Методическая статья

Эффективное обнаружение популяционных клеток боковой стороны Хёхста с помощью проточной цитометрии

2.4K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/67012

⸱

23 августа 2024 г.

 ,  ,  ,  , 
1Institute of Hematology, Department of Hematology, State Key Laboratory of Biotherapy, West China Hospital, Sichuan University, 2The Lab of Aging Research, State Key Laboratory of Biotherapy, National Clinical Research Center for Geriatrics, West China Hospital, Sichuan University, 3Precision Medicine Research Laboratory, West China Hospital, Sichuan University

В этой статье

Краткое содержание

В данной работе мы показываем, что мощные лазеры с длиной волны 375 нм и 405 нм могут эффективно возбуждать Hoechst 33342 и служить жизнеспособной альтернативой лазеру с длиной волны 355 нм для обнаружения клеток боковой популяции (SP), тем самым расширяя диапазон доступных лазеров в приложениях проточной цитометрии.

Аннотация

Клетки боковой популяции (SP) идентифицируют с помощью окрашивания по методу Hoechst 33342 и анализируют с помощью проточной цитометрии (FCM). Метод Hoechst SP используется для выделения стволовых клеток на основе свойств оттока красителя транспортеров АТФ-связывающей кассеты (ABC). Первоначально этот метод использовался для идентификации и выделения гемопоэтических стволовых клеток (ГСК), но в настоящее время он эволюционировал и в первую очередь сосредоточился на идентификации и выделении раковых стволовых клеток (ОСК). Традиционный метод обнаружения FCM использует лазер с длиной волны 355 нм для возбуждения красителя для обнаружения SP-клеток. В ходе этого исследования мы успешно определили альтернативные подходы к возбуждению красителем, которые могут эффективно заменить обнаружение SP-клеток с помощью лазера с длиной волны 355 нм. Это достигается за счет использования мощных лазеров с длиной волны волны 375 нм или 405 нм. Это позволяет нам проявлять повышенную селективность при обнаружении SP-клеток, а не ограничиваться только лазерной проточной цитометрией с длиной волны 355 нм.

Введение

Клетки боковой популяции (SP) идентифицируют с помощью окрашивания по методу Hoechst 33342 и анализируют с помощью проточной цитометрии (FCM). SP-клетки характеризуются выкачиванием флуоресцентного красителя ДНК из клеток через их транспортер АТФ-связывающей кассеты (ABC) 1,2. Первоначально метод был разработан для выделения гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) костного мозга мышей1. SP-клетки костного мозга были обогащены популяцией ГСК, характеризующихся низкой экспрессией CD117+Sca-1+Lin-Thy1 3,4. После этого метод широко использовался для выделения и обогащения стволовых клеток из других тканей, включая сердечную мышцу5, печень6,легкие 7, почку8 и передний мозг9. В частности, в последнее десятилетие этот метод применялся для выделения раковых стволовых клеток (ОСК). ЦСК представляют собой небольшую популяцию клеток, обладающих свойствами инициации опухоли, самообновления, устойчивости к химиотерапии и метастатическим потенциалом10. ЦСК были первоначально идентифицированы при злокачественных новообразованияхкроветворения 11 и впоследствии наблюдались при различных солидных опухолях, таких как рак предстательной железы12, яичников13, желудка14, молочной железы15 и рака легких16. Несмотря на доступность различных методов идентификации ЦСК, метод SP остается предпочтительным выбором благодаря его широкой применимости к различным тканям и клеточным линиям. Более того, это ценный метод, который выделяет РСК с помощью флуоресцентно-активируемой сортировки клеток (FACS)16,17,18. Результаты эксперимента показывают, что SP-клетки проявляют выраженную онкогенность и демонстрируют повышенные уровни экспрессии генов, ассоциированных со стволовыми клетками19,20. Наше предыдущее исследование21 также продемонстрировало, что транскриптомный анализ изолированных SP-клеток при множественной миеломе выявляет обогащение сигнальных путей, связанных со стволовыми клетками, таких как путь ежа. Между тем, мы провели анализ обогащения путей генов, дифференциально экспрессирующихся в SP-клетках острого миелолейкоза22. Измененные гены были обогащены путями, связанными со стволовыми клетками (Wnt/β-катенин, TGF-β, Hedgehog, Notch). Мы обнаружили, что клетки 1 x 105 SP могут образовывать опухоли у мышей с нулевым числом BALB/c22, в то время как клетки без SP не могут, что указывает на то, что клетки SP обладают характеристиками стволовых клеток лейкемии. Эффективность метода Hoechst SP в идентификации РСК очевидна.

Протокол Hoechst SP был усовершенствован и усовершенствован по мере развития исследований. Протокол предусматривает строгий контроль концентрации красителя, плотности клеток, температуры и продолжительности инкубации, состава буфера и значения pH. Образцы клеток, подготовленные в соответствии с этим протоколом, подвергали проточному цитометрическому анализу. Из-за возбуждения красителя Hoechst ультрафиолетовым лазером на длине волны 355 нм и детектирования его флуоресцентного излучения с помощью фильтра 690/50 нм (Hoechst Red) и фильтра 450/50 нм (Hoechst Blue) для FCM требуется лазер с длиной волны 350 нм. Тем не менее, лазеры с длиной волны 350 нм обычно не используются в большинстве FCM из-за их высокой стоимости. Следовательно, мы попытались найти альтернативный подход к возбуждению красителя для эффективного обнаружения SP-клеток с помощью проточной цитометрии. В этом исследовании была оценена способность лазеров с длиной волны 375 нм и 405 нм обнаруживать SP-элементы и сравниваться с возможностями лазера с длиной волны 355 нм. Наши результаты демонстрируют удивительное сходство между SP-ячейками, обнаруженными лазерами с длиной волны 355 нм, 375 нм и 405 нм. Эти результаты свидетельствуют о том, что мощные лазеры с длиной волны 375 нм и 405 нм могут служить реальной альтернативой лазеру с длиной волны 355 нм для обнаружения SP-клеток. Включение дополнительных возбуждающих источников света для Hoechst 33342 облегчает использование большего количества моделей проточной цитометрии.

Протокол

В экспериментах в этом исследовании приняли участие в общей сложности 10 мышей C57BL/6 в возрасте от 8 до 12 недель. Экспериментальные операции проводились в соответствии с протоколом, который был одобрен Комитетом по институциональному уходу за животными и их использованию Сычуаньского университета (#201609309). Экспериментальные материалы и параметры проточной цитометрии, использованные в данной статье, приведены в Таблице материалов.

1. Выделение и забор клеток костного мозга мыши

  1. Усыпляйте мышей в строгом соответствии с рекомендациями учреждения. Чтобы вызвать потерю сознания у мышей, вводят ингаляционные анестетики, начиная с 2% изофлурана, с последующим постепенным увеличением дозы до 5% изофлурана до прекращения дыхания.
  2. Препарируйте мышей в операционном блоке или вытяжном шкафу. Очистите и простерилизуйте мышей с помощью 70% этанола.
  3. Острыми ножницами разрежьте кожу и мышцу ноги полностью и рассеките бедренные кости.
  4. Аккуратно раздавите бедренную кость шлифовальным стержнем в ступке и промойте клетки костного мозга средой DMEM, пока кость не станет белой.
  5. Полученные клетки костного мозга отфильтровать с помощью фильтра 100 мкм в пробирки объемом 15 мл. Центрифуга при 800 x g в течение 5 мин при 4 °C.
  6. Выбросьте надосадочную жидкость и лизируйте остаточные эритроциты с 1 мл буфера для лизиса эритроцитов в течение 1 мин при 4 °C. Центрифуга при 800 x g в течение 5 мин при 4 °C. После центрифугирования снова промойте средой DMEM.
  7. Ресуспендируйте клетки в 2 мл инкубационного раствора (среда DMEM + 5% FBS), подсчитайте клетки с помощью автоматического счетчика клеток и отрегулируйте концентрацию клеток до 1,0 x 106 клеток/мл с помощью инкубационного раствора.

2. Клеточное окрашивание

  1. Добавьте 2 мл суспензии клеток костного мозга от каждой мыши с 5 мкг/мл Hoechst 33342. К еще 1 мл аликвоты добавьте 100 мкМ верапамил в качестве отрицательного контроля.
  2. Выдерживать на водяной бане при температуре 37 °C в течение 90 мин с легким перемешиванием каждые 30 мин.
  3. После инкубации охладите клетки на льду в течение 5 минут, а затем центрифугируйте при 250 x g в течение 5 минут при 4 °C. Повторно суспендируйте элементы в холодном растворе (HBSS + 2% FBS). Центрифугируйте при температуре 4 °C в течение 5 минут и выбросьте надосадочную жидкость.
  4. Ресуспендируйте полученную клеточную гранулу в 500 мкл проточного раствора на образец. Перед анализом FCM добавьте в клетки 2 мкг/мл йодида пропидия (PI) и поместите на лед примерно на 5 минут.

3. Проточная цитометрия

ПРИМЕЧАНИЕ: Краткое описание различных используемых систем и конфигураций см. в Таблице 1.

  1. Калибровка значений коэффициента вариации (CV) необходимых каналов с помощью ежедневного контроля качества (QC) флуоросфер в FCM и проведение тестирования образцов после успешного завершения контроля качества.
    1. Выберите ярлык программного обеспечения на рабочем столе и запустите программное обеспечение.
    2. Выберите «Начать контроль качества/Стандартизация» в меню «Контроль качества/Стандартизация», чтобы получить доступ к эксперименту по контролю качества.
    3. Вставьте пробирку для образцов флюоросфер QC в держатель пробирки.
    4. Нажмите кнопку Пуск , чтобы загрузить образец и начать выполнение процедуры контроля качества. FCM готовы к использованию после прохождения контроля качества.
  2. Возбуждайте краситель Hoechst 33342 тех же образцов лазером с длиной волны 355 нм, 375 нм и 405 нм соответственно для детектирования красного цвета Hoechst в канале 690/50 нм и синего цвета Hoechst в канале 450/50 нм.
    1. Создайте новый эксперимент, выбрав пункт Новый эксперимент в меню Файл, укажите путь к файлу и сохраните эксперимент.
    2. Выберите «Задать канал » в меню «Настройки». Установите флажок сигнала канала (Y585, V450, V660, NUV450, NUV660, UV450, UV660), затем добавьте название реагента в столбец Метка (Y585: PI; V450: Hoechst Blue-405 нм; V660: Hoechst красный - 405 нм; NUV450: Hoechst Blue-375 нм; NUV660: Hoechst Blue-375 нм; UV450: Hoechst Blue-355 нм; UV660: Hoechst Blue-355 нм).
    3. Щелкните значки Псевдоцветные графики в области графика, чтобы создать графики. Выберите имя оси, чтобы изменить отображаемый канал.
    4. Нажмите «Добавить пробирку » на экране «Пробирка», чтобы создать новые образцы пробирок и изменить их имена.
    5. Выберите Выполнить , чтобы загрузить выборку, просмотреть графики и установить стропы. Отрегулируйте настройки усиления и порога. Выберите Запись , чтобы сохранить данные.
  3. Разработайте логику настройки гейта.
    1. Для первого графика щелкните по оси X, чтобы выбрать FSC-W, и щелкните по оси Y , чтобы выбрать FSC-A. Выберите Polygon Gate , чтобы нарисовать строп A, чтобы обвести отдельную ячейку и исключить смежные ячейки (рисунок 1A).
    2. Для второго графика щелкните по оси X, чтобы выбрать FSC-A, и щелкните по оси Y, чтобы выбрать SSC-A. Выберите Polygon Gate , чтобы нарисовать элемент B для разделения нефрагментарных клеток и исключения клеточного мусора (рисунок 1B).
    3. Для третьего графика щелкните по оси X, чтобы выбрать PI-A, и щелкните по оси Y, чтобы выбрать SSC-A. Выберите многоугольный вентиль , чтобы нарисовать строб D. Выберите живые ячейки с отрицательным PI (рис. 1C) и нарисуйте стрит C, чтобы получить живые клетки.
    4. Для четвертого двумерного графика щелкните по оси X, чтобы выбрать Hoechst Red, и щелкните по оси Y , чтобы выбрать Hoechst Blue. Щелкните правой кнопкой мыши Plot и выберите Property в раскрывающемся меню. Выберите «Линейный формат» fили обе оси X и Y. Выберите Polygon Gate для рисования гейта SP для получения ячеек SP (рис. 1D).
  4. Чтобы оценить пригодность образца, используйте 355 нм специфического проточного цитометра23 для обнаружения SP-клеток.
  5. Используйте лазеры 355 нм (мощность лазера: 20 мВт) и 405 нм (мощность лазера: 80 мВт) одновременно для обнаружения как контрольных клеток (с добавлением верапамила), так и экспериментальных клеток.
  6. Регистрируйте флуоресцентные сигналы на каналах 690/50 нм и 450/50 нм, соответствующих двум лазерам. Наблюдайте за эффективной стимуляцией красителя Hoechst 33342 лазерами с длиной волны 355 нм и 405 нм с помощью прозрачных SP-клеток (рис. 2B-C).
  7. Для тех же образцов используют лазеры 375 нм (мощность лазера: 60 мВт) и 405 нм (мощность лазера: 80 мВт) для детектирования клеток.

Результаты

На рисунке 2 контрольную группу лечили верапамилом, который блокирует транспортеры ABC в стволовых клетках для предотвращения элиминации Hoechst 33342. Таким образом, стволовые клетки в группе неверапамила вытесняют Hoechst 33342 и образуют отрицательную клеточную популяцию, известную как SP-клетки. Лазер с длиной волны 355 нм эффективно возбуждает краситель Hoechst 33342, что приводит к четкому наблюдению SP-клеток костного мозга (рис. 2A). SP-ячейки одних и тех же образцов, обнаруженных лазером с длиной волны 355 нм и лазером с длиной волны 405 нм, оказались практически идентичными (рис. 2D).

Из рисунков 2 и 3 мы увидели, что другие модели нетрадиционных расходомеров также могут идентифицировать ячейки SP. Результаты показывают, что лазеры с длиной волны 375 нм и 405 нм эффективно возбуждают Hoechst 33342 для получения SP-ячеек (рис. 3A-B). Когда необходимо обнаружить или изолировать ЦСК или ГСК, мы можем выбрать лазер с длиной волны 375 нм или 405 нм вместо лазера с длиной волны 355 нм.

figure-results-1
Рисунок 1: Логика установки затвора на основе проточной цитометрии для обнаружения SP-клеток. (A) FSC-A и FSC-W были использованы для исключения адгезивных клеток. Вентиль A представляет кластер из одной клетки. (B) Параметры FSC-A и SSC-A были использованы для удаления клеточного мусора. Вентиль B представляет собой кластер нефрагментарных клеток. (C) Были отобраны живые клетки, проявляющие отрицательный йодид пропидия (PI). Вентиль C представляет кластер живых клеток. (D) Флуоресцентные сигналы регистрировались по каналам 690/50 нм (красный Хёхста) и 450/50 нм (синий Хёхст). Вентиль SP представляет кластер ячеек SP. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

figure-results-2
Рисунок 2: Мощный лазер с длиной волны 405 нм обнаруживает SP-элементы так же эффективно, как и лазер с длиной волны 355 нм. (А) Краситель Hoechst 33342 возбуждали лазером с длиной волны 355 нм от обычного проточного цитометра для обнаружения SP-клеток костного мозга. (В, В) SP-клетки костного мозга были идентифицированы с помощью лазеров с длиной волны 355 нм и 405 нм той же ТКМ. (D) SP-элементы одних и тех же образцов, обнаруженных лазером с длиной волны 355 нм и лазером с длиной волны 405 нм, оказались по существу идентичными. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

figure-results-3
Рисунок 3: Мощные лазеры с длиной волны 375 нм и 405 нм способны обнаруживать SP-элементы. (A) Мощный лазер с длиной волны 375 нм может обнаруживать SP-элементы. (B) SP-клетки костного мозга также могут быть обнаружены с помощью лазеров с длиной волны 405 нм. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

Тип лазераДлина волны лазера (нм)Мощность лазера (мВт)Красный фильтр Hoechst (нм)Синий фильтр Hoechst (нм)
Moflo Astrios EQГаз аргон355100692/75448/59
CytoFLEX LXПолупроводник35520690/50450/50
40580690/50450/50
CytoFLEX SПолупроводник37560690/50450/50
CytoFLEX SRTПолупроводник40580690/50450/50

Таблица 1: Сводка конфигураций проточных цитометров.

Обсуждение

Мы использовали описанный протокол для проведения трех экспериментов, в каждом из которых участвовало 3-4 мыши, в результате чего было получено в общей сложности 10 мышей. Доля SP-элементов колебалась от 0,05% до 0,76%. Важно отметить, что среди мышей наблюдались индивидуальные вариации. Мы использовали четыре проточных цитометра для анализа образцов Хёхста. Было замечено, что возбуждение красителя Hoechst лазером мощностью 20 мВт и длиной волны 355 нм на новой версии проточной цитометрии эквивалентно возбуждению лазера мощностью 100 мВт с длиной волны 355 нм на старомодной проточной цитометрии. Это явление можно объяснить различиями в типах лазеров, используемых в обеих системах. Возможная причина наблюдаемого эффекта лазеров с длиной волны 375 нм и 405 нм может быть связана со значительной выходной мощностью обоих лазеров в сочетании с использованием детектора лавинных фотодиодов (APD). Канал Hoechst Red-A захватил почти красную длину волны 690 нм, где эффективность фотоэлектрического преобразования фотоумножителя (ФЭУ) была относительно низкой. Тем не менее, APD продемонстрировал эффективность фотоэлектрического преобразования примерно в десять раз выше, чем у PMT24. Поэтому в сочетании с мощными лазерами с длиной волны 375 нм и 405 нм детекторы APD эффективно различают SP-ячейки. Лазер с длиной волны 405 нм не только эффективно обнаруживает SP-клетки, но и демонстрирует превосходную способность различать подмножество слабо положительных популяций красных клеток Хёхста по сравнению с лазером с длиной волны 355 нм.

Важнейшим этапом протокола является использование проточной цитометрии с помощью лазера с длиной волны 375 нм или лазера с длиной волны 455 нм для обнаружения клеток с каналами с длиной волны 690/50 нм (красный Хёхста) и 450/50 нм (синий с длиной волны Хёхст). В то время как этот метод обнаруживает SP-ячейки с помощью лазеров с длиной волны 375 нм и 405 нм вместо лазера с длиной волны 355 нм (традиционный лазер для анализа SP-ячеек1), которые чаще встречаются в FCM, требуются мощные лазеры с длиной волны 375 нм и 405 нм. Это приводит к ограничениям данной технологии. Значение метода заключается в расширении диапазона лазеров, используемых для детектирования красителей Хёхста, чтобы другие модели проточной цитометрии могли быть использованы для детектирования SP-клеток.

Раскрытие информации

Конфликт интересов не декларируется.

Благодарности

Эта работа была поддержана грантами J.H. от Национального фонда естественных наук Китая (No 81800207). Мы высоко ценим помощь компании Beckman Coulter, Inc. в обеспечении поддержки проточной цитометрии и калибровки параметров. Мы благодарим Цзяо Чэня из Государственной ключевой лаборатории болезней полости рта Западно-Китайской стоматологической больницы Сычуаньского университета и Юй Ци из Исследовательского центра регенеративной медицины Западно-Китайской больницы Сычуаньского университета за их помощь в сборе данных проточной цитометрии.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Автоматический счетчик ячеекCountstar1M1200
Cell Filter (100 & микро; m)BIOFILCSS-013-100
Ежедневный контроль качества флюоросферBeckman CoulterB5230
Модификация Dulbecco's Eagle's Medium с глюкозой 4,5 г/л (среда DMEM)CORNING10-013-CVRC
Фетальная бычья сывороткаCORNING35-081-CV
HBSSHycloneSH30030.02
Hoechst 33342Sigma-AldrichB2261
Пропидиум йодид (PI)Sigma-AldrichP4170
Буфер для лизиса эритроцитовBeyotimeC3702
VerapamilSigma-AldrichV4629

Ссылки

  1. Goodell, M. A., Brose, K., Paradis, G., Conner, A. S., Mulligan, R. C. Isolation and functional properties of murine hematopoietic stem cells that are replicating in vivo. J Exp Med. 183 (4), 1797-1806 (1996).
  2. Zhou, S., et al. The ABC transporter Bcrp1/ABCG2 is expressed in a wide variety of stem cells and is a molecular determinant of the side-population phenotype. Nat Med. 7 (9), 1028-1034 (2001).
  3. Camargo, F. D., Chambers, S. M., Drew, E., McNagny, K. M., Goodell, M. A. Hematopoietic stem cells do not engraft with absolute efficiencies. Blood. 107 (2), 501-507 (2006).
  4. Challen, G. A., Boles, N. C., Chambers, S. M., Goodell, M. A. Distinct hematopoietic stem cell subtypes are differentially regulated by TGF-beta1. Cell Stem Cell. 6 (3), 265-278 (2010).
  5. Asakura, A., Seale, P., Girgis-Gabardo, A., Rudnicki, M. A. Myogenic specification of side population cells in skeletal muscle. J Cell Biol. 159 (1), 123-134 (2002).
  6. Terrace, J. D., et al. Side population cells in developing human liver are primarily haematopoietic progenitor cells. Exp Cell Res. 315 (13), 2141-2153 (2009).
  7. Martin, J., et al. Adult lung side population cells have mesenchymal stem cell potential. Cytotherapy. 10 (2), 140-151 (2008).
  8. Challen, G. A., Bertoncello, I., Deane, J. A., Ricardo, S. D., Little, M. H. Kidney side population reveals multilineage potential and renal functional capacity but also cellular heterogeneity. J Am Soc Nephrol. 17 (7), 1896-1912 (2006).
  9. Mouthon, M. A., et al. Neural stem cells from mouse forebrain are contained in a population distinct from the 'side population'. J Neurochem. 99 (3), 807-817 (2006).
  10. Cordon-Cardo, C. Cancer stem cells. Ann Oncol. 21 (Suppl 7), 93-94 (2010).
  11. Lapidot, T., et al. A cell initiating human acute myeloid leukaemia after transplantation into SCID mice. Nature. 367 (6464), 645-648 (1994).
  12. Yun, E. J., et al. Targeting cancer stem cells in castration-resistant prostate cancer. Clin Cancer Res. 22 (3), 670-679 (2016).
  13. Lupia, M., Cavallaro, U. Ovarian cancer stem cells: still an elusive entity. Mol Cancer. 16 (1), 64(2017).
  14. Zhao, R., et al. AQP5 complements LGR5 to determine the fates of gastric cancer stem cells through regulating ULK1 ubiquitination. J Exp Clin Cancer Res. 41 (1), 322(2022).
  15. Liu, S., et al. A novel lncRNA ROPM-mediated lipid metabolism governs breast cancer stem cell properties. J Hematol Oncol. 14 (1), 178(2021).
  16. Ho, M. M., Ng, A. V., Lam, S., Hung, J. Y. Side population in human lung cancer cell lines and tumors is enriched with stem-like cancer cells. Cancer Res. 67 (10), 4827-4833 (2007).
  17. Chiba, T., et al. Side population purified from hepatocellular carcinoma cells harbors cancer stem cell-like properties. Hepatology. 44 (1), 240-251 (2006).
  18. Haraguchi, N., et al. Characterization of a side population of cancer cells from human gastrointestinal system. Stem Cells. 24 (3), 506-513 (2006).
  19. Zhou, J., et al. Activation of the PTEN/mTOR/STAT3 pathway in breast cancer stem-like cells is required for viability and maintenance. Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (41), 16158-16163 (2007).
  20. Ota, M., et al. ADAM23 is downregulated in side population and suppresses lung metastasis of lung carcinoma cells. Cancer Sci. 107 (4), 433-443 (2016).
  21. Wang, F., et al. ALCAM regulates multiple myeloma chemoresistant side population. Cell Death Dis. 13 (2), 136(2022).
  22. Wang, F., et al. Homoharringtonine synergizes with quizartinib in FLT3-ITD acute myeloid leukemia by targeting FLT3-AKT-c-Myc pathway. Biochem Pharmacol. 188, 114538(2021).
  23. Dong, X. L., Wei, Y. Y., Xu, T., Tan, X. Y., Li, N. Analysis of side population in solid tumor cell lines. J Vis Exp. (168), e60658(2021).
  24. Bhowmick, D., Sheridan, R. T. C., Bushnell, T. P., Spalding, K. L. Practical guidelines for optimization and characterization of the Beckman Coulter CytoFLEX platform. Cytom Part A. 97 (8), 800-810 (2020).

Перепечатки и разрешения

Теги

Hoechst 33342ABC
Эффективное обнаружение популяционных клеток боковой стороны Хёхста с помощью проточной цитометрии
Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.