933
Ca2+– Набор для анализа АТФазыNanjing Jiancheng Bioengineering InstituteA070-4-2
Набор для подсчета клеток-8Biosharp Life SciencesBS350B
Набор для окрашивания клеточного циклаMultiSciences Biotech Co., Ltd.CCS012
расщепленная каспазаза-3Cell Signaling Technology, Inc.#9661
Расщепленная каспаза-7Клеточная сигнальная технология, Inc.#8438
расщепленная каспазаза-9Клеточная сигнальная технология, Inc.#20750
Кристаллический фиолетовый растворBeyotime BiotechnologyC0121
DMEM высокоглюкозная питательная средаServicebio Technology Co., Ltd.G4510
Доксорубицина гидрохлоридMedChemChemExpressHY-15142
ECL хемилюминесцентный растворBiosharp Life SciencesBL520B
Фетальная бычья сывороткаProcell Life Science & Технология Ко., Лтд.164210
Проточный цитометрBDFACSCanto figure-materials-1
Fluo-4 AMBeyotime BiotechnologyS1060
FoxO1 антителоImmunoWay Biotechnology CompanyYT1758
Goat anti-rabbit IgG вторичное антителоMultiSciences Biotech Co., Ltd.70-GAR0072
Программное обеспечение GraphPad PrismLa JollaВерсия 6.0
HIF-1α антителоAffinity BiosciencesBF8002
Клеточная линия рака молочной железы человека MCF-7Procell Life Science & Технология Ко., Лтд.CL-0149
Загрузочный буферBiosharp Life SciencesBL502B
LY294002MedChemExpressHY-10108
MatrigelThermo 
антитело mTORServicebio Technology Co., Ltd.
Na+– K+– Набор для анализа АТФазыNanjing Jiancheng Bioengineering InstituteA070-2-2
Оптический микроскопOlympusIX71PH
p-AKT антителоImmunoWay Biotechnology CompanyYP0006
PI3K антителоServicebio Technology Co., Ltd.
p-PI3K антителоAffinity BiosciencesAF3241
Количественная система визуализации вестерн-блоттингаTouch Image ProeBlot
Набор для синтеза кДНК с обратной транскрипциейServicebio Technology Co., Ltd.Набор для анализа G3330-100
АФК Beyotime BiotechnologyS0033SDCFH-DA флуоресцентный зонд входит сюда
SalidrosideChengdu Herbpurify Co., Ltd.H-040
SDS-PAGE комплектServicebio Technology Co., Ltd.G2003-50T
Набор для выделения общей РНКForegeneRE-03014
TrypsinHyCloneSH30042.01
β-актинAffinity BiosciencesAF7018
Технология , Inc.356234GB11405GB11525

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Sung, H., et al. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA. 71 (3), 209-249 (2021).
  2. Franzoi, M. A., et al. Evidence-based approaches for the management of side-effects of adjuvant endocrine therapy in patients with breast cancer. Lancet Oncology. 22 (7), e303-313 (2021).
  3. Prionas, N. D., Stephens, S. J., Blitzblau, R. C. Early-stage breast cancer: Tailored external beam fractionation approaches for treatment of the whole or partial breast. Seminars in Radiation Oncology. 32 (3), 245-253 (2022).
  4. Wei, W. C., et al. Diterpenoid vinigrol specifically activates ATF4/DDIT3-mediated PERK arm of unfolded protein response to drive non-apoptotic death of breast cancer cells. Pharmacological Research. 182, 106285(2022).
  5. Zhu, Y., et al. Apoptosis induction, a sharp edge of berberine to exert anti-cancer effects, focus on breast, lung, and liver cancer. Frontiers in Pharmacology. 13, 803717(2022).
  6. Ladewig, E., et al. The oncogenic PI3K-induced transcriptomic landscape reveals key functions in splicing and gene expression regulation. Cancer Research. 82 (12), 2269-2280 (2022).
  7. Lu, Z. N., Song, J., Sun, T. H., Sun, G. UBE2C affects breast cancer proliferation through the AKT/mTOR signaling pathway. Chinese Medical Journal. 134 (20), 2465-2474 (2021).
  8. Weng, H. C., et al. The combination of a novel GLUT1 inhibitor and cisplatin synergistically inhibits breast cancer cell growth by enhancing the DNA damaging effect and modulating the Akt/mTOR and MAPK signaling pathways. Frontiers in Pharmacology. 13, 879748(2022).
  9. Silveira Rabelo, A. C., et al. Calotropis procera induced caspase dependent apoptosis and impaired Akt/mTOR signaling in 4T1 breast cancer cells. Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry. 22 (18), 3136-3147 (2022).
  10. Tohkayomatee, R., Reabroi, S., Tungmunnithum, D., Parichatikanond, W., Pinthong, D. Andrographolide exhibits anticancer activity against breast cancer cells (MCF-7 and MDA-MB-231 cells) through suppressing cell proliferation and inducing cell apoptosis via inactivation of ER-α receptor and PI3K/AKT/mTOR signaling. Molecules. 27 (11), 3544(2022).
  11. Jin, X. Y., et al. TPI1 activates the PI3K/AKT/mTOR signaling pathway to induce breast cancer progression by stabilizing CDCA5. Journal of Translational Medicine. 20 (1), 191(2022).
  12. Li, Z. W., et al. Atractylodin induces oxidative stress-mediated apoptosis and autophagy in human breast cancer MCF-7 cells through inhibition of the P13K/Akt/mTOR pathway. Journal of Biochemical and Molecular Toxicology. 36 (8), 23081(2022).
  13. Chen, F., et al. Extracellular vesicle-packaged HIF-1α-stabilizing lncRNA from tumour-associated macrophages regulates aerobic glycolysis of breast cancer cells. Nature Cell Biology. 21 (4), 498-510 (2019).
  14. You, D., et al. Mitochondrial malic enzyme 2 promotes breast cancer metastasis via stabilizing HIF-1α under hypoxia. Chinese Journal of Cancer Research. 33 (3), 308-322 (2021).
  15. La Camera, G., et al. Adipocyte-derived extracellular vesicles promote breast cancer cell malignancy through HIF-1α activity. Cancer Letters. 521, 155-168 (2021).
  16. Jeong, Y. J., et al. Ascofuranone suppresses EGF-induced HIF-1α protein synthesis by inhibition of the Akt/mTOR/p70S6K pathway in MDA-MB-231 breast cancer cells. Toxicology and Applied Pharmacology. 273 (3), 542-550 (2013).
  17. Zhang, T., et al. Targeting the ROS/PI3K/AKT/HIF-1α/HK2 axis of breast cancer cells: Combined administration of polydatin and 2-deoxy-d-glucose. Journal of Cellular and Molecular Medicine. 23 (5), 3711-3723 (2019).
  18. Han, N. N., et al. HIF-1α induced NID1 expression promotes pulmonary metastases via the PI3K-AKT pathway in salivary gland adenoid cystic carcinoma. Oral Oncology. 131, 105940(2022).
  19. Sun, L. T., Zhang, L. Y., Shan, F. Y., Shen, M. H., Ruan, S. M. Jiedu Sangen decoction inhibits chemoresistance to 5-fluorouracil of colorectal cancer cells by suppressing glycolysis via PI3K/AKT/HIF-1α signaling pathway. Chinese Journal of Natural Medicines. 19 (2), 143-152 (2021).
  20. Gao, T., et al. SIK2 promotes reprogramming of glucose metabolism through PI3K/AKT/HIF-1α pathway and Drp1-mediated mitochondrial fission in ovarian cancer. Cancer Letters. 469, 89-101 (2020).
  21. Zhu, W. H., et al. Dihydroartemisinin suppresses glycolysis of LNCaP cells by inhibiting PI3K/AKT pathway and downregulating HIF-1α expression. Life Sciences. 233, 116730(2019).
  22. Sajadimajd, S., Yazdanparast, R. Differential behaviors of trastuzumab-sensitive and -resistant SKBR3 cells treated with menadione reveal the involvement of Notch1/Akt/FOXO1 signaling elements. Molecular and Cellular Biochemistry. 408 (1-2), 89-102 (2015).
  23. Sajadimajd, S., Yazdanparast, R., Akram, S. Involvement of Numb-mediated HIF-1α inhibition in anti-proliferative effect of PNA-antimiR-182 in trastuzumab-sensitive and -resistant SKBR3 cells. Tumor Biology. 37 (4), 5413-5426 (2016).
  24. Rong, L., et al. Salidroside induces apoptosis and protective autophagy in human gastric cancer AGS cells through the PI3K/Akt/mTOR pathway. Biomedicine & Pharmacotherapy. 122, 109726(2020).
  25. Zeng, Q., et al. Salidroside promotes sensitization to doxorubicin in human cancer cells by affecting the PI3K/Akt/HIF signal pathway and inhibiting the expression of tumor-resistance-related proteins. Journal of Natural Products. 85 (1), 196-204 (2022).
  26. Wang, X. B., et al. Rhodiola crenulata attenuates apoptosis and mitochondrial energy metabolism disorder in rats with hypobaric hypoxia-induced brain injury by regulating the HIF-1α/microRNA210/ISCU1/2 (COX10) signaling pathway. Journal of Ethnopharmacology. 241, 111801(2019).
  27. Tang, Y., et al. Salidroside attenuates CoCl2-simulated hypoxia injury in PC12 cells partly by mitochondrial protection. European Journal of Pharmacology. 912, 174617(2021).
  28. Jiang, S. N., et al. Salidroside attenuates high altitude hypobaric hypoxia-induced brain injury in mice via inhibiting NF-κB/NLRP3 pathway. European Journal of Pharmacology. 925, 175015(2022).
  29. Wang, X. B., et al. Salidroside, a phenyl ethanol glycoside from Rhodiola crenulata, orchestrates hypoxic mitochondrial dynamics homeostasis by stimulating Sirt1/p53/Drp1 signaling. Journal of Ethnopharmacology. 293, 115278(2022).
  30. Vasileva, L. V., et al. Antidepressant-like effect of salidroside and curcumin on the immunoreactivity of rats subjected to a chronic mild stress model. Food and Chemical Toxicology. 121, 604-611 (2018).
  31. Hou, Y., et al. Salidroside intensifies mitochondrial function of CoCl2-damaged HT22 cells by stimulating PI3K-AKT-MAPK signaling pathway. Phytomedicine. 109, 154568(2023).
  32. Fan, F. F., et al. Salidroside as a potential neuroprotective agent for ischemic stroke: A review of sources, pharmacokinetics, mechanism and safety. Biomedicine & Pharmacotherapy. 129, 110458(2020).
  33. Hu, X. L., Zhang, X. Q., Qiu, S. F., Yu, D. H., Lin, S. X. Salidroside induces cell-cycle arrest and apoptosis in human breast cancer cells. Biochemical and Biophysical Research Communications. 398 (1), 62-67 (2010).
  34. Zhao, G., Shi, A. P., Fan, Z. M., Du, Y. Salidroside inhibits the growth of human breast cancer in vitro and in vivo. Oncology Reports. 33 (5), 2553-2560 (2015).
  35. Bai, J. R., et al. The enhanced mitochondrial dysfunction by cantleyoside confines inflammatory response and promotes apoptosis of human HFLS-RA cell line via AMPK/Sirt 1/NF-κB pathway activation. Biomedicine & Pharmacotherapy. 149, 112847(2022).
  36. Hou, Y., et al. Longzhibu disease and its therapeutic effects by traditional Tibetan medicine: Ershi-wei Chenxiang pills. Journal of Ethnopharmacology. 249, 112426(2020).
  37. Yang, L., et al. Dengzhan Xixin injection derived from a traditional Chinese herb Erigeron breviscapus ameliorates cerebral ischemia/reperfusion injury in rats via modulation of mitophagy and mitochondrial apoptosis. Journal of Ethnopharmacology. 288, 114988(2022).
  38. Cui, L. J., et al. Salidroside promotes apoptosis of human HCT116 colon cancer cells by regulating Wnt/β-catenin signaling pathway. Pharmacological Research - Modern Chinese Medicine. 3, 100088(2022).
  39. Wu, S. L., et al. Genome-wide 5-Hydroxymethylcytosine profiling analysis identifies MAP7D1 as a novel regulator of lymph node metastasis in breast cancer. Genomics Proteomics & Bioinformatics. 19 (1), 64-79 (2021).
  40. Du, J. W., et al. Targeted NIRF/MR dual-mode imaging of breast cancer brain metastasis using BRBP1-functionalized ultra-small iron oxide nanoparticles. Materials Science & Engineering C-Materials for Biological Applications. 116, 111188(2020).
  41. Wang, S. F., et al. Mitochondrial stress adaptation promotes resistance to aromatase inhibitor in human breast cancer cells via ROS/calcium up-regulated amphiregulin-estrogen receptor loop signaling. Cancer Letters. 523, 82-99 (2021).
  42. Zuo, Y., et al. Activation of mitochondrial-associated apoptosis signaling pathway and inhibition of PI3K/Akt/mTOR signaling pathway by voacamine suppress breast cancer progression. Phytomedicine. 99, 154015(2022).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

MCF 7PI3K AKTqRT PCR

Похожие статьи