дрозофила Обусловливание ухаживания: метод проверки обучаемости и памяти у мух

- Во-первых, изолируйте одиночных наивных или неспаренных самцов Drosophila melanogastor. Затем, чтобы подготовить самцов, добавьте самку, которая уже спаривалась и поэтому не восприимчива к ухаживанию. Самец демонстрирует типичное брачное поведение, такое как ориентация на нее, следование за ней, похлопывание ее передней ногой, а также вытягивание и вибрация крыла, чтобы издать брачную песню. Он также может пытаться вылизывать и спариваться. Какие бы усилия ни прилагались, самка остается невосприимчивой, а самец испытывает отвержение. Таким образом, он учится не ухаживать за ранее спаренной самкой.

Чтобы проверить память самца, дайте ему отдохнуть, а затем познакомьте его с другой спаренной самкой. Обученный самец не будет пытаться ухаживать за этой мухой, потому что он сохраняет память о прошлом отвержении. В примере протокола мы увидим, как обрабатываются мухи на этапах обучения и тестирования теста на обусловливание ухаживания для оценки кратковременной и долгосрочной памяти.

- Начните с обезболивания всех взрослых особей из четырехдневных брачных файлов. Разделите полы и пересадите одиночных спаренных самок в каждую из 12 лунок одного ряда жилого блока. Затем, используя аспиратор и без анестезии, извлеките наивных самцов из их домашних колодцев и перенесите их в лунки, содержащие предварительно спаренных самок. Повторите этот процесс во втором ряду, чтобы установить еще 12 пар.

Чтобы проверить обучение или кратковременную память, выполните эту настройку на рассвете и дайте периоду тренировки продлиться один час. Чтобы проверить долговременную память, расставьте пары за четыре часа до субъективного рассвета и дайте тренировке продолжаться в течение восьми часов.

- Для того, чтобы обучение и память закрепились, важно, чтобы самцы не спаривали, поэтому периодически проверяйте пары в период обучения, чтобы убедиться, что самцов отбраковывают.

Когда период обучения закончится, аккуратно извлеките самцов из лунок с помощью аспиратора, а не углекислого наркоза. Загрузите самцов в новый жилой блок. Для эксперимента по обучению немедленно протестируйте самцов после обучения, без периода отдыха. Для эксперимента с кратковременной памятью дайте самцам час отдыха перед началом тестового этапа. Для эксперимента с долговременной памятью самцы дают отдых до следующего субъективного рассвета.

Чтобы подготовиться к тестовому этапу эксперимента, обезболите сспавшихся самок и переведите их на новую нормальную пищу мерзости. Подождите не менее часа, чтобы мухи оправились от анестезии. Далее подготовьте тестовую установку. Убедитесь, что у вас наготове видеорегистраторы для записи активности на аренах ухаживания.

Чтобы начать тест, с помощью мягкой аспирации переведите подопытного самца из жилого блока в брачный манеж с закрытыми перегородками. Перемещайте входные отверстия между аренами, пока все 18 арен не будут заполнены одиночными самцами. Затем, используя ту же технику, перенесите отдельных спаренных самок на каждую из 18 арен, но на противоположную сторону от разделителей. Теперь осторожно переверните арену для ухаживания и поместите ее под видеокамеру так, чтобы отверстия в колодцах были направлены вниз к белой поверхности скамейки. Затем снимите разделители и начните запись видео. Записывайте не менее 10 минут активности. Когда эксперимент закончится, удалите мух с арен с помощью вакуума и проветрите камеры ухаживания не менее 10 минут, прежде чем они будут использованы повторно.