5.9: Применение компаунда IV

1. Внутрисердечная инъекция

1. Ориентиры и расположение: Расположите мышь или крысу либо в правом боковом положении лежа (левой стороной вверх), либо в спинном положении лежа, и определите ориентиры.
   1. Расположите сердце примерно на уровне точки локтя и чуть левее грудины.
   2. Вставьте иглу между ребрами в точку локтя.
   3. У животного в положении лежа на спине иглу вводят в грудную клетку параллельно столу.
   4. У животного в боковом положении иглу вводят в грудную клетку перпендикулярно столу.
2. Ввод в статью
   1. Убедитесь, что после введения иглы в сердце происходит минимальное перемещение, чтобы предотвратить разрыв мышцы и кровотечение в перикардиальный мешок, так как это ставит под угрозу сердечную функцию.
   2. Аспирируйте шприц, чтобы определить правильное положение. Часто происходит вспышка крови в ступице шприца.
   3. Держите шприц так, чтобы рука не была перемещена на шприце для инъекции после того, как игла была помещена в сердце.
   4. Вводите статью медленно и равномерно.
   5. Извлекайте иглу медленно, чтобы свести к минимуму кровотечение.
   6. Мыши, испытывающие респираторный дистресс, судороги, цианоз, длительную атаксию или другие последствия, связанные с инъекционной травмой, должны быть обследованы ветеринарным персоналом и усыплены в соответствии с его рекомендациями.

Рисунок 1. Внутрисердечная инъекция мышам.

2. Внутривенная инъекция с использованием ретроорбитального сплетения

1. Ориентиры и позиционирование инъектирования
   1. Поместите животное на ровную поверхность в боковом положении лежа.
   2. Введите иглу в медиальный кантус глаза под углом 45° к носу.
   3. Глубина иглы должна быть достаточной для проникновения в ткани конъюнктивы и продвижения за глазную орбиту в глазное сплетение. При размещении иглы она не должна встречаться с костью в задней части глазницы.
   4. Поместите указательный палец на макушку головы, а большой палец — на челюсть.
   5. Аккуратно потяните назад и вниз, чтобы подтянуть кожу и выпячивать глазное яблоко.
   6. Следите за тем, чтобы не оказывать давление на трахею и не ограничивать поток воздуха.
2. Инъекция
   1. Размещайте иглу за глазом, а не внутриглазно.
   2. Убедитесь, что игла имеет минимальное движение после введения в ретроорбитальное сплетение, иначе сосуды разорвутся, что приведет к кровотечению и потере агента в тканях за глазом. Держите шприц так, чтобы рука не перемещалась на шприце для инъекции после того, как игла была размещена в ретроорбитальном сплетении.
   3. Не аспирируйте шприцем, так как вы схлопнете сосуды.
   4. Вводите статью медленно и равномерно.
   5. Извлеките иглу и слегка надавите на глаз, чтобы остановить кровотечение и обеспечить гемостаз.
   6. Мыши, испытывающие отек, конъюнктивит или другие последствия, связанные с инъекционной травмой, должны быть обследованы ветеринарным персоналом и пролечены или усыплены в соответствии с их рекомендациями

Рисунок 2. Ретроорбитальная инъекция мышам.

3. Инъекция подушечки ноги

1. Для удержания поместите животное в удерживающую трубку с изолированной одной задней ногой и разгибайтесь, захватывая кожу над коленом.
2. Перед инъекцией протрите ногу водой или спиртом, чтобы удалить мусор.
3. Введите подкожно в центр задней лапы, образуя небольшой пузырь в месте инъекции. Чтобы избежать повреждения кровеносного сосуда, проходящего по всей длине стопы, делайте инъекцию от средней линии, параллельной сосуду.

Рисунок 3. Инъекция подушечки лапы мышам и крысам.

Внутрисердечная, ретро-орбитальная и подушечка стопы — вот некоторые из специализированных методов инъекций, которые биомедицинские исследователи используют для экспериментов, требующих доставки соединений этими нетипичными путями.

Внутрисердечная инъекция доставляет соединение в левый желудочек, позволяя веществу напрямую попадать в артериальный кровоток. Ретро-орбитальный путь является альтернативой инъекции в хвостовую вену и используется для доставки соединения в венозный кровоток. А инъекция подушечки лапы включает в себя подкожное введение препарата в заднюю лапу животного. В этом видео будут проиллюстрированы соображения, процедуры и применение этих специальных методов инъекций.

Давайте начнем с некоторой справочной информации и вещей, которые следует учитывать перед началом этих административных процедур.

Внутрисердечное введение часто осуществляется с помощью ультразвука, чтобы направить иглу в правильное место в сердце. Однако, при правильном выполнении с использованием правильных ориентиров, введение может быть выполнено без использования ультразвуковой визуализации. Обратите внимание, что процедура требует использования общего анестетика, а для процедур выживания разрешается только одна инъекция на животное. Как правило, для этой инъекции используется игла 27-30 калибра, а максимальный объем введения составляет 100 и 300 микролитров для мышей и крыс соответственно.

Для внутривенного введения через ретроорбитальный путь необходимо иметь четкое представление о структуре орбитальных вен. У мыши есть пазуха, в которой сходятся несколько вен, а именно надглазничная, дорсальная носовая, нижняя пальпебральная и поверхностная височная вены. Тогда как у крыс имеется сеть или сплетение из нескольких вен. Инъекция выполняется непосредственно в пазуху носа или сплетение. Как и внутрисердечная, эта процедура также требует использования общей анестезии, и рекомендуется делать только одну инъекцию на каждый глаз в день, а всего две инъекции на глаз для процедур выживания. Как и при всех инъекциях, следует выбирать иглу самого маленького размера - обычно 27-30 калибра - и рекомендуемый максимальный объем - 150 ? Л на глаз.

Несмотря на споры, использование инъекций подушечки стопы все еще требуется для некоторых исследований, обычно связанных с воспалением и ростом опухоли. Обратите внимание, что инъекции можно выполнять только на одной ноге, но не на двусторонней основе. А измерения подушечек ног следует проводить ежедневно, как только появился явный отек. Для инъекции рекомендуется использовать иглу 29-30 калибра, максимальный рекомендуемый объем составляет 50 мкл. После любой инъекции все животные должны находиться под тщательным наблюдением на предмет признаков боли, уровня потребления пищи и нормального передвижения. Как правило, животное должно быть усыплено, когда поражение или опухоль препятствуют способности животного передвигаться или дотягиваться до пищи и воды.

Теперь давайте узнаем о процедурах инъекций, начиная с внутрисердечной инъекции. Мы продемонстрируем процедуру на мыши, но ориентиры и протокол для крысы схожи.

Первым делом необходимо подготовить шприц. Вспомните иглу 29 калибра и шприц объемом 1 куб. см подходят для мышей. А максимальный объем для внутрисердечного введения составляет 100 микролитров. При заборе раствора оставляйте небольшое количество воздуха между поршенем и материалом для впрыска. Это необходимо для того, чтобы кровь попала в шприц при введении в сердце.

Для начала обезболите животное с помощью ингалянта или инъекционных анестетиков. Ознакомьтесь с рекомендациями по поддержанию общей анестезии в другом видео этой коллекции. Затем расположите животное в положении лежачего положения на изолированной платформе. Затем прикрепите передние конечности к платформе и поместите кусок ленты горизонтально поперек живота над бедрами. Это необходимо для того, чтобы еще больше стабилизировать животное и избежать любых движений после введения иглы. Далее с помощью тампона смочите грудь животного 70% спиртом.

Чтобы точно определить место инъекции, сначала найдите мечевидный кость и манубриозную грудину. Затем найдите середину между двумя ориентирами. В 1-2 мм слева от этой точки находится ориентир для введения иглы. С помощью аппликатора с ватным наконечником нанесите повидон-йод, чтобы отметить место введения иглы.

Для инъекции следует направить иглу перпендикулярно столу, и ввести ее на глубину около 2 мм. Затем приложите к поршню очень небольшое противодавление. Ярко-красная насыщенная кислородом кровь должна поступать в концентратор шприца, что подтверждает правильность размещения. Удерживайте шприц на одном и том же месте и медленно и неуклонно вводите материал в течение 30–60 секунд. Быстрая инъекция может привести к слипанию клеток и закупорке артерий, шоку для системы из-за того, что температура вещества значительно ниже температуры тела, или к расширению желудочка и нарушению сердечного ритма.

После того, как материал выйдет из шприца, медленно и осторожно извлеките иглу без какого-либо бокового движения, так как это может повредить сердечную мышцу. Затем немедленно освободите ленту от передних лап и живота и поместите животное в лежачее положение в чистую клетку с достаточно глубокой подстилкой, чтобы она выполняла роль изолирующего слоя. Обратите внимание, что одна половина этой клетки для восстановления находится на источнике отопления, а животное, находящееся под наркозом, находится на нагреваемой стороне клетки. Это предотвращает переохлаждение, и по мере того, как животное восстанавливается после анестезии, оно сможет отойти от нагретой стороны по своему желанию.

Далее давайте узнаем о методе внутривенной инъекции с использованием ретроорбитального сплетения у крыс. Опять же, мы продемонстрируем процедуру на мыши, но ориентиры и протокол для крыс схожи.

Приложите соответствующую иглу к выбранному шприцу и заполните материал для инъекции. Помните, что обычно используется игла 27-30 калибра с максимально маленьким шприцем и максимальным объемом 150 микролитров.

Чтобы начать процедуру, сначала сделайте животное под наркозом. Затем положите его на ровную поверхность в положение бокового лежания. Теперь положите указательный палец на макушку, а большой палец на челюсть, и осторожно потяните назад и вниз. Это делается для подтяжки кожи и выпячивания глазного яблока. Следите за тем, чтобы не оказывать давление на трахею и не ограничивать поток воздуха. Если вы планируете несколько инъекций, применяйте местный офтальмологический анестетик, такой как тетракаин или пропаракаин.

Ввести иглу в медиальный кантус глаза под углом 45? угол к носу. Глубина должна быть достаточной для проникновения в ткани конъюнктивы и продвижения в глазную орбиту и в пазуху. Он не должен встречаться с костью в задней части глазницы. Чтобы избежать разрыва кровеносных сосудов, убедитесь, что игла имеет минимальное движение после введения. Не стоит аспирировать, так как это приведет к коллапсу сосудов. Вводите статью медленно и равномерно. Затем осторожно извлеките иглу и слегка надавите на глаз, чтобы остановить кровотечение и обеспечить гемостаз.

Наконец, давайте рассмотрим метод инъекции подушечки лапы у мышей и крыс. Для начала прикрепите соответствующую иглу и наполните шприц нужным объемом. Эту процедуру можно проводить и на сознательных животных.

Поместите животное в удерживающую трубку так, чтобы одна задняя нога была изолирована и вытянута, взявшись за кожу над коленом. Перед инъекцией протрите ногу водой или спиртом, чтобы удалить мусор. Чтобы избежать кровеносного сосуда, который проходит по всей длине стопы, ориентир для инъекции находится в центре, но недалеко от средней линии, ближе к пальцам ног.

Поместите скос иглы вверх в месте инъекции, направив его к пятке. Вводите изделие медленно и равномерно, чтобы избежать быстрого растяжения тканей стопы. Это приведет к тому, что подушечка стопы будет опухать, поскольку материал для инъекции заполняет это подкожное пространство. На ноге маленького животного отек от инъекции может распространяться на пятку, тогда как у более крупного животного он будет более локализованным.

После инъекции ежедневно наблюдайте за животными и если присутствует стойкая отечность или если есть поражения или опухоли в результате протокола эксперимента, то, используя штангенциркуль, выполните измерение подушечки ноги. Этот прибор измеряет толщину стопы в миллиметрах и помогает количественно определить отек.

Теперь давайте обсудим несколько примеров экспериментов с использованием интракардиальных, ретро-орбитальных инъекций и инъекций в подушечки стопы.

Одним из многих применений внутрисердечного введения является разработка животной модели метастазирования рака. Здесь исследователи использовали этот путь для введения опухолевых клеток, которые обладают склонностью к колонизации костей. В последующие дни они изучали рост опухолей в костях с помощью рентгеновских и флуоресцентных методов визуализации. В другом исследовании ретроорбитальный путь использовался для введения специфических антител, которые маркируют нейтрофилы. Затем с помощью прижизненной визуализации ученые смогли отследить характер миграции меченых клеток.

Наконец, исследователи часто используют инъекцию подушечки ноги для анализа воспалительной реакции. В этом эксперименте исследователи выделили мононуклеарные клетки периферической крови из образцов крови человека, смешали их с различными тестовыми антигенами и ввели растворы в подушечку ноги животного. Наконец, они провели измерения стопы, чтобы количественно оценить реакцию отека из-за различных антигенов.

Вы только что посмотрели последнюю статью JoVE об обычных и специализированных методах введения соединений.

Подводя итоги, в первой части мы рассмотрели наиболее распространенный парентеральный путь. Во второй главе мы рассмотрели энтеральные и местные процедуры. Третья часть была посвящена первому набору нетипичных процедур, таких как внутрикожная, интраназальная и внутричерепная у новорожденных. Наконец, здесь мы рассмотрели три дополнительных пути, которые биомедицинские исследователи используют в лабораториях для конкретных целей.

После просмотра этого сериала у вас должно быть гораздо лучшее понимание различных методов введения, а также вы должны знать общие и конкретные соображения, связанные с этими протоколами введения составных соединений. Как всегда, спасибо за просмотр!