Удаление куколок у насекомых: метод исследования куколок

-Чтобы получить доступ к развивающейся куколке, удалите пупарий после отделения эпителия куколки от кутикулы или после стадии куколки Р5. Для начала поместите неповрежденную куколку брюшной стороной к себе. С помощью щипцов удерживайте пупарий в пустом пространстве между передним концом оболочки и головкой куколки. Затем аккуратно сломайте и удалите переднюю часть пупария, чтобы обнажить головку.

Сохраняя вентральную ориентацию, используйте щипцы для создания небольших разрывов вдоль передне-задней оси пупария и обеспечения образования непрерывного разрыва в процессе. Будьте осторожны, чтобы не повредить ткани куколки непосредственно под ней. Затем продолжайте разбивать пупарий от зазора наружу, по одной части за раз, и в процессе раздвигайте разорванную оболочку. С помощью тонкой влажной кисти возьмите обнаженную куколку для дальнейшего исследования. В примере протокола мы увидим, как удалить пупарий у Drosophila guttifera и подготовить куколку к визуализации.

-Чтобы начать удаление пупария, прикрепите кусок двустороннего скотча к листу бумажного полотенца. Поместите куколку на двусторонний скотч брюшной стороной вверх. Найдите пространство между передней стороной пупария и внутренней куколкой. Захватите и удалите пупарий вокруг этой щели с помощью щипцов, а также обнажите переднюю сторону головки куколки.

Введите кончик щипца, переместив его параллельно передне-задней оси. Поднимите кончик щипцов, чтобы локально сломать пупарий. Повторяйте это действие до тех пор, пока поломка не достигнет задней части пупария. Убедитесь, что между пупарием и ногами куколки образовался зазор, и сломайте брюшную сторону пупария, минимизировав повреждение внутренней куколки. Разбив пупарий как можно сильнее, выньте куколку с помощью тонкой кисти. Поместите куколку на лист папиросной бумаги, смоченный ddH2O, и поместите его в пластиковую чашку Петри. Сразу же делайте фотографии, так как экспонированная куколка уязвима и легко сохнет.