дрозофила Вскрытие имагинального диска личинками: метод наблюдения за развивающимися эпителиями

- Чтобы начать вскрытие, используйте одну пару щипцов, чтобы захватить тело личинки посередине, а вторую пару — разорвать личинку пополам. Затем зажмите крючок для рта на переднем конце, удерживая тело с задней стороны. Далее надавите щипцами, удерживающими рот внутрь тела. С помощью задних щипцов сложите стенку тела наизнанку.

При этом препарате слюнные железы и кишечник могут быть легко идентифицированы и удалены, чтобы выявить мозг и имагинальные диски. Видны усики, глаза, ноги, крылья и междужурные диски. После фиксации перенесите личиночный препарат на предметное стекло с монтажной средой, где диски могут быть дополнительно рассечены. В примере протокола мы увидим, как рассекать имагинальные диски крыльев с помощью этого личиночного препарата.

- Для начала с помощью деревянной палки или тупых щипцов перенесите блуждающих личинок третьего возраста в чашку Петри с PBS. Затем генотипируйте их под флуоресцентным светом, чтобы определить подходящие флуоресцентные маркеры для мозаичных личинок. Прежде чем приступить к работе, промойте личинок PBS. Затем под микроскопом вскрытия с помощью двух пар щипцов защемите центр личинки, и разорвите тело пополам. Затем зажмите крючки для рта, одновременно проталкивая рот к телу, чтобы вывернуть тело наизнанку. Затем удалите ненужные материалы, такие как слюнные железы и жировые тела. Теперь личинки подготовлены к фиксации и окрашиванию антителами, что подробно описано в текстовом протоколе.

Перенесите окрашенные тканевые препараты на предметное стекло микроскопа с помощью двухмиллилитровой пластиковой переводной пипетки. Затем с помощью щипцов переместите отдельные личинки в капли монтажной среды на предметное стекло микроскопа. Теперь с помощью щипцов изолируйте имагинальные диски. Начните с удержания конца рассеченной ткани и оттягивания мозговых и глазных антенных дисков с помощью других щипцов. Держите мозг готовым к использованию.

Теперь найдите имагинальные диски крыла. Имагинальные диски крыла приклеены к боковой стороне рассеченной ткани. Далее закрепите ткань одним щипцом, и аккуратно соскребите диски крыльев. Затем расположите мозги рядом с дисками крыльев, чтобы защитить их от раздавливания покровным стеклом. Теперь аккуратно накройте конструкции покровным стеклом, и заклейте покровное стекло лаком для ногтей. Храните предметное стекло при температуре 4 градуса Цельсия.