Ультразвуковая экстракция липидных биомаркеров из отложений

1. Соберите необходимые материалы

1. Образцы (листья, грязь, грибы, кора, ткани), обычно замороженные, сублимационные, измельченные и гомогенизированные перед экстракцией, извлекаются группами для достижения максимальной эффективности. Извлеките три образца.
2. В зависимости от размера образца могут использоваться флаконы объемом от 4 до 60 мл. Для этого эксперимента используются флаконы из боросиликатного стекла (40 мл) и безопасные для растворителей колпачки. Флаконы, пипетки из боросиликатного стекла и банки для взвешивания следует сжигать при температуре 550 °C в течение 6 ч перед тем, как обеспечить удаление возможных органических загрязнений.
3. Дихлорметан и метанол широко распространены в большинстве лабораторий органической геохимии. Они используются по отдельности для ополаскивания лабораторных инструментов и стеклянной посуды перед использованием. Смесь дихлорметана (DCM) и метанола (MeOH; 9:1) используется во многих лабораториях для эффективного извлечения биомаркеров с широким диапазоном полярностей. Растворители не должны содержать органических загрязнителей.
4. Используйте гидроакустическую баню комнатной температуры. Ультразвуковые аппараты различных размеров и ультразвука с нагревом или без него доступны в крупных розничных магазинах научного оборудования.
5. Штативы для флаконов, которые должны быть водонепроницаемыми, будут помещены в ванну с ультразвуком.
6. Вытяжка для химикатов, одобренная растворителем.

2. Подготовка образца

1. Положите сгоревшую форму для взвешивания на лабораторные весы и держите в таре.
2. Промойте лабораторный шпатель растворителем, затем используйте его для переноса соответствующей массы образца в банку для взвешивания и запишите массу.
   1. Масса образца варьируется в зависимости от содержания в нем органического вещества. Для относительно органического материала (морская грязь) может потребоваться несколько граммов, в то время как для материала, богатого органическим веществом (ткань листьев), может потребоваться гораздо меньше.
3. Переложите весь материал из весовой банки в сгоревшую, предварительно взвешенную и маркированную пробирку. Закройте флакон крышкой, затем выбросьте форму для взвешивания.
4. Выполните шаги 2.1 - 2.3 для каждого извлекаемого образца.

3. Извлечение

1. С помощью предварительно сгоревшей пипетки и лампы перелейте ~20 мл смеси DCM:MeOH (9:1) в каждый флакон (флакон должен быть заполнен примерно наполовину). Закройте флаконы перед тем, как перейти к следующему образцу, чтобы летучие растворители не испарились.
   1. Летучесть DCM и MeOH различна. Испарение экстракционного растворителя за счет неукупоренных пробирок с пробой имеет возможность изменять свою полярность, а значит и экстракцию.
2. Поместите флаконы с образцами в водонепроницаемый штатив для флаконов.
3. Убедитесь, что уровень воды в ультразвуковой ванне достаточен только для погружения пробирок с образцами до верха экстракционного растворителя. Слишком большое количество воды может привести к тому, что флаконы всплывут; Слишком малое количество воды может помешать правильному перемешиванию образцов.
4. Поместите штатив для флаконов с находящимися в нем образцами прямо в ванну с ультразвуком.
5. Ультразвуком в течение 30 минут при комнатной температуре.
6. Снимите штатив для образцов с ультразвукового аппарата. При извлечении отложений дайте ему постоять в течение 30 минут, чтобы произошло оседание. Если вы извлекаете еще один набор образцов, поместите в это время ультразвуковую терапию.
7. Извлеките смесь DCM:MeOH из флакона для экстракции с помощью предварительно сгоревшей пипетки и лампы и вставьте в другой предварительно взвешенный, предварительно сгоревший и маркированный флакон объемом 40 мл.
8. Повторите 3,1 - 3,7 3 раза для всех образцов.
9. Дайте извлеченным образцам высохнуть во флаконах, сняв крышки, и в колпаке, неплотно накрытом куском фольги. Пометьте как «извлеченный остаток» и храните.
10. Обозначьте объединенные экстракты для каждого образца как «TLE».