Основные процедуры по уходу

Поскольку мыши и крысы составляют более девяноста процентов животных, используемых для биомедицинских исследований, надлежащий уход за этими организмами имеет решающее значение для исхода экспериментов. Эти процедуры по уходу начинаются с самого начала с распаковки животных из грузовых контейнеров, смены клетки, поддержания надлежащих условий содержания, обеспечения соответствующего питания и подходящей окружающей среды. Несмотря на то, что существуют общие процедуры, применимые к большинству мышей и крыс в лаборатории, некоторые животные, например, с ослабленным иммунитетом, требуют дополнительной внимательности для поддержания их в экспериментальных целях.

В этом видео будут описаны стандарты и основные процедуры ухода как за иммунокомпетентными, так и за иммунокомпрометированными животными. И, наконец, мы проиллюстрируем несколько примеров экспериментов, показывающих, как ученые используют эти знания для различных исследовательских целей.

Прием животных из других учреждений представляет опасность для животных, уже содержащихся в учреждении, так как во время транспортировки транспортные ящики могут контактировать с патогенными агентами. Поэтому при распаковке транспортных контейнеров следует применять надлежащую процедуру.

Перед тем, как работать с любыми животными, важно надеть соответствующие средства индивидуальной защиты или СИЗ. Минимальное количество СИЗ для ношения — это лабораторный халат, перчатки, защитные очки и маска хирургического типа, которая снижает воздействие пыли и аллергенов. Следующим шагом является выбор подходящих клеток для поступающих животных. Затем обставьте клетку подходящими материалами для подстилки и гнездования. И отнесите подготовленные клетки в приемное помещение с регулируемой температурой, чтобы они были готовы к передаче до прибытия животных.

По прибытии груза поместите транспортировочные ящики в надежное место в приемной комнате. Осмотрите контейнер на предмет повреждений и продезинфицируйте внешние поверхности, чтобы уничтожить любые вредные патогены. Убедитесь, что дезинфицирующее средство находится в контакте с коробкой не менее 15-30 минут, в соответствии с рекомендациями производителя. Затем поместите контейнер в станцию передачи животных, или ATS. Эта станция обеспечивает высокоэффективный поток воздуха от твердых частиц или HEPA, отфильтрованный в одном направлении внутри колпака. HEPA защищает пользователя от аллергенов и защищает животных от окружающего воздуха в помещении, сводя к минимуму вероятность заражения. Далее откройте транспортный контейнер и оцените общее состояние здоровья грызунов. Обратите внимание на любое животное, которое кажется раненым или больным. После этого поместите их в уже собранную клетку по нужным групповым размерам, накройте клетку крышкой из проволочного бруса и закрепите разделитель, чтобы создать две зоны. Выберите подходящий корм и положите его на одну сторону, а вторую оставьте открытой, чтобы обеспечить лучшую циркуляцию воздуха. Наконец, если животные не размещаются на стойке с автоматическим поением, добавьте бутылку с водой, чтобы обеспечить достаточное снабжение водой. Помните, что ATS должна быть продезинфицирована в конце каждого сеанса, а воздуходувка должна быть выключена во время дезинфекции.

Для смены клетки поместите две клетки - свежую клетку с подходящим материалом подстилки и использованную клетку с животными - в САР. Животных можно переносить из старой клетки в новую вручную или с помощью мягких щипцов. Оба эти метода были рассмотрены в другом видео этой коллекции. Помните, что за один раз можно открыть только одну клетку с животными. Для самцов мышей или самок с пометом было продемонстрировано, что перенос места гнездования мышей в чистую клетку помогает животным с переходом. После того, как крышка клетки будет установлена на новую клетку, переложите корм со старой крыши клетки на новую крышу и при необходимости добавьте больше корма. Далее установите верхнюю часть барьера, и верните клетку на стойку. Хорошей практикой является смена перчаток между клетками или между группами.

Процедура распаковки для животных с ослабленным иммунитетом немного отличается, так как вещи должны быть стерильными. Рекомендуется, чтобы воздуходувка внутри капота была включена не менее чем за 24 часа до использования. Как и для иммунокомпетентных животных, по прибытии груза опрыскайте контейнер дезинфицирующим раствором в приемном помещении и оставьте его неоткрытым на 15-30 минут. В ATS, предназначенной для мышей с ослабленным иммунитетом, распылите на кожух с ламинарным потоком 70% этанол за 30 минут до манипуляций с животными. Идеально, если в этой деятельности по распаковке участвуют два человека: один человек должен быть стерильным техником, одетым в стерилизованный паром халат и двойную пару стерильных перчаток для работы с животными с использованием асептических методов, а другой должен быть нестерильным техником, одетым в чистый изоляционный халат и пару перчаток для работы с загрязненными предметами. Оба должны быть одеты в маску, чепчик для волос и защитные очки.

Прежде чем открыть транспортный контейнер внутри капота, поместите в него все принадлежности и клетку и опрыскайте их снаружи спиртом. А по прибытии груза поместите полученный ящик для животных в капот и опрыскайте его также 70% этанолом. Существует два варианта стерильных клеток: либо стандартные клетки, которые были упакованы и стерилизованы паром, либо одноразовые блоки, которые были стерилизованы с помощью облучения поставщиком.

Начните процедуру распаковки с вскрытия стерильного корма, после чего следует вскрытие транспортной коробки. На этом этапе дрессировщик должен выбросить первую пару стерильных перчаток. Затем нестерильный человек разворачивает стерильную клетку и асептически передает ее дрессировщику, который затем снимает чепчик и крышку проволочной решетки и помещает их вверх ногами в капюшон. Впоследствии трубка сиппера на клетке заполняется водой на станции, расположенной в вытяжке. Наконец, дрессировщик помещает животное в клетку, закрепляет его крышкой из проволочной решетки, добавляет еду и устанавливает чепчик на место. Обратите внимание, что воздуходувка вытяжки должна оставаться включенной все время для поддержания стерильной среды. В конце нестерильный человек снимает населенную клетку с капюшона и помещает ее на соответствующую стойку. Чтобы избежать возможного перекрестного заражения между группами, дрессировщик должен менять перчатки после каждого грузового контейнера.

Для смены клетки у животных с ослабленным иммунитетом подготовка капюшона и клеток и СИЗ такая же, как и при распаковке этих животных. И техника переноса такая же, как у иммунокомпетентных животных, но в стерильных условиях.

Теперь давайте поговорим о надлежащих жилищных условиях для животных, что является еще одним важным аспектом оказания необходимой помощи. Мыши и крысы в основном содержатся в клетках типа обувных коробок с твердым дном, содержащим подстилочный материал. Типичная клетка для мышей обеспечивает 75 квадратных дюймов площади, что достаточно максимум для 5 взрослых мышей. С другой стороны, клетка для крыс имеет площадь 142 квадратных дюйма и подходит для 2 взрослых крыс. Статические клетки обычно накрываются крышкой из проволочного стержня, а на верхнюю часть клетки добавляется фильтрующий материал в качестве крышки. Индивидуально вентилируемые клетки, или IVC, также имеют крышку и крышку из проволочной планки, но они размещаются на стойке, которая обеспечивает приток воздуха в клетку. Это избавляет от необходимости менять клетку так часто, как и статические клетки, что может быть полезно для животных с ослабленным иммунитетом.

Во всех клеточных системах предусмотрена подача пищи и воды. В клетке для животных либо размещаются кормушки, либо часть проволочной крышки используется для хранения корма. Корм должен быть размещен так, чтобы он не был испачкан животными. Вода обычно подается через бутылку с водой, расположенную в верхней части клетки, или через автоматический клапан для питья, который является встроенным компонентом клетки для животных. В варианте с клапаном поения, когда клетка закреплена на решетке, вода подается в трубку для автоматической системы поения, которая предназначена для удовлетворения потребностей животного на всей территории животноводческого помещения.

В Руководстве по уходу и использованию лабораторных животных говорится, что все инструменты для содержания в клетках должны дезинфицироваться не реже одного раза в 2 недели. Некоторые клетки и аксессуары могут нуждаться в более частой замене, так как это продиктовано уровнем запаха и аммиака в вольере.

Теперь поговорим о правильном питании и водоснабжении иммунокомпетентных и иммунокомпрометированных животных. Существует множество коммерчески доступных кормов с переменным белковым, углеводным и жировым составом. В идеале корма должны состоять на 15-19% из белка, на 44% из углеводов и на 4-9% из жира. Для животных с ослабленным иммунитетом убедитесь, что корм был стерилизован.

Водопроводная вода, или обратный осмос, то есть вода обратного осмоса, может быть использована для иммунокомпетентных животных, но для животных с иммунодефицитом вода может быть источником загрязнения, и поэтому нуждается в стерилизации. Стерильность в воде поддерживается путем добавления 2 капель 12 молярной соляной кислоты на 8 литров воды обратного осмоса, что подкислит воду до pH 2,5-3 и ограничит рост бактерий. Затем разлейте воду по отдельным бутылкам и накройте их алюминиевой фольгой. Поместите крышки от бутылок с сипперами отдельно в автоклавный пакет, и поместите все в автоклав для стерилизации паром.

Теперь давайте обсудим стандартные условия окружающей среды, необходимые для ухода за животными.

На уровне клетки социальное жилье является обязательным, если это не обосновано научно или если животное несовместимо со всеми остальными. Обогащение окружающей среды бумажными хижинами и материалами для гнездования позволяет животным проявлять видоспецифичное поведение, такое как строительство гнезд и рытье нор, что, в свою очередь, снижает уровень стресса и улучшает общее благополучие животных. Материалы для гнездования также обеспечивают спальную зону, насыщенную успокаивающими феромонами, что помогает содержать нескольких самцов мышей в одной клетке. Как упоминалось ранее, перемещение места гнездования в чистую клетку при смене клетки помогает предотвратить агрессию, особенно у самцов, поскольку животные попадают в новую среду. Для обнаженных животных следует подумать о предоставлении дополнительной подстилки и измельченных бумажных материалов для гнездования в клетках, чтобы помочь терморегуляции.

На комнатном уровне температура для мышей и крыс должна быть между 68 и 79? F. Уровень влажности в помещении должен составлять 30-70%, так как более низкий уровень может привести к состоянию, известному как кольцехвост. Третий параметр помещения – освещение. Это включает в себя интенсивность света и циклы. Как правило, в помещении для животных установлен 12-часовой световой / 12-часовой темный цикл. Интенсивность освещения должна варьироваться в соответствии с активностью в помещении. Когда работают технические специалисты, можно использовать более высокие уровни освещения. Тем не менее, он должен быть снижен примерно до 325 люкс после завершения всех мероприятий. Наконец, поток воздуха в помещении также должен тщательно контролироваться. Каждый час должно происходить минимум 10-15 воздухообменов 100% свежего воздуха. Это уменьшает количество микробов и запахов в помещении для животных.

Наконец, давайте посмотрим, как исследователи используют эти знания о жилье лабораторных животных, диете и предпочтениях в окружающей среде в своих экспериментах.

Как обсуждалось ранее, лабораторные животные обычно демонстрируют поведение при строительстве гнезд, что снижает стресс, и исследователи использовали это в качестве индикатора благополучия животных. В этом конкретном эксперименте ученые разработали непредвзятую систему для оценки построенного гнезда, а затем использовали ее для изучения влияния температуры окружающей среды на поведение при строительстве гнезда. Как видите, повышение температуры привело к значительному снижению оценки, что подчеркивает роль температуры окружающей среды в благополучии животных.

Учитывая, что мыши и крысы любят углеводы, исследователи использовали корма разной формы для проверки двигательной функции животных. Это включает в себя анализ ловкости рук при выполнении различных задач по обработке пищевых продуктов, а также изучение поведения при достижении после хирургического или фармакологического вмешательства.

Наконец, известно, что мыши и крысы ведут ночной образ жизни и не любят освещенные места. Ученые используют эти знания для создания среды для изучения тревожности у этих видов. Например, здесь исследователи выводили животных в простое открытое поле и изучали время, проведенное мышами дикого типа и нокаута во внутренней и внешней полевых зонах, чтобы проанализировать влияние гена нокдауна на тревожное поведение.

Вы только что посмотрели введение JoVE в основные процедуры по уходу за мышами и крысами. Теперь вы должны лучше понимать меры, которые необходимо предпринять, чтобы гарантировать, что окружающая среда и обращение с этими животными не причиняют никакого вреда здоровью животных, а также вы должны знать, как исследователи могут изменять эти параметры для достижения различных научных целей. Как всегда, спасибо за просмотр!