$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Система секреции VI типа (T6SS) является важной системой секреции белка у грамотрицательных бактерий, широко участвующей в бактериальной конкуренции, антагонизме против эукариотических хозяев и регуляции иммунных реакций хозяина 1,2. Вводя токсичные эффекторные белки в соседние бактерии или эукариотические клетки, T6SS помогает бактериям сохранять конкурентное преимущество в сложных условиях. В последние годы значительная роль T6SS в бактериальной адаптивности, патогенности и микробных взаимодействиях сделала его горячей точкой исследований, особенно у патогенов с множественной лекарственной устойчивостью, где его функции обеспечивают потенциальные мишени для разработки новых антибактериальных стратегий 3,4,5.
Acinetobacter baumannii (Ab) является грамотрицательным условно-патогенным микроорганизмом, широко распространенным в больничных условиях. Благодаря своей высокой лекарственной устойчивости и сильной приспособляемости, он стал важным внутрибольничным патогеном во всем мире 6,7,8. Выживание A. baumannii в сложных микробных средах зависит от систем множественной секреции, среди которых T6SS играет ключевую роль в конкуренции с другими микробами и взаимодействии с хозяином. Благодаря высококонсервативному кластеру генов T6SS и четко определенным функциям, A. baumannii стал идеальной моделью для изучения механизмов T6SS. Кроме того, уникальная структура T6SS у A. baumannii дает отличительную перспективу для дальнейшего раскрытия разнообразия и функций T6SS.
Кластер генов T6SS A. baumannii содержит 12 основных белковых генов (таких как tssA-tssM, лишенный tssJ) и несколько генов с неизвестными функциями (таких как tagX, tagN, tagF и т. д.)2,9,10. Среди них корегулируемый белок гемолизина (Hcp) является важным компонентом T6SS, а его секреция считается отличительной чертой функционального T6SS. Исследования показали, что большая плазмида pAB3 у A. baumannii ингибирует экспрессию T6SS, кодируя TetR-подобный регуляторный белок. Напротив, штаммы, которые потеряли pAB3 (такие как WTR-), могут стабильно экспрессировать и секретировать Hcp, проявляя значительную активность T6SS11. Ген tssM является одним из основных генов T6SS, и его делеция напрямую приводит к инактивации T6SS.
Тем не менее, традиционные методы определения активности T6SS (такие как анализы убийства) имеют ограничения, такие как низкая производительность, плохая воспроизводимость и недостаточная чувствительность, что серьезно ограничивает углубленное изучение и широкое применение T6SS5. Таким образом, разработка эффективных и точных методов обнаружения активности T6SS стала насущной необходимостью в современных исследованиях. Данное исследование направлено на создание и сравнение методов определения активности T6SS на основе флуоресцентного мечения для преодоления недостатков традиционных методов. Благодаря технологии флуоресцентного мечения мы добились количественного мониторинга активности T6SS в режиме реального времени, что является более точным и надежным инструментом для изучения бактериальных взаимодействий. Это исследование подтвердило эффективность методов флуоресцентного мечения и, сравнивая преимущества и недостатки различных стратегий флуоресцентного мечения, предоставило новые перспективы и методологическую поддержку для будущих исследований. Он не только предлагает новые технические средства для исследования T6SS, но и закладывает научную основу для понимания сложных механизмов бактериальных взаимодействий и разработки новых антибактериальных терапевтических стратегий.